細(xì)胞培養(yǎng)傳代時(shí)細(xì)胞抱團(tuán)怎么辦
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我在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，消化后細(xì)胞經(jīng)常是抱團(tuán)的，這樣在計(jì)數(shù)細(xì)胞的時(shí)候讓我很難辦。有哪位高人能指點(diǎn)一二，讓我把細(xì)胞吹成單個(gè)的，謝謝！
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- a18166136555 2010-01-08 00:00:00
- 按照課本上的知識，用胰蛋白酶處理可以讓細(xì)胞分開。
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- 28119017lg 2010-01-08 00:00:00
- 貼壁細(xì)胞細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，繼續(xù)生長的空間不足，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多，同時(shí)代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培養(yǎng)，對細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增。對于貼壁不太緊的細(xì)胞如293，可以直接吹散后分瓶。而對于貼壁較緊的細(xì)胞如CHO，則需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般過程為(以下操作均按無菌操作的要求進(jìn)行)：將長成致密單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶中原來的培養(yǎng)液棄去;加入0.25%胰酶溶液，視細(xì)胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多，以使充分浸潤;一般消化時(shí)間約為1至3分鐘，肉眼觀察瓶壁半透明的細(xì)胞層，當(dāng)見到出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)，棄去胰酶溶液，并加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化;視實(shí)驗(yàn)要求分入多瓶繼續(xù)培養(yǎng)，一般為一傳二到一傳四的比例。 這里，胰酶消化的程度是一個(gè)關(guān)鍵：消化過度則對細(xì)胞的活性損傷較大，并有部分細(xì)胞漂浮，隨棄去的胰酶流失;消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下，反復(fù)吹打同樣也會損傷細(xì)胞活性。影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性(配制條件、凍存或4℃保存時(shí)間長短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時(shí)間及溫度等)、消化時(shí)的溫度(氣溫、細(xì)胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度)以及所加胰酶溶液的多少等。以筆者的經(jīng)驗(yàn)，以輕吹或加培養(yǎng)液后輕搖可下較好，但對于經(jīng)驗(yàn)不太充分的實(shí)驗(yàn)者而言是較難判斷掌握的。
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細(xì)胞培養(yǎng)為生命科學(xué)和制藥行業(yè)等多種應(yīng)用領(lǐng)域的成功奠定了基礎(chǔ)，例如癌癥研究，基因組編輯，干細(xì)胞研究和再生醫(yī)學(xué)。而明美細(xì)胞工廠顯微鏡MI52-CF專為細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì)，可滿足細(xì)胞培養(yǎng)、培養(yǎng)皿及培養(yǎng)瓶等不同規(guī)格樣品的觀察。
近期，明美四川區(qū)域安裝細(xì)胞工廠顯微鏡MI52-CF，用于觀察細(xì)胞培養(yǎng)情況，在10X/20X物鏡觀察下能清晰觀察樣品，整體效果滿足用戶需求，獲得認(rèn)可。
細(xì)胞工廠顯微鏡MI52-CF的上光源采用可調(diào)高度設(shè)計(jì)，工作行程55-400mm，可以免拆分平穩(wěn)放置10層細(xì)胞工廠，提供穩(wěn)定的性能和有效的細(xì)胞培養(yǎng)過程，滿足各種細(xì)胞培養(yǎng)需求，包括活細(xì)胞觀察，細(xì)胞采樣和處理，圖像捕獲和明場、相差觀察。
細(xì)胞工廠顯微鏡MI52-CF采用優(yōu)良的無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)，具有工作距離長、光通效率高等優(yōu)點(diǎn)，能清晰觀察到底下兩層細(xì)胞工廠的培養(yǎng)情況，標(biāo)配22mm高視場數(shù)目鏡，成像清晰銳利，視野寬廣，如有需要還能升級數(shù)顯熒光模塊，實(shí)現(xiàn)熒光觀察。
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