我們在使用液體閃爍計數(shù)系統(tǒng)的核計數(shù)中采用統(tǒng)計學方法，因為放射性核素衰變的本質是其可在任一時間釋放β粒子（隨機衰變）。雖然我們不能確定核衰變會在什么時候發(fā)生，但我們可使用統(tǒng)計學方法描述一個樣品中所有核衰變的平均行為。為了應對放射性核素的隨機衰變行為，我們采用了計數(shù)統(tǒng)計方法。統(tǒng)計可用來表示在某一限定的置信區(qū)間內(nèi)得到給定計數(shù)的概率，一般使用 %2σ（%2s標準偏差）來表示。

下面我們可通過對單一放射性樣品計數(shù)十次來簡單明了的說明液體閃爍計數(shù)中的統(tǒng)計學方法。該實驗的數(shù)據(jù)列于表 1 中。我們可明顯看到，任何一次計數(shù)的 CPM 結果都不相同（隨機衰變）。我們怎樣才能獲得這 10 次計數(shù)的統(tǒng)計數(shù)據(jù)呢？如果我們進行基本統(tǒng)計，則這些數(shù)值的分布可表示為正態(tài)分布或高斯分布。

表 1. 10次樣品計數(shù)的統(tǒng)計分析

這些數(shù)據(jù)可通過計算兩個參數(shù)來描述：平均值和標準偏差。平均值 () 被定義為 CPM 的總和除以被計數(shù)樣品的計數(shù)次數(shù)(i)，表示為。因此從表 1 來看，466148 CPM/10 = 46615，這就是平均值  CPM。接下來必須獲得這 10 個樣品計數(shù)的標準偏差。標準偏差可通過下面的公式獲得：

因此，該樣品計數(shù)十次的計數(shù)結果表示為（平均值）46615±S.D. 或 46615±102 CPM?，F(xiàn)在我們可以計算標準偏差，但 S.D. (±102 CPM) 對于核計數(shù)的真正意義是什么？我們可通過圖 1 來清楚說明，圖中顯示了重疊在實際計數(shù)數(shù)據(jù)上的正態(tài)分布（高斯分布）（表 1）。計數(shù)數(shù)據(jù)以柱狀圖表示。

圖 1. 放射性樣品計數(shù)十次的正態(tài)分布和計數(shù)數(shù)據(jù)

正態(tài)分布曲線通過下面的公式計算得到：

因此，發(fā)生在平均值的 +s 范圍內(nèi)的真實計數(shù)的概率是68%。68% 稱為針對 s（標準偏差）的置信水平。由于核計數(shù)需要高于 68% 的置信水平，因此我們采用 2s 值，該值定義為 95.5% 的置信界限。

那么，這些值可如何用于核計數(shù)中呢？根據(jù)基本統(tǒng)計方法，我們知道預期的標準偏差等于總計數(shù)數(shù)量的平方根。這是計數(shù)統(tǒng)計計算的主要公式。

計數(shù)統(tǒng)計計算

如上所述，標準偏差可按樣品檢測的總計數(shù)數(shù)量的平方根來計算。該結果的置信界限為 68%。但核計數(shù)使用 2s 值（95.5% 置信界限）。典型的計算如實例 2 所示。

實例 2：如果在 1.0 分鐘內(nèi)進行了 9500 次計數(shù)，那么 2s 值等于多少？

因此，在 95.5% 的置信界限內(nèi)，計數(shù)的統(tǒng)計結果（實例 2）可表示為 9500±195 次計數(shù)。這一表達結果的方法相當笨拙（因為可能獲得非常多的數(shù)字）。為更方便起見，我們計算了 %2s值。%2s 值可根據(jù)公式1或者公式 2（公式 1 的數(shù)學簡化）計算得到。實例 2中數(shù)據(jù)的%2s 值顯示在實例 3中。

實例 3：樣品計數(shù)的 %2s 計算

因此，Z終結果可表示為 9500 次計數(shù) ± 2.05%，置信水平為 95.5%。

計數(shù)率的統(tǒng)計分析

因為大多數(shù)核計數(shù)方法是分析 CPM 值而不是樣品的總計數(shù)，所以確定計數(shù)率的統(tǒng)計值很重要。以計數(shù)率為參考將如何影響計數(shù)的統(tǒng)計數(shù)據(jù)？如果現(xiàn)在對同一樣品計數(shù)三分鐘，則總計數(shù)數(shù)量增加了三倍。樣品總體計數(shù)從 9500 次增加到 28500 次，這增加了測量的準確性。28500 次總計數(shù)的 2s 值 (338) 的百分比更小，由此可指示出準確度得到了提升。

