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使用眼科手術(shù)顯微鏡術(shù)中OCT進(jìn)行殘留碎片評估

  • 憑借顯著優(yōu)化視野的高jingzhun性和同步性,眼科手術(shù)顯微鏡術(shù)中OCT成像系統(tǒng)可以幫助眼科醫(yī)生在眼科手術(shù)中實現(xiàn)高水準(zhǔn)的手術(shù)效果。


    眼外科醫(yī)生分享了在白內(nèi)障和視網(wǎng)膜手術(shù)中使用眼科手術(shù)顯微鏡術(shù)中OCT的經(jīng)驗


    關(guān)鍵經(jīng)驗

    眼科手術(shù)顯微鏡有一種內(nèi)置術(shù)中OCT的高級成像解決方案,設(shè)計用于改善眼前后節(jié)手術(shù)的工作流程,實現(xiàn)高精準(zhǔn)度。


    醫(yī)生分享了在白內(nèi)障手術(shù)中使用眼科手術(shù)顯微鏡術(shù)中OCT成像系統(tǒng)的體驗。醫(yī)生特別強(qiáng)調(diào)了使用這款成像解決方案在檢測和處理殘余晶狀體碎片的優(yōu)勢。由于這些晶狀體碎片會被手術(shù)切口或水腫遮擋,因此很難看到。眼科手術(shù)顯微鏡術(shù)中OCT可以有效定位殘留晶狀體碎片,從而改善手術(shù)效果,降低術(shù)后并發(fā)癥和二次手術(shù)的風(fēng)險。


    關(guān) 于 EnFocus

    EnFocus是用于眼科手術(shù)顯微鏡的術(shù)中OCT。它可以呈現(xiàn)出高度清晰的實時眼前節(jié)和眼后節(jié)圖像,便于觀察眼底下表面顯微結(jié)構(gòu)。除了角膜移植術(shù)和白內(nèi)障手術(shù),在角膜、青光眼和視網(wǎng)膜手術(shù)中,術(shù)中OCT同樣可以提供相同的優(yōu)勢。它也是基因治療中一項重要的輔助工具。EnFocus可以結(jié)合眼科手術(shù)顯微鏡使用,提供全面的可視化效果。

    免責(zé)聲明:本文中醫(yī)療專業(yè)人員的陳述和解釋僅代表其個人觀點和經(jīng)驗,并不代表其所屬機(jī)構(gòu)的觀點。


    殘留晶狀體碎片評估

    除了視網(wǎng)膜手術(shù)這一典型的適用領(lǐng)域,術(shù)中OCT在白內(nèi)障手術(shù)中也能夠發(fā)揮重要的作用,尤其是用于評估殘留晶狀體碎片。


    手術(shù)結(jié)束時,我懷疑存在晶狀體碎片。借助術(shù)中OCT,可以突出顯示殘留碎片。碎片尺寸較大,隱藏在主切口的水腫后面。


    當(dāng)碎片尺寸相對較小,隱藏在輔助切口后面。然而,這些碎片受切口附近的角膜水腫影響,很難發(fā)現(xiàn)。這時候術(shù)中OCT便可以發(fā)揮重要的作用。


    一般是對眼后節(jié)進(jìn)行360°環(huán)形掃描。使用顯微鏡腳踏開關(guān),可以返回手術(shù)區(qū)域并分析圖像。這樣就可以看到輔助切口水腫后面有一個隱藏的殘留碎片。


    在別的眼科手術(shù)中也能看到虹膜角膜角度有微小的殘留碎片。


    術(shù)中OCT的優(yōu)勢

    在眼科手術(shù)中,術(shù)中OCT可以在白內(nèi)障手術(shù)中發(fā)揮重要的作用。醫(yī)生可以用它發(fā)現(xiàn)殘留碎片,避免幾天或幾周后進(jìn)行二次手術(shù),還可以減少術(shù)后并發(fā)癥。所以說,術(shù)中OCT是一種提高白內(nèi)障手術(shù)質(zhì)量和完善性的有效工具。


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熱門問答

使用眼科手術(shù)顯微鏡術(shù)中OCT進(jìn)行殘留碎片評估

憑借顯著優(yōu)化視野的高jingzhun性和同步性,眼科手術(shù)顯微鏡術(shù)中OCT成像系統(tǒng)可以幫助眼科醫(yī)生在眼科手術(shù)中實現(xiàn)高水準(zhǔn)的手術(shù)效果。


