自然界分離微生物的一般操作步驟

loveanye 2007-12-28 14:30:26 714 瀏覽

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口謎磁呵呵 2007-12-29 00:00:00

先制作培養(yǎng)物，然后用劃線法把混合的微生物種到培養(yǎng)物上，恒溫培養(yǎng)二十四小時(shí)以上，就可把微生物分離開

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★フレンズ★ 2007-12-29 00:00:00

自然界的微生物，幾乎都是混雜在一起的。人們要想觀察、研究和利用某一種微生物，就必須將它從各種微生物混生的環(huán)境中分離開來。所以微生物的分離是一項(xiàng)十分重要的技術(shù)。一、分離的基本方法微生物分離的方法很多，主要有連續(xù)稀釋分離法，平板劃線分離法和單細(xì)胞分離法等方法。其中，單細(xì)胞分離法需要貴重精密儀器，中學(xué)無法開展，而連續(xù)稀釋分離法和平板劃線分離法卻簡(jiǎn)便易行，中學(xué)完全具備開展條件?，F(xiàn)將這兩種方法說明如下。 1.連續(xù)稀釋分離法 ①取1克土樣，在火焰旁放入裝有99毫克無菌水的錐形瓶?jī)?nèi)，充分搖勻，將菌分散。 ②用移液管吸取上述菌懸液1毫升，放入盛有9毫升無菌水的試管中，并進(jìn)一步稀釋成1000倍，即10-3的菌懸液。按10倍稀釋法連續(xù)稀釋到10-8（每1次稀釋，都須更換移液管）。 ③取3支1毫升移液管分別從10-8、10-7、10-6菌懸液中吸取1毫升菌懸液，分別注入編號(hào)10-8、10-7和10-6的培養(yǎng)皿內(nèi)，同一稀釋液重復(fù)做3個(gè)培養(yǎng)皿。 ④將溫度為45～50℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（其成分和配制方法見本章第三節(jié)）倒入上述各培養(yǎng)皿內(nèi)，輕輕旋轉(zhuǎn)使菌懸液充分混合均勻，凝固后，將培養(yǎng)皿倒扣放置在溫暖處（28℃左右），每天觀察培養(yǎng)基表面有無微生物菌落。 ⑤經(jīng)過一定時(shí)間培養(yǎng)后，培養(yǎng)基上長(zhǎng)出菌落，根據(jù)菌落特征，初步判斷屬于何種類型的微生物，并在顯微鏡下檢查，若菌體形態(tài)一致，則可認(rèn)為是初步分離到純菌種。 ⑥將分離培養(yǎng)所得的純菌種，從平板培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到試管斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 2.平板劃線分離法 ①取1克土樣，在火焰旁加進(jìn)裝有99毫升無菌水的錐形瓶中，堵塞棉塞，制成菌懸液待用。 ②取一培養(yǎng)皿置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，左手將培養(yǎng)皿打開稍許，向培養(yǎng)皿內(nèi)注入熔化的營(yíng)養(yǎng)固體培養(yǎng)基10～12毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使其中的培養(yǎng)基分布均勻，平放桌上，使其凝成平板。然后在皿底用蠟筆劃分A、B、C、D幾個(gè)區(qū)。應(yīng)連續(xù)制作幾份平板培養(yǎng)基。 ③將培養(yǎng)皿底部用姆指和無名指固定成傾斜狀態(tài)，在火焰旁將培養(yǎng)皿稍微打開。在此同時(shí)，用環(huán)狀接種針在火焰旁取少許菌懸液，迅速送入培養(yǎng)皿內(nèi)，在平板培養(yǎng)基的一邊，作第1次平行劃線 6～7條，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70°角，用燒過冷卻的接種針，通過第1次劃線部分作第2次平行劃線，然后再用同樣方法，作第3次平行劃線。劃線時(shí)，應(yīng)使平板培養(yǎng)基表面向下，以免空氣中雜菌落入。