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  閘北☆ 2017-03-18 00:00:00

  病原微生物種類繁多，變異迅速，快速鑒定病原微生物的檢驗(yàn)技術(shù)也在不斷發(fā)展前進(jìn)著。目前，應(yīng)用比較廣泛的病原微生物檢測(cè)方法主要有直接涂片鏡檢、分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)、血清學(xué)反應(yīng)、核酸分子雜交、基因芯片、多聚酶鏈反應(yīng)等，該文對(duì)這些檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展做一綜述。 對(duì)人和動(dòng)物具有致病性的微生物稱為病原微生物，又稱病原體，有病毒、細(xì)菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體、真菌、放線菌、朊粒等。這些病原微生物可引起感染、過(guò)敏、腫瘤、癡呆等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年來(lái)出現(xiàn)的SARS、高致病性禽流感、西尼羅病毒感染等疾病的傳染性極強(qiáng)，往往造成世界性大流行，因此對(duì)病原體的檢測(cè)必須做到快速、準(zhǔn)確。常規(guī)病原學(xué)檢測(cè)方法操作繁瑣，檢測(cè)周期長(zhǎng)，而且對(duì)操作人員技術(shù)水平要求比較高。隨著醫(yī)學(xué)微生物學(xué)研究技術(shù)的不斷發(fā)展，病原學(xué)診斷已不再局限于病原體水平，深入到分子水平、基因水平的檢測(cè)手段不斷出現(xiàn)并被應(yīng)用于臨床和實(shí)驗(yàn)室 J。核酸分子雜交技術(shù)、PCR技術(shù)、基因芯片技術(shù)等檢測(cè)方法，自動(dòng)化程度高，快速省時(shí)、無(wú)污染、結(jié)果精確，可以準(zhǔn)確靈敏地鑒定病原微生物。1 傳統(tǒng)的病原微生物的檢測(cè)方法傳統(tǒng)的病原微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢查以染色、培養(yǎng)、生化鑒定等為主，將標(biāo)本直接涂片染色鏡檢和接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng)是對(duì)細(xì)菌或真菌感染性疾病進(jìn)行病原學(xué)診斷的常用方法。1．1 直接涂片鏡檢病原微生物體形體積微小，大多無(wú)色半透明狀，將其染色后可借助顯微鏡觀察其大小、形態(tài)、排列等。直接涂片染色鏡檢簡(jiǎn)便快速，對(duì)那些具有特殊形態(tài)的病原微生物感染仍然適用，例如淋球菌感染、結(jié)核分枝桿菌、螺旋體感染等的早期初步診斷。直接涂片鏡檢不需要特殊的儀器和設(shè)備，在基層實(shí)驗(yàn)室里仍然是十分重要的病原微生物檢測(cè)手段。1．2 分離培養(yǎng)與生化反應(yīng) 分離培養(yǎng)主要用于臨床標(biāo)本(如血液、痰、糞便等)或培養(yǎng)物中有多種細(xì)菌時(shí)對(duì)某一種細(xì)菌的分離。細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖需要一定時(shí)間，檢測(cè)周期較長(zhǎng)，不能同時(shí)處理批量樣本。為解決這一問(wèn)題，各種自動(dòng)化培養(yǎng)和鑒定系統(tǒng)不斷產(chǎn)生，傳統(tǒng)鑒定方法也在逐步改進(jìn)，大大加快了檢驗(yàn)速度。例如Microscan WalLCAway全自動(dòng)微生物分析儀，可同時(shí)做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，檢驗(yàn)500多個(gè)菌種。苛養(yǎng)菌如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求比較高，常規(guī)培養(yǎng)陽(yáng)性率低。雍剛 等將不要同比例的葡萄糖、玉米淀粉、生長(zhǎng)因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌劑加入到巧克力培養(yǎng)基中制成了新型淋病奈瑟菌培養(yǎng)基，大大提高了淋病奈瑟菌的分離培養(yǎng)率。