四線測(cè)試法被認(rèn)為是目前為止zui好的消除引線電阻引入誤差（或?qū)⑵鋵⒅磷钚〉模┑臏y(cè)試方案，作為初學(xué)者來(lái)說(shuō)，除了了解測(cè)試方法，了解它的原理及優(yōu)勢(shì)也是非常有必要的，今天安泰測(cè)試就給大家介紹一下四線法測(cè)量的原理及特點(diǎn)：

（一）、四線法原理介紹

四線法，我們也可以稱為四端點(diǎn)測(cè)量技術(shù)、開爾文測(cè)量法，是一種電子線路中的阻抗測(cè)量法，主要用于電阻阻值的精確測(cè)量。

（二）、二線法測(cè)量的局限

當(dāng)我們?cè)谑褂枚€法測(cè)量電阻時(shí)，根據(jù)歐姆定律R=U/I，不論是近距離還是遠(yuǎn)距離測(cè)量阻值，測(cè)量結(jié)果都會(huì)受到導(dǎo)線電阻的影響，導(dǎo)致電壓下降，遠(yuǎn)距離測(cè)量時(shí)由于導(dǎo)線更長(zhǎng)造成的壓降(電壓下降)更大而造成不可忽略的影響。在實(shí)際測(cè)量中受限于某些條件而只能遠(yuǎn)距離測(cè)量電壓，此時(shí)由于遠(yuǎn)距離測(cè)量中大電流流經(jīng)長(zhǎng)導(dǎo)線造成了不可忽視的壓降，而對(duì)測(cè)量電阻阻值造成影響。

（三）、四線法如何精準(zhǔn)測(cè)量

四線式測(cè)量方法示意圖

四線法測(cè)量由額外導(dǎo)線引至伏特計(jì)，則可避免測(cè)量電阻時(shí)受到導(dǎo)線電阻造成的壓降影響。由于伏特計(jì)內(nèi)電阻極大，流經(jīng)伏特計(jì)的電流值相比于流經(jīng)待測(cè)電阻電流值小到可忽略，所以額外導(dǎo)線產(chǎn)生的壓降不會(huì)對(duì)測(cè)量結(jié)果造成影響。此時(shí)所測(cè)電壓與安培計(jì)所測(cè)電流之比即可近似為被測(cè)電阻阻值。

（四）、四線法測(cè)量的優(yōu)點(diǎn)

1、導(dǎo)線電阻產(chǎn)生的電壓差幾乎為零，不影響電壓測(cè)量結(jié)果。

2、由于僅有極小部分的電流(小到可忽略)流經(jīng)伏特計(jì)，故也不影響電流測(cè)量結(jié)果。

3、待測(cè)電阻為低電阻，同樣可精準(zhǔn)測(cè)量。

你對(duì)四線制測(cè)量方法了解多少呢？你會(huì)使用四線制測(cè)量嗎？如果您在用四線制測(cè)量過(guò)程中有什么問(wèn)題，歡迎訪問(wèn)安泰測(cè)試網(wǎng)。

LCR數(shù)字電橋是用來(lái)仿真元器件正常工作條件下的電感，電容，阻抗的儀器，能夠執(zhí)行從毫歐至兆歐低頻到 GHz 的元器件阻抗分析，測(cè)量參數(shù)包含 Z、Y、θ、Rs（ESR）、Rp、Rdc（直流電阻）、X、G、B、Cs、Cp、Ls、Lp、D（tanδ）、Q，更進(jìn)一步的還包括測(cè)量速度，以及在測(cè)試中施加電壓或者電流偏置的功能，廣泛用于半導(dǎo)體元件測(cè)試、介質(zhì)材料測(cè)試、半導(dǎo)體元件測(cè)試等，今天安泰測(cè)試就給大家分享一下LCR數(shù)字電橋安全操作指南，希望大家在使用LCR數(shù)字電橋能夠注意：