實例 4：計算計數(shù)率的 2s 值

因此，Z終結果可表示為 9500 ± 113 CPM?，F(xiàn)在，我們已經(jīng)計算了計數(shù)率的 2s 值，那么該如何計算 %2s（使用核計數(shù)儀分析樣品時通常打印輸出的值）？

%2s可使用公式 3計算。

實例 5：計數(shù)率為 9500 CPM、計數(shù)時間為 3 分鐘的樣品的 %2s 計算。

因此，對樣品計數(shù)三分鐘與計數(shù)一分鐘相比較，%2s 從2.05%（實例 3）降低至 1.18%（實例 5）。這一數(shù)值 (%2s) 與總計數(shù)和計數(shù)時間成反比。

那么這些參數(shù)是如何在液體閃爍計數(shù)中使用的呢？

在珀金埃爾默的 Tri-Carb & Quantulus 和 MicroBeta 儀器中，終止樣品計數(shù)的方法通常有兩種。diyi種方法稱為預設時間。在該方法中，系統(tǒng)在到達用戶設定的計數(shù)時間后停止樣品計數(shù)。第二種方法是基于特定 %2s 值終止計數(shù)，所有的樣品計數(shù)都具有相同的統(tǒng)計精確度。我們可以通過公式 3和對樣品的統(tǒng)計精確度來反向推導對樣品計數(shù)所需要的時間。

作為一名射頻工程師或準射頻工程師，不僅要掌握各種設計軟件，還要熟練使用各種測試儀器，因為做出的產(chǎn)品能不能達到設計指標，能不能實現(xiàn)設計的功能，ZH都需要通過射頻測試儀器來驗證。

Agitek射頻儀器小課堂將帶大家詳細盤點常用射頻微波測量儀器的種類和用途！今天安泰測試先給大家分享一下射頻儀器中比較高端比較昂貴的儀器——網(wǎng)絡分析儀：

網(wǎng)絡分析的“網(wǎng)絡”是指射頻電路和射頻信號通道，包含射頻、微波電路，由信號通道和部件構成，包含各類電路元器件，不要與IT網(wǎng)絡和電力網(wǎng)絡混淆。

基本功能是電路參數(shù)分析，分析S參數(shù)（散射參數(shù)），分析信號（電磁波）在網(wǎng)絡中的傳輸和反射參數(shù)，常用參數(shù)格式：幅度（損耗、增益、駐波…）、相位、時延、阻抗。

網(wǎng)絡分析儀分為矢量和標量兩種類型，矢量網(wǎng)絡分析儀包含幅度和相位等所有信息的網(wǎng)絡參數(shù)，標量網(wǎng)絡分析儀不包含相位、時延等信息。

一、測量應用領域：

放大器、同軸電纜、功分器、合路器、天線、耦合器、濾波器、隔離器、分支分配器、晶體、聲表等；

二、高端矢量網(wǎng)絡分析儀的功能：

高精度矢量S參數(shù)測量(增益、插損、駐波、相位、延時...)

頻譜儀選件可選內(nèi)置頻譜儀功能

時域測量

變頻矢量測量

相參信號產(chǎn)生和調(diào)節(jié)

變頻群時延測試

天線測試

內(nèi)置脈沖源、調(diào)制器，進行脈沖測試

真差分測試

噪聲系數(shù)測量

去嵌入校準

外控擴展模塊進行THz測量

三、網(wǎng)絡分析儀品牌推薦（排名不分先后）：

是德科技（Keysight）

泰克（Tektronix）

羅德與施瓦茨（R&S）

安立（Anritsu）

中電儀器（Ceyear）

創(chuàng)遠儀器（TRANSCOM）

普源精電（RIGOL）

如果大家在選擇網(wǎng)絡分析儀過程中遇到什么問題，歡迎咨詢安泰測試，安泰有專業(yè)的技術團隊，能夠快速、準確的幫您選擇合適的網(wǎng)絡分析儀。

四線測試法被認為是目前為止zui好的消除引線電阻引入誤差（或將其將至最小的）的測試方案，作為初學者來說，除了了解測試方法，了解它的原理及優(yōu)勢也是非常有必要的，今天安泰測試就給大家介紹一下四線法測量的原理及特點：

（一）、四線法原理介紹

四線法，我們也可以稱為四端點測量技術、開爾文測量法，是一種電子線路中的阻抗測量法，主要用于電阻阻值的精確測量。

（二）、二線法測量的局限

當我們在使用二線法測量電阻時，根據(jù)歐姆定律R=U/I，不論是近距離還是遠距離測量阻值，測量結果都會受到導線電阻的影響，導致電壓下降，遠距離測量時由于導線更長造成的壓降(電壓下降)更大而造成不可忽略的影響。在實際測量中受限于某些條件而只能遠距離測量電壓，此時由于遠距離測量中大電流流經(jīng)長導線造成了不可忽視的壓降，而對測量電阻阻值造成影響。