眼外科醫(yī)生分享了在白內(nèi)障和視網(wǎng)膜手術(shù)中使用眼科手術(shù)顯微鏡術(shù)中OCT的經(jīng)驗。


關(guān)鍵經(jīng)驗

眼科手術(shù)顯微鏡有一種內(nèi)置術(shù)中OCT的高級成像解決方案,設(shè)計用于改善眼前后節(jié)手術(shù)的工作流程,實現(xiàn)高精準(zhǔn)度。


醫(yī)生分享了在白內(nèi)障手術(shù)中使用眼科手術(shù)顯微鏡術(shù)中OCT成像系統(tǒng)的體驗。醫(yī)生特別強(qiáng)調(diào)了使用這款成像解決方案在檢測和處理殘余晶狀體碎片的優(yōu)勢。由于這些晶狀體碎片會被手術(shù)切口或水腫遮擋,因此很難看到。眼科手術(shù)顯微鏡術(shù)中OCT可以有效定位殘留晶狀體碎片,從而改善手術(shù)效果,降低術(shù)后并發(fā)癥和二次手術(shù)的風(fēng)險。


關(guān) 于 EnFocus

EnFocus是用于眼科手術(shù)顯微鏡的術(shù)中OCT。它可以呈現(xiàn)出高度清晰的實時眼前節(jié)和眼后節(jié)圖像,便于觀察眼底下表面顯微結(jié)構(gòu)。除了角膜移植術(shù)和白內(nèi)障手術(shù),在角膜、青光眼和視網(wǎng)膜手術(shù)中,術(shù)中OCT同樣可以提供相同的優(yōu)勢。它也是基因治療中一項重要的輔助工具。EnFocus可以結(jié)合眼科手術(shù)顯微鏡使用,提供全面的可視化效果。

免責(zé)聲明:本文中醫(yī)療專業(yè)人員的陳述和解釋僅代表其個人觀點和經(jīng)驗,并不代表其所屬機(jī)構(gòu)的觀點。


殘留晶狀體碎片評估

除了視網(wǎng)膜手術(shù)這一典型的適用領(lǐng)域,術(shù)中OCT在白內(nèi)障手術(shù)中也能夠發(fā)揮重要的作用,尤其是用于評估殘留晶狀體碎片。


手術(shù)結(jié)束時,我懷疑存在晶狀體碎片。借助術(shù)中OCT,可以突出顯示殘留碎片。碎片尺寸較大,隱藏在主切口的水腫后面。


當(dāng)碎片尺寸相對較小,隱藏在輔助切口后面。然而,這些碎片受切口附近的角膜水腫影響,很難發(fā)現(xiàn)。這時候術(shù)中OCT便可以發(fā)揮重要的作用。


一般是對眼后節(jié)進(jìn)行360°環(huán)形掃描。使用顯微鏡腳踏開關(guān),可以返回手術(shù)區(qū)域并分析圖像。這樣就可以看到輔助切口水腫后面有一個隱藏的殘留碎片。


在別的眼科手術(shù)中也能看到虹膜角膜角度有微小的殘留碎片。


術(shù)中OCT的優(yōu)勢

在眼科手術(shù)中,術(shù)中OCT可以在白內(nèi)障手術(shù)中發(fā)揮重要的作用。醫(yī)生可以用它發(fā)現(xiàn)殘留碎片,避免幾天或幾周后進(jìn)行二次手術(shù),還可以減少術(shù)后并發(fā)癥。所以說,術(shù)中OCT是一種提高白內(nèi)障手術(shù)質(zhì)量和完善性的有效工具。


2023-01-31 15:25:45 291 0
使用EnFocus術(shù)中OCT進(jìn)行白內(nèi)障切口分析


眼科手術(shù)必須滿足高精 準(zhǔn)度的要求,才能讓手術(shù)操作和組織操作達(dá)到理想效果。在幫助眼外科醫(yī)師在眼科手術(shù)中獲得高精 準(zhǔn)度和提升手術(shù)效果方面,眼科手術(shù)顯微鏡發(fā)揮著重要的作用。