一、確保正確接地

1、一定要使用儀器隨附的三相交流電源線。

2、進(jìn)行正確的接地可防止產(chǎn)生對(duì)儀器和操作人員有害的靜電。

3、不要使用會(huì)導(dǎo)致接地保護(hù)失效的無(wú)保護(hù)接地導(dǎo)體的引出線、電源線或自耦變壓器。

4、使用前務(wù)必檢查交流電源的質(zhì)量和極性。一般情況下儀器使用的電壓為 100V、120V、220V( 誤差 ±10%) 或 240V( 誤差+5%/-10%)。典型的接地電阻值 <1Ω，零線和地線之間的電壓 <1V，必要時(shí)可能需要配置不間斷電源 [UPS]。

二、LCR數(shù)字電橋的使用注意事項(xiàng)

1、為保證操作人員的人身安全，在將電源接至儀器前，應(yīng)檢查使用場(chǎng)合的電源線、零線、保護(hù)地線是否與大地連接，以防機(jī)殼帶電。

為確保儀器的安全，在將電源接至儀器錢，應(yīng)查看儀器的電源是 AC220V 還是 AC110V。因?yàn)榇蟛糠謨x器的電源接口可作AC220V（AC240V）、AC110V（AC110V）的選擇。若不注意而插錯(cuò)電源，輕則燒斷保險(xiǎn)，重則燒壞儀器。一單保險(xiǎn)燒壞，所更換保險(xiǎn)的標(biāo)稱電源值不能超過(guò)儀器上所指示的電流值，否則接錯(cuò)電源后保險(xiǎn)不起作用會(huì)燒壞儀器。

2、預(yù)熱

接通電源后，顯示屏應(yīng)有顯示。有自檢功能的儀器，應(yīng)在其自檢通過(guò)后，預(yù)熱 10 分鐘或按說(shuō)明書規(guī)定時(shí)間預(yù)熱后開始使用。

3、接線

一般 LCR 表的測(cè)量段接口有五端。分別為：HD（電流高端）、HS（電壓高端）、LS（電壓低端）、LD（電流低端）、GND（接地端），每個(gè)測(cè)試端均有屏蔽層與機(jī)殼相連。用作測(cè)量的電纜長(zhǎng)度應(yīng)盡量短，有屏蔽的電纜較理想。

4、遵守防靜電規(guī)程

靜電放電（ESD）可能損傷或損壞電子元件。一定要盡可能在防靜電工作區(qū)進(jìn)行測(cè)試。將產(chǎn)生靜電的材料與所有元件分開至少一米遠(yuǎn)。

5、檢查溫度和濕度

請(qǐng)務(wù)必將儀器保存在潔凈、干燥的環(huán)境中。典型的最佳工作溫度為 23° C 至 -5° C，環(huán)境溫度不要超過(guò) 35° C。

6、經(jīng)常檢查并及時(shí)清潔散熱孔和散熱風(fēng)扇。

7、保持工作環(huán)境整潔。塵土可能會(huì)造成儀器因?yàn)殪o電而損壞，積攢在風(fēng)扇上的塵垢，有時(shí)會(huì)造成儀器不能啟動(dòng)。

以上就是安泰測(cè)試為大家分享的LCR數(shù)字電橋安全操作指南，建議大家在使用儀器時(shí)嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，正確的操作儀器不僅可以延長(zhǎng)儀器使用壽命，還能讓你高效的工作，如果大家在使用LCR數(shù)字電橋過(guò)程中有什么問(wèn)題，歡迎咨詢安泰測(cè)試網(wǎng)www.agitek.com.cn。 

作為一名射頻工程師或準(zhǔn)射頻工程師，不僅要掌握各種設(shè)計(jì)軟件，還要熟練使用各種測(cè)試儀器，因?yàn)樽龀龅漠a(chǎn)品能不能達(dá)到設(shè)計(jì)指標(biāo)，能不能實(shí)現(xiàn)設(shè)計(jì)的功能，ZH都需要通過(guò)射頻測(cè)試儀器來(lái)驗(yàn)證。

Agitek射頻儀器小課堂將帶大家詳細(xì)盤點(diǎn)常用射頻微波測(cè)量?jī)x器的種類和用途！今天安泰測(cè)試先給大家分享一下射頻儀器中比較高端比較昂貴的儀器——網(wǎng)絡(luò)分析儀：