蘇盛通等在營(yíng)養(yǎng)瓊脂中加人了中藥紅棗、赤小豆培養(yǎng)甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、肺炎鏈球菌等細(xì)菌，生長(zhǎng)指數(shù)明顯高于血平板。1．3 組織細(xì)胞培養(yǎng) 活組織細(xì)胞培養(yǎng)適于專營(yíng)活組織細(xì)胞內(nèi)生存的病原體，包括病毒、立克次體、衣原體等。不同病原體敏感的組織細(xì)胞是不一樣的，將活細(xì)胞從病原體敏感的動(dòng)物組織中取出在體外進(jìn)行原代培養(yǎng)或用病原體敏感細(xì)胞系進(jìn)行傳代培養(yǎng)，再將病原體接種于相應(yīng)的組織細(xì)胞中后，病原體可在其中繁殖增長(zhǎng)，引起特異性的細(xì)胞病變效應(yīng)。也可以將病原體直接接種于敏感動(dòng)物體內(nèi)，引起相應(yīng)組織器官出現(xiàn)特異的病理學(xué)改變。往往可以根據(jù)這些特異的病變對(duì)病原體進(jìn)行鑒定。2 血清學(xué)與免疫學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)是通過(guò)已知的抗體或抗原來(lái)檢測(cè)病原體的抗原或抗體從而對(duì)病原體進(jìn)行快速鑒定的技術(shù)，簡(jiǎn)化了鑒定步驟，常用的方法包括血清凝集技術(shù)、乳膠凝集實(shí)驗(yàn)、熒光抗體檢測(cè)技術(shù)、協(xié)同凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫測(cè)試技術(shù)等。酶聯(lián)免疫技術(shù)的應(yīng)用大大提高了血清學(xué)檢測(cè)的敏感性和特異性，不僅可檢測(cè)樣本中病原體抗原，也可檢測(cè)機(jī)體的抗體成分。幽門螺奸菌在我國(guó)人群感染率高達(dá)50％ ～80％ ，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)唾液中抗HP抗體來(lái)診斷HP感染，其結(jié)果滿意。乙型肝炎病毒(HBV)在我國(guó)人群中感染率極高，ELISA應(yīng)用于乙型肝炎病人早期血清學(xué)診斷的效果Z為明顯。臨床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何從這些細(xì)菌中分離出目標(biāo)菌是關(guān)鍵。免疫磁珠分離技術(shù)(IMBS)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的在微生物檢測(cè)領(lǐng)域中一種新技術(shù)。其基本原理是將特定病原體的單抗或多抗或二抗偶聯(lián)到磁珠微球上，通過(guò)抗原抗體反應(yīng)形成磁珠一目標(biāo)病原體復(fù)合物或磁珠一一抗一目標(biāo)病原體復(fù)合物，在外部磁場(chǎng)磁力的作用下，將目標(biāo)病原體分離出來(lái)。目前已經(jīng)開(kāi)發(fā)出了針對(duì)各種病原體的免疫磁珠，如大腸埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、軍團(tuán)菌等，廣泛應(yīng)用到各級(jí)科研和實(shí)驗(yàn)室 。經(jīng)IMBS分離出的白色念珠菌可直接在顯微鏡下檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間縮短至4 h。IM—Bs還可以和其它檢測(cè)技術(shù)聯(lián)合來(lái)檢測(cè)病原菌，免疫磁珠分離得到的目標(biāo)菌可繼續(xù)用于分離培養(yǎng)使大腸埃希菌0157Z低檢測(cè)限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS結(jié)合聚合酶鏈反應(yīng)(IMBS—PCR)可對(duì)培養(yǎng)條件比較特殊的細(xì)菌如苛養(yǎng)菌、厭氧菌進(jìn)行快速檢測(cè)，肉類中的產(chǎn)毒素型產(chǎn)氣莢膜梭菌經(jīng)IMBS．PCR檢測(cè)

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