關(guān)鍵經(jīng)驗

醫(yī)生在眼科手術(shù)中使用內(nèi)置于眼科手術(shù)顯微鏡的EnFocus術(shù)中OCT成像系統(tǒng),獲得了更加清晰的手術(shù)視野。借助這一先進(jìn)的技術(shù),眼科醫(yī)生可以看到眼底下組織的細(xì)節(jié),并在手術(shù)過程中實時確認(rèn)組織對手術(shù)操作的反應(yīng)。


醫(yī)生介紹了EnFocus術(shù)中OCT成像系統(tǒng)為白內(nèi)障手術(shù)分析提供的多種優(yōu)勢。介紹了成像系統(tǒng)如何有助于在白內(nèi)障手術(shù)中獲得理想的精 準(zhǔn)度,包括手術(shù)過程中準(zhǔn)確評估切口結(jié)構(gòu)


關(guān)于EnFocus

EnFocus是用于眼科手術(shù)顯微鏡的術(shù)中OCT。它可以呈現(xiàn)出高度清晰的實時眼前節(jié)和眼后節(jié)圖像,便于觀察眼底下表面顯微結(jié)構(gòu)。除了角膜移植術(shù)和白內(nèi)障手術(shù),在角膜、青光眼和視網(wǎng)膜手術(shù)中,術(shù)中OCT同樣可以提供相同的優(yōu)勢。它也是基因治 療中一項重要的輔助工具。EnFocus可以結(jié)合眼科手術(shù)顯微鏡使用,提供全面的可視化效果。


*免責(zé)聲明:本文中醫(yī)療專業(yè)人員的陳述和解釋僅代表其個人觀點和經(jīng)驗,并不代表其所屬機(jī)構(gòu)的觀點。


現(xiàn)介紹OCT另外一種有趣的用途。它可以在白內(nèi)障手術(shù)中提供寶貴的切口結(jié)構(gòu)信息。


手術(shù)開始階段的切口結(jié)構(gòu)分析

從眼科手術(shù)開始階段,術(shù)中OCT便可以提供關(guān)于切口結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確信息。醫(yī)生可以準(zhǔn)確地確定切口長度以及淺表和深部皮瓣的厚度。我們可以同時對縱斷面和橫斷面進(jìn)行分析。


切口分析:縫合前

這里,醫(yī)生可以在手術(shù)結(jié)束后分析切口的結(jié)構(gòu)。在縫合前,注意到切口的橫斷面呈不規(guī)則的橢圓形。


切口分析:縫合中

切口經(jīng)過了調(diào)整。可以看到它的橫斷面呈更加明顯的橢圓形。在縱斷面上,可以看到一個更筆直的切口,而且內(nèi)外部都有間隙。


切口分析:縫合中和縫合后

醫(yī)生可以使用術(shù)中OCT來分析縫合過程中切口結(jié)構(gòu)的變化。注意到切口的路徑消失了,隱于角膜水腫之中。在這里,可以看到縫合前和縫合后的切口。


切口分析:非密封切口的特點

當(dāng)醫(yī)生分析密封切口時,切口的路徑是不可見的。注意到角膜的前表面曲率是比較規(guī)則的,而角膜后表面的角膜水腫則伴有隆起。


在非密封切口中,盡管已經(jīng)完成了縫合,醫(yī)生注意到在這種情況下仍然存在內(nèi)部間隙和局部后彈力層脫離。


在這種情況下,盡管已經(jīng)縫合,但切口的路徑仍然可見。醫(yī)生還可以分析橫斷面。在這種情況下,觀察到切口結(jié)構(gòu)是傾斜的。這就解釋了為何切口是未密封的。


切口分析:縫合后

縫合非密封切口時,它的路徑變得不可見。尤其要注意前表面曲率幾乎沒有變化。因此,曲率調(diào)整主要針對于后表面,它變成了一個雙凸點。


結(jié)論:

提高白內(nèi)障手術(shù)的質(zhì)量


根據(jù)醫(yī)生的經(jīng)驗,術(shù)中OCT可以提供很多有趣的切口結(jié)構(gòu)信息。它是實現(xiàn)更加細(xì)致和準(zhǔn)確的分析的有效工具,有助于提升白內(nèi)障手術(shù)的質(zhì)量、精 準(zhǔn)性和整體效果。