網(wǎng)絡(luò)分析的“網(wǎng)絡(luò)”是指射頻電路和射頻信號(hào)通道，包含射頻、微波電路，由信號(hào)通道和部件構(gòu)成，包含各類電路元器件，不要與IT網(wǎng)絡(luò)和電力網(wǎng)絡(luò)混淆。

基本功能是電路參數(shù)分析，分析S參數(shù)（散射參數(shù)），分析信號(hào)（電磁波）在網(wǎng)絡(luò)中的傳輸和反射參數(shù)，常用參數(shù)格式：幅度（損耗、增益、駐波…）、相位、時(shí)延、阻抗。

網(wǎng)絡(luò)分析儀分為矢量和標(biāo)量?jī)煞N類型，矢量網(wǎng)絡(luò)分析儀包含幅度和相位等所有信息的網(wǎng)絡(luò)參數(shù)，標(biāo)量網(wǎng)絡(luò)分析儀不包含相位、時(shí)延等信息。

一、測(cè)量應(yīng)用領(lǐng)域：

放大器、同軸電纜、功分器、合路器、天線、耦合器、濾波器、隔離器、分支分配器、晶體、聲表等；

二、高端矢量網(wǎng)絡(luò)分析儀的功能：

高精度矢量S參數(shù)測(cè)量(增益、插損、駐波、相位、延時(shí)...)

頻譜儀選件可選內(nèi)置頻譜儀功能

時(shí)域測(cè)量

變頻矢量測(cè)量

相參信號(hào)產(chǎn)生和調(diào)節(jié)

變頻群時(shí)延測(cè)試

天線測(cè)試

內(nèi)置脈沖源、調(diào)制器，進(jìn)行脈沖測(cè)試

真差分測(cè)試

噪聲系數(shù)測(cè)量

去嵌入校準(zhǔn)

外控?cái)U(kuò)展模塊進(jìn)行THz測(cè)量

三、網(wǎng)絡(luò)分析儀品牌推薦（排名不分先后）：

是德科技（Keysight）

泰克（Tektronix）

羅德與施瓦茨（R&S）

安立（Anritsu）

中電儀器（Ceyear）

創(chuàng)遠(yuǎn)儀器（TRANSCOM）

普源精電（RIGOL）

如果大家在選擇網(wǎng)絡(luò)分析儀過(guò)程中遇到什么問(wèn)題，歡迎咨詢安泰測(cè)試，安泰有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，能夠快速、準(zhǔn)確的幫您選擇合適的網(wǎng)絡(luò)分析儀。

安泰小課堂致力于為電子工程師和相關(guān)專業(yè)的學(xué)生，電子愛好者提供電子測(cè)試測(cè)量領(lǐng)域有關(guān)測(cè)試儀器（示波器、信號(hào)源、萬(wàn)用表、頻譜分析儀、網(wǎng)絡(luò)分析儀、可編程電源、LCR等）相關(guān)的理論知識(shí)、實(shí)際操作、測(cè)試方案等規(guī)范專業(yè)的短視頻教程，旨在幫助有需要的人在學(xué)習(xí)工作的各個(gè)階段能有效地提升自己的職業(yè)技能。

安泰小課堂為安泰測(cè)試設(shè)備有限公司著力打造的電測(cè)儀器線上科普平臺(tái)，是安泰線下培訓(xùn)學(xué)院在新形勢(shì)下的戰(zhàn)略轉(zhuǎn)移。安泰小課堂依托于安泰測(cè)測(cè)14年電子測(cè)試測(cè)量領(lǐng)域發(fā)展背景，集結(jié)專業(yè)的技術(shù)AE團(tuán)隊(duì)，新媒體團(tuán)隊(duì)，業(yè)務(wù)服務(wù)團(tuán)隊(duì)，利用公司全面的儀器設(shè)備，豐富的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，安泰小課堂力爭(zhēng)在新興的網(wǎng)絡(luò)營(yíng)銷發(fā)展中為更多的用戶提供更有效，更快速，更便捷的綜合服務(wù)。