接種針應(yīng)與平板表面成30°角左右。不要使接種針碰到培養(yǎng)皿邊緣，也不要將培養(yǎng)基劃破。 ④將劃線后的培養(yǎng)皿倒放在28℃左右的溫暖處進(jìn)行培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌落后，鑒定微生物類群，并根據(jù)鏡檢結(jié)果，判斷是否已分離到了純菌種。如果菌種很純，則可轉(zhuǎn)移到斜面培養(yǎng)基上進(jìn)一步培養(yǎng)。連續(xù)稀釋分離法和平板劃線法，均須在無菌室或接種箱內(nèi)進(jìn)行。二、各類微生物的分離 1.從土壤中分離好氣性及兼性厭氣細(xì)菌其分離方法見本節(jié)“分離的基本方法” 2.從土壤中分離放線菌 ①制作高氏一號(hào)培養(yǎng)基，趁熱注入培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。 ②稱取土壤10克，放入裝有100毫升無菌水的錐形瓶中，并加入10%酚10滴，以YZ細(xì)菌生長(zhǎng)。振蕩10分鐘，制成10-1菌懸液。按照連續(xù)稀釋分離法，進(jìn)一步制成10-3菌懸液。 ③用移液管吸取0.1毫升10-3菌懸液，注入平板培養(yǎng)基上，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻涂抹在整個(gè)培養(yǎng)基上。然后將培養(yǎng)皿倒置于25～30℃溫箱中，培養(yǎng)7～10天，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)微生物菌落。如果菌落的硬度較大，干燥致密，且與基質(zhì)緊密結(jié)合，不易被針挑起，這就是放線菌菌落。 ④挑取放線菌菌落，接種于斜面培養(yǎng)基上。 3.從土壤中分離霉菌 ①制作豆芽汗葡萄糖培養(yǎng)基，并添加80%乳酸數(shù)滴，以YZ細(xì)菌生長(zhǎng)。將培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。 ②稱取10克土壤，按上述分離放線菌的方法制成10-4或10-5的菌懸液。 ③取0.1毫升菌懸液注入培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)基上，用玻璃刮刀涂抹均勻。然后將培養(yǎng)皿倒置于25～30℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)3～4天。培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)微生物菌落。霉菌菌落常長(zhǎng)成絨狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀，可根據(jù)這一特征尋找霉菌菌落。 ④挑取培養(yǎng)皿內(nèi)的霉菌菌落接種于斜面培養(yǎng)基上。 4.從飲水中分離大腸桿菌 ①制作伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，趁熱注入培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。 ②用滅過菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1：10稀釋。 ③取0.1毫升稀釋液接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上。用平板劃線分離法進(jìn)行分離。 ④將劃線后的培養(yǎng)皿倒置37℃溫箱中培養(yǎng)18～24小時(shí)。培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)大腸桿菌菌落，菌落ZX呈暗藍(lán)黑色，發(fā)金屬光澤。 ⑤將菌落接種于斜面培養(yǎng)基上（由營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制成）。