2023-01-09 16:56:18 183 0
在糖尿病患者治療中使用術(shù)中OCT

來自視網(wǎng)膜、玻璃體和黃斑疾病治療醫(yī)師A博士的經(jīng)驗:

采訪中,A博士詳細(xì)講述了自己使用帶有內(nèi)置術(shù)中OCT的眼科顯微鏡經(jīng)驗。他表示,眼科顯微鏡在糖尿病患者治療中是一種非常有用的工具。使用內(nèi)置OCT的眼科顯微鏡,可以可視化黃斑,了解是否存在黃斑裂孔、視網(wǎng)膜前膜和其它可能存在于視網(wǎng)膜表面的牽引性膜。A博士是位于某市區(qū)的視網(wǎng)膜中心的視網(wǎng)膜疾病專家。

*本視頻采訪中所述的觀點僅代表相關(guān)醫(yī)師的個人意見,并不一定代表其所屬的機(jī)構(gòu)的觀點。

轉(zhuǎn)

A博士,是一位視網(wǎng)膜疾病專家。某市視網(wǎng)膜中心專注于研究視網(wǎng)膜內(nèi)科和外科疾病,在某都市區(qū)設(shè)有診療機(jī)構(gòu)。在此之前的十多年中,曾在某大學(xué)的眼科研究所擔(dān)任教職,負(fù)責(zé)培訓(xùn)視網(wǎng)膜領(lǐng)域的研究員。在醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療,經(jīng)常使用特定的眼科顯微鏡


實際上,醫(yī)生們很早便開始使用眼科顯微鏡了。A博士在擔(dān)任住院醫(yī)生和研究員期間就提供過相關(guān)的培訓(xùn),臨床治療中也有使用。因此,當(dāng)醫(yī)生要升級手術(shù)室顯微鏡時,醫(yī)生自然希望嘗試zuixin款的眼科顯微鏡?,F(xiàn)在A博士要分享一款眼科顯微鏡。A博士所在醫(yī)院早在2018年初便引進(jìn)了一款眼科顯微鏡。 它的清晰度更高,景深更大,這一點令醫(yī)生感觸頗深。此外,它還能夠很好地集成非接觸眼底廣角觀察系統(tǒng),整個流程都是無縫式操作。最為重要的一點是集成的術(shù)中OCT技術(shù)或EnFocus系統(tǒng)。醫(yī)生已經(jīng)在很多手術(shù)中使用過,效果非常好。


可以說,EnFocus已經(jīng)成為醫(yī)生的一項重要工。熟練操作后,會發(fā)現(xiàn)它的優(yōu)勢也越來越多。在糖尿病玻璃體切割術(shù)中,醫(yī)生尤其會使用到它。對于部分患有糖尿病玻璃體積血的患者,當(dāng)在門診進(jìn)行檢查時,很多時候,他們的視力都極其有限,無法清晰地看到他們的視網(wǎng)膜黃斑。一旦這些患者進(jìn)入手術(shù)室,醫(yī)生將積血清除后,便可以看到視網(wǎng)膜黃斑,對這些患者進(jìn)行OCT,可以幫助醫(yī)生了解是否存在黃斑裂孔、視網(wǎng)膜前膜和其它可能存在于視網(wǎng)膜表面的牽引性膜。因此,在糖尿病患者治療中,眼科顯微鏡的效果非常好。


針對糖尿病牽引性視網(wǎng)膜脫離的情況,當(dāng)醫(yī)生嘗試確定解剖面時,術(shù)中OCT非常好用。 醫(yī)生還會將其用于黃斑下出血的情況,在這種情況下,醫(yī)生會用它來取代視網(wǎng)膜下組織型纖維蛋白溶酶原激活劑。眼科顯微鏡可以幫助醫(yī)生進(jìn)行定位。它還可以幫助進(jìn)行玻璃體黃斑牽引,確保在手術(shù)結(jié)束時釋放存在的任何牽引?;蛑委熓橇硪粋€它可以發(fā)揮重要作用的領(lǐng)域?,F(xiàn)在越來越多的面向視網(wǎng)膜下間隙領(lǐng)域的基因治療藥物正在進(jìn)入臨床研究階段。 所以,未來術(shù)中OCT將成為視網(wǎng)膜下間隙定位以及基因藥物給藥的關(guān)鍵應(yīng)用。