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頻譜分析儀是射頻微波應(yīng)用領(lǐng)域常用的測(cè)試儀表，通過(guò)頻譜儀的測(cè)試，可以得到信號(hào)很多重要的性能參數(shù)，如信號(hào)頻率，信號(hào)功率，信號(hào)帶寬，雜散性能等。對(duì)于一個(gè)射頻工程師來(lái)講，經(jīng)常使用頻譜分析儀，難免會(huì)遇到頻譜分析儀出現(xiàn)故障的時(shí)候，今天安泰測(cè)試就給大家分享一下頻譜儀常見故障有哪些，以及使用注意事項(xiàng)。

頻譜儀TG、信號(hào)源輸出口、功率探頭等反向保護(hù)能力差(10～15dBm，電壓0V或10V)。大多模塊與整機(jī)都是雙工模式(上下行收發(fā)使用不同的頻率，收發(fā)同時(shí)進(jìn)行)，所以，西安安泰頻譜分析儀維修中心小編提示大家，在測(cè)試雙工類放大器模塊或設(shè)備時(shí)，為了防止反饋信號(hào)對(duì)儀器的損壞，必須在信號(hào)源、頻譜儀跟蹤源(TG)等輸出口串接相應(yīng)頻段的隔離器或合適的衰減器，且要定期對(duì)隔離器的好壞進(jìn)行檢查，保證隔離器的反向衰減≥20dBm。需要注意隔離器只能隔離高頻，不能隔直流。要清楚區(qū)分隔離器好壞的檢查方法。

1.儀器端口的保護(hù)。

2.在儀器的輸入輸出端口擰接電纜、轉(zhuǎn)接頭、隔離器或衰減器時(shí)，要注意對(duì)端口的保護(hù)，以免造成接頭松動(dòng)或接觸不良，從而影響測(cè)量精度。網(wǎng)絡(luò)分析儀更應(yīng)注意接頭的維護(hù)。

3.電源、儀器、HPIB、GPIB電纜機(jī)、鼠標(biāo)鍵盤等不可帶電進(jìn)行插拔或搬動(dòng)，要在開機(jī)前連接上，若需打印可先用軟盤保存，再在電腦上打印。

4.儀器的左右，特別是后面部分，要與其它物體保持一定的距離來(lái)散熱，一般10cm即可。電源和其它帶電和帶磁性的物體不要靠近頻譜儀。

5.有些儀器在待機(jī)狀態(tài)，內(nèi)部部分電路并未斷電，西安安泰頻譜分析儀維修中心小編建議大家，長(zhǎng)時(shí)間不用或下班時(shí)必須拔電源線或給電源插座斷電關(guān)機(jī)，如E4432B信號(hào)源、FSP頻譜儀、頻率計(jì)。在施工現(xiàn)場(chǎng)，經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有未斷電關(guān)機(jī)的現(xiàn)象。

6.為了保證測(cè)試的準(zhǔn)確度，儀器在使用或校準(zhǔn)前，必須預(yù)熱半小時(shí)以上，并在使用前對(duì)儀器狀態(tài)進(jìn)行檢查并記錄，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，提供可追溯性。在頻譜儀使用過(guò)程中，要合理設(shè)置參數(shù)。

7.所有儀器設(shè)備應(yīng)工作于適宜的溫濕度環(huán)境下(溫度范圍0～+50℃，濕度小于85%為宜)，避免陽(yáng)光直射且遠(yuǎn)離震源、水源和腐蝕性氣體等。

8.另外，有些儀器設(shè)備有其特殊的維護(hù)及使用要求，在使用之前都應(yīng)進(jìn)行了解，并在操作過(guò)程中加以注意，只有這樣才能做到防患于未然。