（三）、四線法如何精準測量

四線式測量方法示意圖

四線法測量由額外導線引至伏特計，則可避免測量電阻時受到導線電阻造成的壓降影響。由于伏特計內(nèi)電阻極大，流經(jīng)伏特計的電流值相比于流經(jīng)待測電阻電流值小到可忽略，所以額外導線產(chǎn)生的壓降不會對測量結果造成影響。此時所測電壓與安培計所測電流之比即可近似為被測電阻阻值。

（四）、四線法測量的優(yōu)點

1、導線電阻產(chǎn)生的電壓差幾乎為零，不影響電壓測量結果。

2、由于僅有極小部分的電流(小到可忽略)流經(jīng)伏特計，故也不影響電流測量結果。

3、待測電阻為低電阻，同樣可精準測量。

你對四線制測量方法了解多少呢？你會使用四線制測量嗎？如果您在用四線制測量過程中有什么問題，歡迎訪問安泰測試網(wǎng)。

頻譜分析儀是射頻微波應用領域常用的測試儀表，通過頻譜儀的測試，可以得到信號很多重要的性能參數(shù)，如信號頻率，信號功率，信號帶寬，雜散性能等。對于一個射頻工程師來講，經(jīng)常使用頻譜分析儀，難免會遇到頻譜分析儀出現(xiàn)故障的時候，今天安泰測試就給大家分享一下頻譜儀常見故障有哪些，以及使用注意事項。

頻譜儀TG、信號源輸出口、功率探頭等反向保護能力差(10～15dBm，電壓0V或10V)。大多模塊與整機都是雙工模式(上下行收發(fā)使用不同的頻率，收發(fā)同時進行)，所以，西安安泰頻譜分析儀維修中心小編提示大家，在測試雙工類放大器模塊或設備時，為了防止反饋信號對儀器的損壞，必須在信號源、頻譜儀跟蹤源(TG)等輸出口串接相應頻段的隔離器或合適的衰減器，且要定期對隔離器的好壞進行檢查，保證隔離器的反向衰減≥20dBm。需要注意隔離器只能隔離高頻，不能隔直流。要清楚區(qū)分隔離器好壞的檢查方法。

1.儀器端口的保護。

2.在儀器的輸入輸出端口擰接電纜、轉接頭、隔離器或衰減器時，要注意對端口的保護，以免造成接頭松動或接觸不良，從而影響測量精度。網(wǎng)絡分析儀更應注意接頭的維護。

3.電源、儀器、HPIB、GPIB電纜機、鼠標鍵盤等不可帶電進行插拔或搬動，要在開機前連接上，若需打印可先用軟盤保存，再在電腦上打印。

4.儀器的左右，特別是后面部分，要與其它物體保持一定的距離來散熱，一般10cm即可。電源和其它帶電和帶磁性的物體不要靠近頻譜儀。

5.有些儀器在待機狀態(tài)，內(nèi)部部分電路并未斷電，西安安泰頻譜分析儀維修中心小編建議大家，長時間不用或下班時必須拔電源線或給電源插座斷電關機，如E4432B信號源、FSP頻譜儀、頻率計。在施工現(xiàn)場，經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有未斷電關機的現(xiàn)象。

6.為了保證測試的準確度，儀器在使用或校準前，必須預熱半小時以上，并在使用前對儀器狀態(tài)進行檢查并記錄，以便及時發(fā)現(xiàn)問題，提供可追溯性。在頻譜儀使用過程中，要合理設置參數(shù)。

7.所有儀器設備應工作于適宜的溫濕度環(huán)境下(溫度范圍0～+50℃，濕度小于85%為宜)，避免陽光直射且遠離震源、水源和腐蝕性氣體等。

8.另外，有些儀器設備有其特殊的維護及使用要求，在使用之前都應進行了解，并在操作過程中加以注意，只有這樣才能做到防患于未然。

安泰測試維修中心擁有專業(yè)培訓的維修工程師，專業(yè)維修美國Agilent、TEK、FLUKE、R&S、KEITHLEY、安立等公司，已不提供維修以及在修但是過了質保期的各種示波器、頻譜儀、網(wǎng)絡分析儀、邏輯分析儀、功率計、發(fā)射機、接收機、信號源、各種型號的探頭、函數(shù)信號發(fā)生器、校準源等進口儀器儀表，如果大家在使用頻譜分析過程中有什么問題，歡迎訪問安泰測試網(wǎng)。