眼科顯微鏡的腳踏開關(guān)是醫(yī)生喜歡的一項功能。它采用完全定制化設(shè)計,可以用于控制眼科顯微鏡的各個方面和術(shù)中OCT模式。醫(yī)生可以使用腳踏開關(guān),根據(jù)需求靈活地打開和關(guān)閉OCT模式,還可以調(diào)整OCT的焦距。靈活方便的操控會給人帶來很好的使用體驗。眼科顯微鏡的可視化也是醫(yī)生非常喜歡的一個功能。在觀察眼后節(jié)或使用雙目鏡時,融合光學(xué)可以提高清晰度、優(yōu)化景深。 它與非接觸眼底廣角觀察系統(tǒng)無縫集成。這個特性有助于改進(jìn)工作流,例如當(dāng)醫(yī)生開始進(jìn)行玻璃體切除術(shù)時,顯微鏡的光線會關(guān)閉,自動倒像。這類模式極大地優(yōu)化了我們的工作流程。


助手鏡也有亮點。在與住院醫(yī)生和研究員合作時,醫(yī)生經(jīng)常會使用助手鏡,在這個方面,眼科顯微鏡有一個很大的優(yōu)勢,就是在助手鏡中看到的和從主刀鏡中看到的視野是完全一樣的。 這一點非常有用。最后一點是記錄,在工作中,醫(yī)生經(jīng)常需要錄制手術(shù)過程和編輯視頻,借助高清攝像頭和好的記錄系統(tǒng),我可以連接外接硬盤并在聯(lián)機(jī)狀態(tài)下進(jìn)行編輯,不僅高效,而且成片質(zhì)量很高。


眼科顯微鏡和EnFocus OCT有助于改進(jìn)臨床效果,尤其是在糖尿病玻璃體切除術(shù)中。就像前面所說,借助視網(wǎng)膜黃斑狀態(tài)的實時信息,醫(yī)生可以更好地制定手術(shù)決策。簡而言之,它有很多實用性功能,醫(yī)生可以親自體驗一下。在臨床評估中,眼科顯微鏡和EnFocus的優(yōu)勢尤其明顯,使用術(shù)中OCT,醫(yī)生可以獲得高的清晰度,更好地發(fā)揮技術(shù)優(yōu)勢,而且用順手后,會逐漸發(fā)現(xiàn)越來越多的優(yōu)勢。

2023-02-13 15:33:19 256 0
【白皮書下載】術(shù)中OCT輔助基因治 療(英)

術(shù)中OCT提高視網(wǎng)膜下基因增強(qiáng)治 療的手術(shù)安全性和治 療準(zhǔn)確性



基因增強(qiáng)治 療是一種眼部基因轉(zhuǎn)移方法,用于治 療當(dāng)功能蛋白不足表現(xiàn)為遺傳病時的常染色體隱性或X性染色體連鎖視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良。這些基因缺陷引發(fā)特定視力障礙和/或視網(wǎng)膜變性。


近期,基因治 療在視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良中的應(yīng)用引發(fā)了人們巨大的興趣。視網(wǎng)膜下基因治 療藥物注射術(shù)的技術(shù)要求較高,具有一定難度。術(shù)中光學(xué)相干斷層掃描(術(shù)中OCT)可提供實時信息并向外科醫(yī)生提供反饋,包括對眼后段結(jié)構(gòu)的滲透深度、注射液的分布和傳播、載體回流以及術(shù)中黃斑中心凹的完整性。


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2023-05-30 10:12:19 215 0
【Leica in Scope課程】術(shù)中OCT:基因治療程序的專家見解


第三期:

術(shù)中OCT:基因治 療程序的專家見解


課程簡介:

來自英國倫敦摩菲眼科醫(yī)院和大奧蒙德街兒童醫(yī)院的 Robert Henderson 醫(yī)師和來自比利時根特大學(xué)醫(yī)院的Fanny Nerinckx 博士將解釋術(shù)中OCT如何支持基因治 療程序以及它如何為外科醫(yī)生提供有價值的信息。他們將各自分享他們實踐中的臨床案例。


講者:

Mr. Robert Henderson

高級眼科顧問醫(yī)師

倫敦摩菲眼科醫(yī)院和大奧蒙德街兒童醫(yī)院

英國


Dr. Fanny Nerinckx

前后節(jié)眼科醫(yī)師

根特大學(xué)醫(yī)院   比利時


2023-06-16 11:53:01 211 0
徠卡眼科手術(shù)顯微鏡 M220如何 ?
 