安泰測(cè)試維修中心擁有專業(yè)培訓(xùn)的維修工程師，專業(yè)維修美國(guó)Agilent、TEK、FLUKE、R&S、KEITHLEY、安立等公司，已不提供維修以及在修但是過(guò)了質(zhì)保期的各種示波器、頻譜儀、網(wǎng)絡(luò)分析儀、邏輯分析儀、功率計(jì)、發(fā)射機(jī)、接收機(jī)、信號(hào)源、各種型號(hào)的探頭、函數(shù)信號(hào)發(fā)生器、校準(zhǔn)源等進(jìn)口儀器儀表，如果大家在使用頻譜分析過(guò)程中有什么問(wèn)題，歡迎訪問(wèn)安泰測(cè)試網(wǎng)。

我們?cè)谑褂靡后w閃爍計(jì)數(shù)系統(tǒng)的核計(jì)數(shù)中采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，因?yàn)榉派湫院怂厮プ兊谋举|(zhì)是其可在任一時(shí)間釋放β粒子（隨機(jī)衰變）。雖然我們不能確定核衰變會(huì)在什么時(shí)候發(fā)生，但我們可使用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法描述一個(gè)樣品中所有核衰變的平均行為。為了應(yīng)對(duì)放射性核素的隨機(jī)衰變行為，我們采用了計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)方法。統(tǒng)計(jì)可用來(lái)表示在某一限定的置信區(qū)間內(nèi)得到給定計(jì)數(shù)的概率，一般使用 %2σ（%2s標(biāo)準(zhǔn)偏差）來(lái)表示。

下面我們可通過(guò)對(duì)單一放射性樣品計(jì)數(shù)十次來(lái)簡(jiǎn)單明了的說(shuō)明液體閃爍計(jì)數(shù)中的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。該實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)列于表 1 中。我們可明顯看到，任何一次計(jì)數(shù)的 CPM 結(jié)果都不相同（隨機(jī)衰變）。我們?cè)鯓硬拍塬@得這 10 次計(jì)數(shù)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)呢？如果我們進(jìn)行基本統(tǒng)計(jì)，則這些數(shù)值的分布可表示為正態(tài)分布或高斯分布。

表 1. 10次樣品計(jì)數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析

這些數(shù)據(jù)可通過(guò)計(jì)算兩個(gè)參數(shù)來(lái)描述：平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差。平均值 () 被定義為 CPM 的總和除以被計(jì)數(shù)樣品的計(jì)數(shù)次數(shù)(i)，表示為。因此從表 1 來(lái)看，466148 CPM/10 = 46615，這就是平均值  CPM。接下來(lái)必須獲得這 10 個(gè)樣品計(jì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差。標(biāo)準(zhǔn)偏差可通過(guò)下面的公式獲得：

因此，該樣品計(jì)數(shù)十次的計(jì)數(shù)結(jié)果表示為（平均值）46615±S.D. 或 46615±102 CPM?，F(xiàn)在我們可以計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差，但 S.D. (±102 CPM) 對(duì)于核計(jì)數(shù)的真正意義是什么？我們可通過(guò)圖 1 來(lái)清楚說(shuō)明，圖中顯示了重疊在實(shí)際計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)上的正態(tài)分布（高斯分布）（表 1）。計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以柱狀圖表示。

圖 1. 放射性樣品計(jì)數(shù)十次的正態(tài)分布和計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)

正態(tài)分布曲線通過(guò)下面的公式計(jì)算得到：

因此，發(fā)生在平均值的 +s 范圍內(nèi)的真實(shí)計(jì)數(shù)的概率是68%。68% 稱為針對(duì) s（標(biāo)準(zhǔn)偏差）的置信水平。由于核計(jì)數(shù)需要高于 68% 的置信水平，因此我們采用 2s 值，該值定義為 95.5% 的置信界限。

那么，這些值可如何用于核計(jì)數(shù)中呢？根據(jù)基本統(tǒng)計(jì)方法，我們知道預(yù)期的標(biāo)準(zhǔn)偏差等于總計(jì)數(shù)數(shù)量的平方根。這是計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)計(jì)算的主要公式。

計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)計(jì)算

如上所述，標(biāo)準(zhǔn)偏差可按樣品檢測(cè)的總計(jì)數(shù)數(shù)量的平方根來(lái)計(jì)算。該結(jié)果的置信界限為 68%。但核計(jì)數(shù)使用 2s 值（95.5% 置信界限）。典型的計(jì)算如實(shí)例 2 所示。