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阻濕態(tài)微生物穿透儀操作步驟有哪些

　　阻濕態(tài)微生物穿透儀也叫做阻濕態(tài)微生物穿透試驗(yàn)儀主要用于評(píng)定相關(guān)產(chǎn)品材料在受機(jī)械摩擦?xí)r阻液體中細(xì)菌穿透的性能，用以評(píng)估其是否符合標(biāo)準(zhǔn)。

　　試驗(yàn)過程：

　　1、菌片制備

　　金黃色葡萄球菌ATCC29213在胰酶大豆瓊脂上36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h，將2-3個(gè)菌落接種至3ml胰酶大豆肉湯中，在36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h。用蛋白胨水1:10稀釋至濃度為1×104CFU/mL~4×104CFU/mL，對(duì)zui終菌懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)。

　　打開無菌袋取出仍貼附在智商的聚氨酯膜，將載菌材料片的可浸濕聚氨酯膜面朝上放在潔凈度盤子上，為了便于操作，用雙面膠帶將載菌材料片的四角固定于盤子上。用培養(yǎng)皿蓋作為模板在載菌膜上化出一個(gè)相應(yīng)的區(qū)域，在該區(qū)域涂布1.0ml金黃色葡萄球菌懸浮液，然后將菌片至于56℃干燥大約30min，在干燥期間采用消毒的玻璃涂布器在載菌膜上繼續(xù)涂布菌懸液，以使菌液均勻分布。

　　菌片制備好后當(dāng)日使用。

　　2、狀態(tài)調(diào)節(jié)

　　如需要，按照GB6529對(duì)試件進(jìn)行狀態(tài)調(diào)節(jié)，也可在標(biāo)準(zhǔn)正常室溫條件下進(jìn)行狀態(tài)天界和試驗(yàn)。狀態(tài)調(diào)節(jié)的方法應(yīng)記錄在試驗(yàn)報(bào)告中。

　　3、試驗(yàn)設(shè)定

　　調(diào)節(jié)控制桿上配重，使試驗(yàn)指施加到瓊脂上的力值為3N±0.02N。

　　將*個(gè)瓊脂培養(yǎng)皿放在轉(zhuǎn)盤上。

　　4、材料應(yīng)用

　　用下列計(jì)數(shù)：采用一個(gè)由內(nèi)、外環(huán)組成的圓形砝碼，總重800g±1g對(duì)材料施加標(biāo)準(zhǔn)的繃緊力。將圓柱放在內(nèi)環(huán)ZY，再將試件覆蓋在圓柱體和內(nèi)環(huán)上，將除去貼附紙后的菌片染菌面向下放在試件上。zui后在聚氨酯膜上覆蓋一層HDPE膜，向下推緊外環(huán)，使三層材料牢固的加在兩個(gè)環(huán)之間。

　　5、試驗(yàn)

　　將上述環(huán)組件輕輕搭放在*個(gè)去下蓋子的瓊脂培養(yǎng)皿上，鋼環(huán)自由懸放于旋轉(zhuǎn)盤的外面，將試驗(yàn)指置于皿口內(nèi)測(cè)的HDPE膜上，這樣試件可與瓊脂表面接觸。試驗(yàn)指按上述規(guī)定施加3N壓力，是儀器運(yùn)行15min。

　　15min后立即取下環(huán)套件放在一邊。

　　從旋轉(zhuǎn)盤上取下*個(gè)培養(yǎng)皿并放上皿蓋。馬上將第二個(gè)培養(yǎng)皿和環(huán)套件放在旋轉(zhuǎn)盤上。

　　對(duì)后面的四個(gè)培養(yǎng)皿用同一個(gè)環(huán)套組件執(zhí)行上述步驟。

　　五個(gè)培養(yǎng)皿完成試驗(yàn)后，取下菌片并棄去，將試件反轉(zhuǎn)，上面朝下用HDPE膜覆蓋。

　　在第六個(gè)培養(yǎng)皿上操作15min,即完成*個(gè)平行試驗(yàn)組。

　　其余4片試件同樣按上述方法各運(yùn)行六個(gè)培養(yǎng)皿各15min，每片試件使用一片新鮮制備的菌片。

　　如果瓊脂表面聚有液體，將其置于潔凈臺(tái)上干燥，將各瓊脂培養(yǎng)皿加蓋置于36℃±1℃培養(yǎng)48h。

　　計(jì)數(shù)每只培養(yǎng)皿中金黃色葡萄球菌菌落數(shù)，培養(yǎng)皿ZX15min半徑區(qū)域內(nèi)的菌落數(shù)不計(jì)。

　　如果右一個(gè)皿或多個(gè)皿的計(jì)數(shù)大于750CFU（不包括上述的培養(yǎng)皿ZX15min半徑區(qū)域內(nèi)的菌落數(shù)），可重新驚醒試驗(yàn)。如果重新試驗(yàn)仍有一個(gè)或多個(gè)皿計(jì)數(shù)大于750CFU，表明該材料不可能具有足夠的屏障特性，可終止試驗(yàn)。

2020-09-28 15:23:13 555 0