本文展示了如何使用THUNDER Imager Tissue和Large Volume Computational Clearing（LVCC）實現(xiàn)尤文（尤因）肉瘤細胞中有絲分裂紡錘體的更多細節(jié)觀察，從而協(xié)助本研究的進行。活細胞成像等技術在了解腫瘤進展和轉移研究中至關重要。真核細胞中的有絲分裂紡錘體由中空的微管組成。它在有絲分裂期間的細胞內(nèi)重復染色體分離和分裂細胞細胞骨架結構的構建過程中發(fā)揮著重要的作用。在尤文肉瘤這一類的腫瘤細胞中，有絲分裂障礙的觸發(fā)因子可通過檢查有絲分裂紡錘體的機能障礙來得以確認。

簡介

使用熒光顯微鏡可以研究腫瘤形成和進展過程中組織及細胞內(nèi)部發(fā)生的變化。像活細胞成像這樣的技術對更加深入地了解腫瘤進展和轉移是至關重要的。

在真核細胞中，由中空微管組成的有絲分裂紡錘體，有助于構建復制細胞的細胞骨架結構，并在有絲分裂過程中將復制的染色體從原始細胞中分離出來。在尤文肉瘤這一類的腫瘤細胞中，有絲分裂障礙的觸發(fā)因子可通過檢查有絲分裂紡錘體的機能障礙來得以確認[1]。

肉瘤是肌肉或骨骼等結締組織中形成的一類腫瘤。尤文肉瘤和橫紋肌肉瘤，分別生長于骨骼和肌肉中，是一種傾向于發(fā)生在骨骼生長活躍區(qū)域附近的兒科腫瘤。除了手術和化療之外，電離輻射也被用于治療這類腫瘤，但這可能會導致生長中的骨骼受到永jiu性損傷，包括不對稱生長停滯、脛骨畸形及骨折概率增加等。骨骼損傷的嚴重度在很大程度上與骨骼接受的輻射劑量成正比。因此，我們有理由認為，選擇性放射致敏腫瘤組織的策略可降低實現(xiàn)局部控制所需的輻射劑量，并能最大限度降低對鄰近健康組織造成的間接損傷。

運用體外研究和小鼠異種移植模型系統(tǒng)，對使用mRNA合成抑zhi劑光神霉素A預處理，可以通過改變輻射損傷的轉錄反應實現(xiàn)選擇性放射致敏EWS：Fli1+腫瘤細胞的假設進行了驗證[2]。結果表明，光神霉素A可以通過抑zhi參與DNA損傷修復相關基因的轉錄，使EWS：Fli1+細胞在體內(nèi)外顯著放射增敏，導致腫瘤細胞程序性死亡[2]。

使用THUNDER Imager Tissue和Large Volume Computational Clearing（LVCC）可以揭示肉瘤細胞中有絲分裂紡錘體的更多細節(jié)，協(xié)助癌癥研究人員獲得更有用的見解。

挑戰(zhàn)

在有絲分裂紡錘體成像中，可對其實現(xiàn)快速成像，并獲得清晰的高對比度3D成像，以清晰展示重要細節(jié)的解決方案最為實用。傳統(tǒng)的寬場顯微成像速度快，檢測靈敏度高，但不幸的是對于厚樣本的成像通常會出現(xiàn)失焦不清晰或模糊的情況，這會降低對比度[3]。要闡明有絲分裂的不穩(wěn)定性在癌癥等復雜疾病中的作用，這需要在同一樣本中進行多個關聯(lián)生物學標記。

方法

該研究中使用了尤文肉瘤細胞（SK-ES-1）。對這些細胞進行α-微管蛋白（Clone YL1/2 Thermo-Fisher Scientific # MA1-80017，按1:500比例稀釋/ Dylight 488偶聯(lián)驢抗大鼠 Thermo-Fisher Scientific #SA5-10026）、γ-微管蛋白（Clone TU-30，AbCam # ab27074，按1:200比例稀釋/Dylight 550偶聯(lián)驢抗小鼠 Thermo-Fisher Scientific # SA5-10167）和DNA（Hoechst 33342藍）進行染色。染色后，使用介質ProLong Glass Antifade（Thermo-Fisher Scientific #P36981）進行蓋玻片封片，并通過使用63×/1.4 NA（數(shù)值孔徑）的油鏡進行THUNDER Imager Tissue成像。圖像采集使用大體積成像解析（LVCC）[3]模式，并生成最大化投影圖像數(shù)據(jù)。

結果

在有絲分裂過程中，α-微管蛋白（綠色）形成有絲分裂紡錘體，染色單體（藍色）會附著在有絲分裂紡錘體上，而γ-微管蛋白（紅色）集中定位在分裂細胞中的紡錘極上。通過THUNDER技術可觀察到肉瘤細胞中有絲分裂紡錘體的更多細節(jié)。清晰的圖像可以展示清晰的結構，以便進行分割和進一步的分析。