2018-11-20 06:19:10 482 0
卒中術(shù)后腦組織病理學(xué)評估 - TTC染色

本文節(jié)選自《實驗卒中手術(shù)學(xué)》主編:楊國源

書號:ISBN 978-7-5046-6264-4/R·1648


氯化三苯基四氮唑(TTC)染色


       氯化三苯基四氮唑TTC(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride)染色是一種定量檢測腦梗塞體積的迅速、方便、便宜、可靠的方法,它是一種用于評價組織內(nèi)脫氫酶活性的標(biāo)準(zhǔn)染色方法。大腦切成2毫米的切片后,放入2%TTC溶液中,TTC能與正常線粒體氧化酶系統(tǒng)發(fā)生反應(yīng)而降解成深紅色,而梗塞部位受損以致線粒體缺乏降解TTC的酶的能力而不會被TTC染色,呈現(xiàn)白色,使得受損組織與正常組織極易區(qū)分開來。


       目前,很多學(xué)者釆用TTC染色標(biāo)記腦組織缺血性損傷,計算腦梗死灶體積。該方法能清楚地區(qū)分正常腦組織和梗死腦組織的界線,但要求實驗者在取材時要速度快,在極短時間內(nèi)將組織投入TTC溶液中。組織中斷血供時間過長,會造成新的損傷區(qū)域,致使測量出現(xiàn)較大誤差,甚至組織完全不能染色。剝離和切片時應(yīng)十分注意。因為腦組織十分脆軟,容易出現(xiàn)碎裂,給測量帶來不便(如下圖所示)。


MCAO術(shù)后TTC染色

白色為梗塞部位;深紅色為正常部位


一、實驗材料


       1.TTC溶液。

       2.磷酸鹽緩沖液。

       3.刀片。

       4.大腦模具。

       5.培養(yǎng)皿。

       6.載玻片。

       7.4%多聚甲醛。


二、TTC染色過程


       1.動物處死后,取腦并且小心地浸入低溫磷酸鹽緩沖液中。這樣使大腦更加堅硬,方便切片。

       2.用刀片把大腦切成2毫米厚片。

       3.切片時要小心,因為腦組織容易粘在刀片上。為了防止損傷,刀片先浸入2%TTC溶液中。TTC溶液對光和熱敏感,在不使用的時候要用鋁箔包好。切好的腦片放入TTC溶液中進(jìn)行染色并且持續(xù)觀察顏色的改變??梢约訜崾惯@個過程變快,比如放入37℃的培養(yǎng)箱。

       4.當(dāng)腦片表面開始變成粉紅色,翻轉(zhuǎn)腦片。染上色的是具有活性的腦組織。梗塞的部分由于線粒體失活,所以不能被染色,仍然為白色。

       5.當(dāng)腦片變成紅色,反應(yīng)結(jié)束,用磷酸鹽緩沖液洗去TTC溶液。

       6.腦片要進(jìn)行拍照,來確定梗塞量。也可以把腦片放入多聚甲醛中過夜進(jìn)行固定。這樣拍照更加方便。此步一定要注意避光,否則染色還會褪色。


三、應(yīng)用TTC檢測的注意點


       1.TTC染色是計算梗塞量的標(biāo)準(zhǔn)方法。

       2.TTC溶液對光敏感,因此要避光保存。

       3.染色前是否進(jìn)行磷酸鹽緩沖液灌注不影響實驗的結(jié)果。


文末福利


       掃描下方二維碼,申請SYRFLSI Ⅲ激光散斑血流成像系統(tǒng),造模完畢即可檢測造模效果,點擊查看大腦中動脈缺血模型的操作步驟。


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2020-04-03 09:08:22 1394 0
卒中術(shù)后腦組織病理學(xué)評估 - H&E染色

本文節(jié)選自《實驗卒中手術(shù)學(xué)》主編:楊國源

書號:ISBN 978-7-5046-6264-4/R·1648


1.冰凍切片蘇木素伊紅染色


1、將4%多聚甲醛灌注后的大腦,用冰凍切片機(jī)切片,厚度為10~40微米。

2、將腦片貼在載玻片上,并且吹干過夜。

3、將腦片脫脂(若是腦組織直接冰凍,則不需要脫脂):