實(shí)例 2：如果在 1.0 分鐘內(nèi)進(jìn)行了 9500 次計(jì)數(shù)，那么 2s 值等于多少？

因此，在 95.5% 的置信界限內(nèi)，計(jì)數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果（實(shí)例 2）可表示為 9500±195 次計(jì)數(shù)。這一表達(dá)結(jié)果的方法相當(dāng)笨拙（因?yàn)榭赡塬@得非常多的數(shù)字）。為更方便起見，我們計(jì)算了 %2s值。%2s 值可根據(jù)公式1或者公式 2（公式 1 的數(shù)學(xué)簡(jiǎn)化）計(jì)算得到。實(shí)例 2中數(shù)據(jù)的%2s 值顯示在實(shí)例 3中。

實(shí)例 3：樣品計(jì)數(shù)的 %2s 計(jì)算

因此，Z終結(jié)果可表示為 9500 次計(jì)數(shù) ± 2.05%，置信水平為 95.5%。

計(jì)數(shù)率的統(tǒng)計(jì)分析

因?yàn)榇蠖鄶?shù)核計(jì)數(shù)方法是分析 CPM 值而不是樣品的總計(jì)數(shù)，所以確定計(jì)數(shù)率的統(tǒng)計(jì)值很重要。以計(jì)數(shù)率為參考將如何影響計(jì)數(shù)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)？如果現(xiàn)在對(duì)同一樣品計(jì)數(shù)三分鐘，則總計(jì)數(shù)數(shù)量增加了三倍。樣品總體計(jì)數(shù)從 9500 次增加到 28500 次，這增加了測(cè)量的準(zhǔn)確性。28500 次總計(jì)數(shù)的 2s 值 (338) 的百分比更小，由此可指示出準(zhǔn)確度得到了提升。

實(shí)例 4：計(jì)算計(jì)數(shù)率的 2s 值

因此，Z終結(jié)果可表示為 9500 ± 113 CPM?，F(xiàn)在，我們已經(jīng)計(jì)算了計(jì)數(shù)率的 2s 值，那么該如何計(jì)算 %2s（使用核計(jì)數(shù)儀分析樣品時(shí)通常打印輸出的值）？

%2s可使用公式 3計(jì)算。

實(shí)例 5：計(jì)數(shù)率為 9500 CPM、計(jì)數(shù)時(shí)間為 3 分鐘的樣品的 %2s 計(jì)算。

因此，對(duì)樣品計(jì)數(shù)三分鐘與計(jì)數(shù)一分鐘相比較，%2s 從2.05%（實(shí)例 3）降低至 1.18%（實(shí)例 5）。這一數(shù)值 (%2s) 與總計(jì)數(shù)和計(jì)數(shù)時(shí)間成反比。

那么這些參數(shù)是如何在液體閃爍計(jì)數(shù)中使用的呢？

在珀金埃爾默的 Tri-Carb & Quantulus 和 MicroBeta 儀器中，終止樣品計(jì)數(shù)的方法通常有兩種。diyi種方法稱為預(yù)設(shè)時(shí)間。在該方法中，系統(tǒng)在到達(dá)用戶設(shè)定的計(jì)數(shù)時(shí)間后停止樣品計(jì)數(shù)。第二種方法是基于特定 %2s 值終止計(jì)數(shù)，所有的樣品計(jì)數(shù)都具有相同的統(tǒng)計(jì)精確度。我們可以通過(guò)公式 3和對(duì)樣品的統(tǒng)計(jì)精確度來(lái)反向推導(dǎo)對(duì)樣品計(jì)數(shù)所需要的時(shí)間。

TaqMan探針法因其良好的特異性以及可多重檢測(cè)而受到實(shí)驗(yàn)人員的青睞，其實(shí)除了探針法外，還有很多好的實(shí)驗(yàn)方法也被實(shí)驗(yàn)人員廣泛認(rèn)可，這次就介紹一下另一個(gè)應(yīng)用廣泛的方法：SYBR Green染料法，它又是因?yàn)槟男﹥?yōu)點(diǎn)獲得實(shí)驗(yàn)人員的青睞呢？