圖1：尤文肉瘤細胞SK-ES-1 α-微管蛋白（綠色）、γ-微管蛋白（紅色）和DNA（藍色）染色后的最大化投影：原始圖像數(shù)據(jù)（左）和THUNDER LVCC模式成像數(shù)據(jù)（右）。

 結 論 

THUNDER Large Volume Computational Clearing（LVCC）[3]進行尤文肉瘤細胞中的有絲分裂紡錘體成像時可顯著增強對比度。與傳統(tǒng)的寬場成像相比，其可展示細胞中有絲分裂紡錘體的更多細節(jié)。

References：

1.S. Rello-Varona, D. Herrero-Martín, L. Lagares-Tena, R. López-Alemany, N. Mulet-Margalef, J. Huertas-Martínez, S. Garcia-Monclús, X. García del Muro, C. Mu?oz-Pinedo, O. Martínez Tirado, The importance of being dead: cell death mechanisms assessment in anti-sarcoma therapy, Frontiers in Oncology (2015) vol. 5, p. 82, DOI: 10.3389/fonc.2015.00082.

2.M. Yun Lin, T.A. Damron, M.E. Oest, J.A. Horton, Mithramycin A Radiosensitizes EWS:Fli1+ Ewing Sarcoma Cells by Inhibiting Double Strand Break Repair, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. (2021) vol. 109, iss. 5, pp. 1454-1471, DOI: 10.1016/j.ijrobp.2020.12.010.

3.J. Schumacher, L. Bertrand, THUNDER Technology Note : THUNDER Imagers: How Do They Really Work? Science Lab (2019) Leica Microsystems.

相關產(chǎn)品

THUNDER Imager Tissue全景組織顯微成像系統(tǒng)

整個小鼠胚胎的圖像：（左）原始寬場成像結果和（右）應用Large Volume Computational Clearing（LVCC）后的成像結果。圖片來源：A. Popratiloff和Z. Motahari，美國喬治·華盛頓大學。

本文介紹了如何使用THUNDER Imager 3D Cell Culture和Large Volume Computational Clearing（LVCC）對小鼠胚胎快速、高對比度成像，實現(xiàn)了對軸突生長和腦神經(jīng)發(fā)育的研究。許多在發(fā)育早期階段損害神經(jīng)回路發(fā)育的遺傳性疾病被認為會對行為造成干擾。用小鼠模型研究早期神經(jīng)發(fā)育的細胞變化、定義與人類疾病相似的行為及潛在發(fā)育機制，是非常困難的。而鑒別發(fā)育的神經(jīng)元回路中三叉神經(jīng)（其參與面部感覺和運動機能）軸突生長的早期分化，使得這些困難迎刃而解。

簡介

人們普遍認為，很多遺傳性疾病都通過損害神經(jīng)回路發(fā)育的早期階段來對行為產(chǎn)生干擾[1]。事實證明，在模型動物中分辨早期神經(jīng)發(fā)育中細胞的此類變化具有一定的難度。用與人類遺傳性疾病中臨床顯著缺陷相似的基因突變小鼠模型來定義行為、神經(jīng)回路和潛在發(fā)育機制，是非常困難的[1]。檢測單個神經(jīng)元初始分化中的變化難以實現(xiàn)。這些挑戰(zhàn)可通過確定發(fā)育的神經(jīng)回路中三叉神經(jīng)這一關鍵組分的軸突生長的早期分化來解決[1]。通過著眼于參與面部感覺及運動機能如哺乳、進食、咬、咀嚼和吞咽等的三叉神經(jīng)（腦神經(jīng)V），以及軸突生長和原生傳導通路，可以對使用組織學處理可能會缺失的三維環(huán)境進行研究[1]。本文介紹如何使用THUNDER Imager 3D Cell Culture和Large Volume Computational Clearing（LVCC）[2,3]對小鼠胚胎快速、高對比度成像，以幫助進行腦神經(jīng)發(fā)育研究。

挑戰(zhàn)

如要以實用高效的方式對整個小鼠胚胎成像，快速、清晰的高對比度3D成像解決方案，對于重要細節(jié)展示和解析大有益處。相較于激光共聚焦成像，可在很短的時間內(nèi)一次性采集到完整胚胎的成像結果。傳統(tǒng)寬場顯微成像速度快，檢測靈敏度高，但是對厚標本的成像，如小鼠胚胎，通常會由于非焦平面信號的影響，呈現(xiàn)模糊的成像結果，降低圖像對比度[2,3]。

方法

使用THUNDER Imager 3D Cell Culture對小鼠胚胎成像。使用抗βIII微管蛋白（Tuj1）抗體對胚胎的神經(jīng)系統(tǒng)和腦神經(jīng)進行染色。結合BABB透明化處理，即可對整個胚胎中的神經(jīng)系統(tǒng)進行三維結構成像。圖1中的圖像使用數(shù)值孔徑（NA）0.75、工作距離700μm的20x多浸液物鏡采集。該圖像由32個視野拼接組成，成像深度為672 μm（337層切），采集了完整的胚胎結構。數(shù)據(jù)采集總時長為18分鐘。