       (a)將腦片浸沒在氯仿和乙醇混合物中至少1小時。

       (b)將腦片分別在、95%、70%和50%的乙醇中各浸泡5分鐘,然后用蒸餾水沖洗。

注意:必須等到片子完全干燥(沒有水滴)。如果腦片是幾天前準(zhǔn)備的,在染色之前必須放到蒸餾水中浸泡5分鐘。

4、染色步驟:

       (a)將蘇木素滴在腦片上,染色20~25分鐘。整個過程用眼睛或顯微鏡觀察,保證細(xì)胞核變藍(lán)。

       (b)用蒸餾水洗2次。

       (c)用0.25%的氨水溶液輕輕沖洗約10秒。

       (d)用蒸餾水洗2次。

       (e)用伊紅染色10秒

       (f)用蒸餾水洗2次。

       (g)用70%、80%、90%、95%、的乙醇脫水1次,每次3分鐘。

       (h)用乙醇與二甲苯混合液脫水3分鐘。

       (i)用二甲苯處理5分鐘

       (j)滴2~3滴封片劑,用蓋玻片封住腦片,準(zhǔn)備在顯微鏡下觀察。


2.石蠟切片的蘇木素-伊紅染色

1、修剪組織:如果大腦固定在4%6的多聚甲醛里,那么修剪組織必須在通風(fēng)櫥里進(jìn)行。去除小腦和嗅球部分。大腦用水沖洗干凈,冠狀切片切成3份。組織放在生理鹽水中。

2、處理以及石蠟包埋:在自動包埋機(jī)上進(jìn)行包埋。金屬盒放在機(jī)器中過夜。組織進(jìn)行梯度脫水,并用石蠟進(jìn)行包埋。

3、組織包埋的步驟:

       (a)加熱溫度控制在59~61℃;

       (b)樣品控制臺溫度在59~61℃;

       (c)冷凍臺溫度為5℃;

       (d)組織轉(zhuǎn)移到加熱臺上,浸在石蠟中,然后移至樣品控制臺。

注意:不要把樣品放反了,同時要保持它們的方向一致。把鐵塊放在冷凍臺上,冷卻20分鐘。

4、室溫下在切片機(jī)上切片:

       (a)水浴溫度控制在45~50℃。

       (b)石蠟組織放在冰水混合物中。

       (c)室溫下設(shè)置好切片機(jī)。

       (d)45℃,吹干載玻片20分鐘。

       (e)蠟塊固定在切片機(jī)上,修整蠟塊表面,直至大腦組織出現(xiàn)。

       (f)切片,厚度可根據(jù)試驗要求,切成4~10微米。

       (g)腦片轉(zhuǎn)移到水浴中,然后貼在載玻片上。

5、預(yù)染:載玻片在60℃的烘箱中烤片15分鐘,融化石蠟,使乙醇揮發(fā)。注意用架子架住載玻片。

6、HE染色:可以自動也可以手動進(jìn)行。

1)自動:染色在染色機(jī)中進(jìn)行,依次用以下溶液處理:

       (a)3次二甲苯;

       (b)2次乙醇;

       (c)2次95%乙醇;

       (d)蘇木素染色;

       (e)2次95%乙醇;

       (1)70%乙醇;

       (g)伊紅染色;

       (h)70%乙醇;

       (i)3次二甲苯。


2)手動:每一步驟約1~2分鐘,整個過程需要25~30分鐘。載玻片放入盒子中,滴2~3滴封片劑,然后用蓋玻片小心地蓋在上面。

① 注意事項:

       (a)封片前片子不要干燥,封片劑將地封住腦片;

       (b)在完全干燥之前保證片子平整;

       (c)在顯微鏡下觀察片子的染色效果。例如:如果組織在冰盒中的浸泡時間不足夠長,組織看起來會有皺褶。如果漂片溫度太高,片子會碎,如果溫度太低,片子不能漂浮。

② 手動的HE染色方法:

       (a)3次二甲苯,每次2分鐘,脫去脂肪和蠟;

       (b)乙醇,每片10滴;

       (c)95%乙醇,2次,每片10滴;

       (d)蒸餾水洗;