染料法原理

染料法一般使用的是SYBR Green I染料，這是一種可以與雙鏈DNA小溝結(jié)合的熒光染料，其不會(huì)與單鏈DNA結(jié)合，且在游離狀態(tài)下幾乎無(wú)熒光，只有與雙鏈DNA結(jié)合才會(huì)發(fā)出熒光，因此將PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的雙鏈DNA數(shù)量與熒光強(qiáng)度直接關(guān)聯(lián)，產(chǎn)生實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的效果。

SYBR Green染料法優(yōu)點(diǎn)

?  通用性好，適合進(jìn)行大多數(shù)類型的定量反應(yīng)，可以進(jìn)行熔解曲線的分析。

?  無(wú)需設(shè)計(jì)探針，引物設(shè)計(jì)相對(duì)簡(jiǎn)單，不用考慮基團(tuán)選擇，易于上手；成本低，無(wú)需合成探針。

?  無(wú)需PCR后處理，減少分析工作量并節(jié)省材料成本。

SYBR Green染料法缺點(diǎn)

SYBR Green染料法也有其缺點(diǎn)，SYBR Green染料法一個(gè)反應(yīng)只能檢測(cè)一個(gè)基因，無(wú)法進(jìn)行二重甚至多重的實(shí)驗(yàn)。同樣的相對(duì)于TaqMan探針法其特異性較差，當(dāng)引物存在二聚體或者非特異性擴(kuò)增時(shí)，染料同樣可以結(jié)合并發(fā)出熒光，影響定量結(jié)果。因此對(duì)于SYBR Green染料法而言，設(shè)計(jì)一套好用的引物是重中之重。

深藍(lán)云生物為您提供Gene-π網(wǎng)站在線設(shè)計(jì)引物，可為您快速設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行評(píng)估，復(fù)制鏈接可進(jìn)行查詢：https://www.gene-pi.com/item/primers-and-probes-2/

設(shè)計(jì)好引物后，我們?cè)撛趺催M(jìn)行實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?/b>

1.實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

我們需要對(duì)設(shè)計(jì)的引物擴(kuò)增效果進(jìn)行分析，使用陽(yáng)性模板進(jìn)行擴(kuò)增，確定擴(kuò)增產(chǎn)物為單一條帶，且大小符合設(shè)計(jì)預(yù)期，如有條件可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，保證準(zhǔn)確性。當(dāng)引物無(wú)問(wèn)題后，進(jìn)行反應(yīng)條件的探索，對(duì)退火溫度進(jìn)行溫度梯度檢測(cè)，找到合適的退火溫度，即PCR擴(kuò)增效果好，陰性模板無(wú)擴(kuò)增，條帶單一，熔解曲線單峰等。

2.預(yù)實(shí)驗(yàn)

設(shè)計(jì)好引物并探索好實(shí)驗(yàn)條件后，對(duì)樣本進(jìn)行一次預(yù)實(shí)驗(yàn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)將樣本進(jìn)行梯度稀釋用以制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，分析內(nèi)參基因以及目的基因的擴(kuò)增效率是否接近且在100%左右，其次可確認(rèn)高濃度模板中是否有yizhi劑干擾，從而確定實(shí)驗(yàn)時(shí)合適的模板濃度（樣本是否需要稀釋或濃縮）。

3.正式實(shí)驗(yàn)

當(dāng)我們完成了實(shí)驗(yàn)條件和預(yù)實(shí)驗(yàn)后就可以進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)了，每個(gè)樣品都需要3個(gè)或以上的重復(fù)，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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?   數(shù)據(jù)可靠性

連續(xù)1000次實(shí)驗(yàn)后，結(jié)果高度一致，溫控JZ，性能穩(wěn)定可靠。

?  應(yīng)用靈活性

提供多種qPCR應(yīng)用分析，定制化報(bào)告。

?   流程智能化

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