結果

通過LVCC和Instant Computational Clearing（ICC）將寬場成像固有的非焦面模糊信號清除[2,3]。之后，再使用徠卡自適應式反卷積技術來增強三維特征結構的分辨率[4]。這種成像模式便于觀察胚胎的神經(jīng)結構以及胚胎的整體布局中更有價值的神經(jīng)元定位。

圖1：展示整個小鼠胚胎的俯視圖，顯示原始數(shù)據(jù)（A）與應用LVCC后（B）的差異。根據(jù)相對物鏡深度進行顏色標識的胚胎的角度視圖，其中zui大深度為672 μm。C）應用LVCC后的腦部側視圖，顯示了沿Z軸方向的精密細節(jié)。圖片來源：Anastas Popratiloff博士和Zahra Motahari博士，喬治·華盛頓大學納米制造與成像中心（GWNIC），美國華盛頓特區(qū)。

結論

與傳統(tǒng)的寬場成像不同，THUNDER技術Large Volume Computational Clearing（LVCC）[2,3]在對小鼠胚胎中的腦神經(jīng)發(fā)育成像時，顯著增強了圖像對比度，對精密細節(jié)有更好的解析。

References：

1.Z. Motahari, T.M. Maynard, A. Popratiloff, S.A. Moody, A.-S. LaMantia, Aberrant early growth of individual trigeminal sensory and motor axons in a series of mouse genetic models of 22q11.2 deletion syndrome, Human Molecular Genetics (2020) vol. 29, iss. 18, pp. 3081-3093, DOI: 10.1093/hmg/ddaa199.

2.J. Schumacher, L. Bertrand, THUNDER Technology Note: THUNDER Imagers: How Do They Really Work? Science Lab (2019) Leica Microsystems.

3.L. Felts, V. Kohli, J.M. Marr, J. Schumacher, O. Schlicker, An Introduction to Computational Clearing: A New Method to Remove Out-of-Focus Blur, Science Lab (2020) Leica Microsystems.

4.V. Kohli, J.M. Marr, O. Schlicker, L. Felts, The Power of Pairing Adaptive Deconvolution with Computational Clearing: Technical Brief, Science Lab (2021) Leica Microsystems. 

相關產(chǎn)品

THUNDER Imager 3D Live Cell 和 3D Cell Culture

小鼠大腦黑質的快速、高對比度成像

本文討論如何通過使用Instant Computational Clearing（ICC）的THUNDER Imager 3D Assay比傳統(tǒng)寬場顯微鏡更加清晰地觀察小鼠腦黑質中的D2多巴胺受體（D2R）。研究人員還可以使用THUNDER Imager優(yōu)化腦樣本的抗體染色。D2R是一種突觸后受體，可在紋狀體中高度表達。D2R激活會導致與細胞分化、生長、代謝等相關的信號通路。D2R在多巴胺能神經(jīng)傳遞和運動控制中也發(fā)揮著重要的作用。這種類型的神經(jīng)科學研究旨在更好地理解基因表達如何調(diào)控帕金森病、肌張力障礙、舞蹈癥和精神錯亂等疾病。

簡  介  

D2多巴胺受體（D2R）是一種突觸后受體，其在紋狀體中高度表達，D2R激活會導致與細胞分化、生長、代謝及凋亡等相關的信號通路。D2R在多巴胺能神經(jīng)傳遞和運動控制中也發(fā)揮著重要的作用。神經(jīng)科學研究的目的是全方位了解基因表達的改變?nèi)绾握{(diào)控帕金森病、肌張力障礙、舞蹈癥、嗜睡癥、強迫癥、精神錯亂和情緒不穩(wěn)定等疾病引發(fā)的認知功能障礙。本研究對小鼠腦部黑質區(qū)[3]神經(jīng)元[1,2]中的D2多巴胺受體表達水平進行了檢測。使用傳統(tǒng)的熒光寬視場成像時，圖像結果可能非常模糊，因此，通常會使用共聚焦顯微鏡來代替[4]。研究結果顯示，與傳統(tǒng)寬場顯微鏡相比，通過使用Instant Computational Clearing（ICC）的THUNDER Imager 3D Assay能更加清晰地觀察到小鼠腦黑質致密區(qū)的D2多巴胺受體（D2R）。

挑 戰(zhàn)  