       (e)蘇木素染色15分鐘;

       (f)蒸餾水洗2次;

       (g)0.25%氨水洗,直至組織變藍(lán);

       (h)蒸餾水洗2次;

       (i)0.5%的伊紅染色,每片10~20滴;

       (j)95%乙醇,洗2次,每片10~15滴;

       (k)乙醇,每片10滴;

       (l)3次二甲苯,每片10滴。


蘇木素伊紅染色后細(xì)胞核呈藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)呈粉紅色或紅色。如下圖所示:

文末福利

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課程簡介:

術(shù)中 OCT 在您的視網(wǎng)膜手術(shù)中發(fā)揮作用,實時揭示表面下隱藏的細(xì)節(jié)。位于俄亥俄州辛辛那提的辛辛那提眼科研究所和辛辛那提兒童醫(yī)院的醫(yī)學(xué)博士 Robert Sisk 將討論他們?nèi)绾卧谌粘嵺`中使用配備 OCT 手術(shù)顯微鏡。通過將術(shù)中 OCT 整合到他們的實踐中,Sisk 博士和 Davis 博士能夠在復(fù)雜的手術(shù)過程中更有信心地進(jìn)行手術(shù),從而提升手術(shù)經(jīng)驗和患者的治療 效果。


講者:


Robert A. Sisk  博士

辛辛那提兒童醫(yī)院眼科研究中心  美國



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課程簡介:

來自英國南安普頓大學(xué)醫(yī)院的David Anderson醫(yī)師和來自羅馬尼亞Oculus 眼科診所的Ozana Moraru博士將分享新興技術(shù)趨勢如何改變眼前節(jié)手術(shù)。他們將通過臨床病例和手術(shù)視頻討論術(shù)中OCT和3D的價值。


講者:

Mr. David Anderson   

高級眼科顧問醫(yī)師

南安普頓大學(xué)醫(yī)院   英國


Dr. Ozana Moraru

眼科醫(yī)師

歐科路斯眼科診所  羅馬尼亞



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【數(shù)字PCR網(wǎng)絡(luò)研討會】

CRISPR編輯的細(xì)胞系中

使用數(shù)字PCR進(jìn)行標(biāo)記拷貝數(shù)評估

       1119日北京時間23:00巴黎時間:17:00),歐洲分子生物學(xué)實驗室研究員Moritz Kueblbeck將于Genomeweb平臺在線分享“CRISPR編輯的細(xì)胞系中使用數(shù)字PCR進(jìn)行標(biāo)記拷貝數(shù)評估”相關(guān)知識。

本網(wǎng)絡(luò)研討會將介紹如何使用dPCR快速定量CRISPR編輯的HeLa細(xì)胞中的綠色熒光蛋白拷貝數(shù)。討論還將介紹dPCR的工作原理和采集后的數(shù)據(jù)分析方法。

Moritz Kueblbeck在德國海德堡的癌癥研究ZX(DKFZ)做了八年的研究技術(shù)員。2014,他加入了Jan Ellenberg在海德堡的歐洲分子生物學(xué)實驗室,在不同實驗室的項目中,他使用CRISPR/Cas9方法利用內(nèi)源性的標(biāo)記蛋白(HeLaU-2 OS細(xì)胞進(jìn)行不同標(biāo)簽的純合敲入)進(jìn)行人類細(xì)胞系基因組編輯。

內(nèi)容簡介

l  熒光蛋白或自標(biāo)記是使用熒光顯微鏡研究活細(xì)胞中蛋白質(zhì)動力學(xué)的寶貴工具。然而,定量成像需要目標(biāo)蛋白(POI)的生理表達(dá)水平,特別是當(dāng)需要研究POI的化學(xué)計量相互作用時。

l  CRISPR使研究人員能夠標(biāo)記幾乎任何感興趣的目標(biāo)基因,使其可以研究相應(yīng)POI的生理表達(dá)水平。然而,正確編輯細(xì)胞克隆的產(chǎn)生和選擇——即標(biāo)記等位基因的預(yù)期數(shù)量和缺乏額外的整合——需要對標(biāo)記的拷貝數(shù)進(jìn)行定量評估。

l  探討dPCR是一種快速、可靠的熒光標(biāo)記CRISPR編輯細(xì)胞定量檢測方法。

 

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