在這種神經(jīng)科學研究中，能夠快速篩查腦部樣本的成像解決方案會非常有用。高質量的圖像對于清晰解析被染色的多巴胺受體也必不可少。較厚的樣本需要以良好的對比度對其內(nèi)部深處進行成像。寬視場顯微鏡成像快速，并具有較高的檢測靈敏度，但由于非焦平面的信號干擾，通常會在厚樣本上觀察到模糊信號，從而顯著降低圖像的對比度[5,6]。

方 法  

本研究中使用了小鼠大腦黑質區(qū)樣本，對其進行免疫染色，以顯示D2多巴胺受體（D2R）（紅色）、神經(jīng)元（TH抗體，綠色）和細胞核（DAPI，藍色）。使用倒置的復合顯微鏡平臺THUNDER Imager 3D Assay對腦樣本進行了成像，并應用了即刻成像解析（ICC）。

結 果  

在本研究中，ICC后的THUNDER圖像（見圖1）中實時顯示了小鼠腦樣本深處的清晰細節(jié)，且無任何離焦模糊。

圖1：顯示D2R（紅色）、CA神經(jīng)元（綠色）和細胞核（藍色）的小鼠腦部圖像。

A) 原始寬場數(shù)據(jù)和 B) 應用ICC后的數(shù)據(jù)。

圖片來源：Qi Wang博士，美國德克薩斯州休斯頓貝勒醫(yī)學院。

結 論

與傳統(tǒng)的寬場成像結果相比，THUNDER圖像可以更清晰地顯示被染色受體在腦部的位置。

錐板、平板和同軸圓筒？選擇的煩惱！

       由于現(xiàn)在流變儀用戶通常會擁有多個測試夾具，可以從流變專業(yè)角度表征大部分材料。但是，選擇正確的測夾具應該遵循什么標準呢？

       選擇Z合適的測試系統(tǒng)，需要考慮下列問題：

       樣品稠度如何？位于流變之路的哪一段？

       有無顆粒，粒徑大?。?/p>

       樣品量有多少？

       容不容易清洗？

       樣品發(fā)生沉降或溶劑是否揮發(fā)？

       不同測試系統(tǒng)的優(yōu)缺點？

       樣品稠度？

       表1 給出了從低粘度液體到固體不同材料的總覽和大致分類。每一列給出Z通用測試類型和推薦測試夾具。

       樣品粘度越低，測試轉子的表面積應該要越大。

       低粘度樣品通常使用同軸圓筒測試系統(tǒng)測試。在高剪切速率下，離心力導致測試間隙中產(chǎn)生湍流（Taylor 旋渦），使得表觀粘度增加。因此，不應該超過臨界剪切速率。

       我們的推薦：越是粘性的材料，更應該采用類似錐板或平板測試夾具。

       有無顆粒，粒徑大??？

       測試系統(tǒng)的選擇也依賴于樣品中顆粒的Z大粒徑。測試間隙應該足夠大，保證顆粒之間無互相干擾。因此，測試間隙應該至少大于Z大粒徑的5 倍（10 倍更好）。

       這對錐板夾具更為關鍵，為防止錐和底板發(fā)生摩擦，在錐頂端打磨掉一定的高度，成為平臺。圖2 顯示通用錐板的間隙值。

       如果樣品中含有顆粒，會在頂端發(fā)生聚集，產(chǎn)生不真實的結果。

       如果樣品中包含大顆粒，應該使用平行板夾具。測量間隙可以根據(jù)需要設定(推薦: 0.25 mm ~ 2 mm)。

       有多少樣品可用于測試？

       有時由于只有少量樣品而限制了測試夾具的選擇，因而無法選擇同軸圓筒測試系統(tǒng)。

這種情況下，推薦使用錐板或平行板夾具，比如，只有0.09ml樣品，可采用CP40-0.3(直徑: 40 mm, 角度: 0.3°)。

       清洗是否困難？

       如果測試結束后測試系統(tǒng)難以清洗，可更換為平行板或錐板，同軸圓筒測試系統(tǒng)清洗相對困難。

所有類型的測試系統(tǒng)都有一次性配件，可拋棄或者單獨清洗，一次性配件是固化過程測量所需要的。

       樣品是否會沉淀或揮發(fā)？

       樣品含有溶劑，若使用平行板，錐板或雙間隙系統(tǒng)，樣品可能在邊緣變干，導致測試的粘度偏高。

       因此可能的話，請使用同軸圓筒系統(tǒng)，即使樣品表面變干，也不影響測試結果。

       當使用錐板和平行板測試系統(tǒng)時，有以下幾種方法防止樣品揮發(fā)變干：

       使用低粘度硅油涂在樣品周圍或表面

       使用防揮發(fā)罩，形成溶劑的飽和蒸氣壓

       如果使用帕爾貼上控溫罩，可以使用專用的防揮發(fā)模塊，達到Z大程 度的密封和減少樣品裸露面積。

       如果樣品發(fā)生沉降，由于只測試了液相，樣品粘度可能偏低，對此類樣品推薦使用同軸圓筒系統(tǒng)。

      不同測試系統(tǒng)的優(yōu)缺點？

       特殊情況解決方案

       如果樣品滑移，應該使用磨砂或刻痕夾具，對挑戰(zhàn)性樣品需要特殊材質的夾具。如果樣品中顆粒粒徑大于1mm，推薦使用球型系統(tǒng)或槳式轉子。

       如果使用特殊系統(tǒng)，每次都采用相同的方法是很重要的，以獲得可以比較的結果。

鋼鐵行業(yè)雖未被列入ZD重金屬防控行業(yè)，但因其落后的冶煉、涂鍍工藝以及附屬的采礦選礦、鐵合金等帶來重金屬的污染依然不容忽視。因此在十三屆全國人們代表大會上就有代表提出要推進鋼鐵等行業(yè)的改造，施行高污染排放標準并且限期達標。今天金索坤和您聊一聊鋼鐵工業(yè)中重金屬污染以及主要的檢測技術。

重金屬污染特點

重金屬污染與其他污染物相比，具有三個顯著的特點:一為毒性，二為富集性和滯后性，三為難降解和難治理性。它的特點使得其對環(huán)境污染Z終造成對人健康的嚴重危害，其中對人體危害Z大的為Pb（鉛）、Hg（汞）、As（砷）、Cd（鎘）、Cr（鉻） 5 種。其中工業(yè)重金屬污染大多通過廢氣、廢水、固體廢物以及產(chǎn)品進入環(huán)境，通過在空氣、水域、土壤、生物體中遷移，在植物、動物和人體中富集，由于難以降解，從而對環(huán)境和人的健康造成很大的危害，產(chǎn)生不可逆轉的影響。

鋼鐵企業(yè)重金屬污染物的來源

鋼鐵企業(yè)重金屬元素主要由原(輔助)料、燃料帶入，在高溫燒結、冶煉、軋制過程中，隨著廢氣、廢水.固體廢物,產(chǎn)品與副產(chǎn)品排出；另外原(輔助)料，燃料的轉運.破碎.堆存(儲存)中散逸煙(粉)塵也攜帶微量重金屬元素。鋼鐵企業(yè)排放物中的重金屬元素的量和種類取決于原(輔助)科的成分和組成.燃科的種類、成分和組成。

鋼鐵企業(yè)重金屬污染物的檢測

鋼鐵行業(yè)中對人體危害較大的重金屬元素主要為Pb（鉛）、Hg（汞）、As（砷）、Cd（鎘）、Cr（鉻） 5 種，其中對人體和環(huán)境危害Z大的主要為砷、汞，對于這兩種的元素檢測主要是應用原子熒光光譜法，其原理是：其中檢測這五種重金屬元素Z常用采用的方法的原理分別為：

試樣在一定酸度下與硼氫化鉀溶液通過氫化物發(fā)生器產(chǎn)生氫化物，隨載氣進人石英管原子化，在待測元素的特征波長處測定其中熒光強度,將測得的試液的熒光強度與標準溶液的熒光強度相比較,得出試液中待測元素的含量。（SN/T 2680-2010 鐵礦石中砷、汞、鎘、鉛、鉍含量的測定 原子熒光光譜法，GB/T 20127.2-2006 鋼鐵及合金 痕量元素的測定 第2部分氫化物發(fā)生－原子熒光光譜法測定砷含量）

從鋼鐵工業(yè)中重金屬的檢測方法看出原子熒光光度計在鋼鐵檢測中發(fā)揮重要作用。北京金索坤技術開發(fā)有限公司作為市面上唯yi一家只專注原子熒光光度計的研發(fā)以及生產(chǎn)的高薪技術企業(yè)會一如既往的為原子熒光技術的發(fā)展探索乾坤，用更加優(yōu)質GX的原子熒光光度計和其他各種檢測儀器一起為鋼鐵工業(yè)的檢測貢獻力量.

新產(chǎn)品SK-盛析原子熒光光度計有以下優(yōu)勢：

1）采用與ICP-MS相同的連續(xù)進樣方式，提高穩(wěn)定性及測試效率,30s/3次數(shù)據(jù)。

2）無需動力，自動排廢，提高反應穩(wěn)定性，精簡裝置。

3）電路上增加分道信號控制模塊，可保證雙道同測砷銻及砷汞同測時，效果更佳。

4）氬氣流量采用進口質量流量計的數(shù)字控制方式，提高儀器在長時間工作下的穩(wěn)定性

5）新增添了審計追蹤功能,有效做到數(shù)據(jù)溯源。

金索坤SK-盛析 原子熒光光度計