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問(wèn)答社區(qū)

細(xì)胞傳代在培養(yǎng)瓶分布不均勻有什么好方法解決

回來(lái)吧阿蓮 2016-12-20 19:25:17 627  瀏覽
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參與評(píng)論

全部評(píng)論(1條)

  • 狂想XXOO的歲月 2016-12-21 00:00:00
    細(xì)胞傳代在培養(yǎng)瓶分布不均勻有什么好方法解決 1.觀察培養(yǎng)基是否正常,細(xì)胞狀態(tài)如何,細(xì)胞密度如何,決定是否傳代。觀察時(shí)擰緊蓋子。 2.加熱PBS、versene、培養(yǎng)基,(提前做好) 瓶子不要倒著放,不要讓液體接觸到瓶塞。 3.打開超凈臺(tái)(先開風(fēng)機(jī),后開照明),用75%乙醇清潔臺(tái)面,點(diǎn)燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒,如果廢液太多,可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個(gè),置于架子上。 4.取尖吸管、吸量管各一支,放置在專用的架上。放置的方式,注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。 5.取待傳代的細(xì)胞。打開versene,用酒精燈外焰燒。燒吸管時(shí)距離酒精燈心遠(yuǎn)些,不要把渣滓?guī)нM(jìn)去。把試劑拿入臺(tái)子的時(shí)候,盡量平穩(wěn),不要讓試劑碰到瓶口。 6.用吸量管吸取舊的培養(yǎng)基,置離心管中,吸量管加入versene,然后將versene瓶收起來(lái)。(加versene主要是為了將舊培養(yǎng)基洗去)。在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時(shí)都不要對(duì)著細(xì)胞。 7.打開胰酶,然后將versene棄掉。換新管,用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶后,盡快放平,使細(xì)胞消化時(shí)間一致。 8.將細(xì)胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶,打開PBS. 之后拿出來(lái)鏡下隨時(shí)觀察。使用二次消化法,去除容器中殘余的細(xì)胞。別忘了用舊培養(yǎng)基中和。 9.取細(xì)胞,鏡下觀察消化情況。消化程度合適之后(細(xì)胞變圓,但不漂起),用尖吸管棄去胰酶,取離心管中的培養(yǎng)基加入細(xì)胞,吹打,至所有細(xì)胞從培養(yǎng)皿底部脫落下來(lái)。用PBS洗細(xì)胞,versene對(duì)細(xì)胞有毒性,且不能被血清中和。然后吸取至離心管中,800 rpm離心5分鐘。 10.吸量管吸取適量培養(yǎng)基加入新的培養(yǎng)皿中。 11.細(xì)胞離心畢,用吸新培養(yǎng)基的管棄去上清,先把泡沫吸走。換吸量管吸取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基適量,加入離心管,小體積混勻,將細(xì)胞重懸,尖吸管吹勻。 12.擦計(jì)數(shù)板,用槍吸10ul的液體,計(jì)數(shù)。不要把槍伸到離心管內(nèi)。 13.吸量管吸取細(xì)胞懸液,加入新的培養(yǎng)皿中。鏡下觀察,搖勻,放入37度孵育。收超凈臺(tái)。

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CG編號(hào)產(chǎn)品描述包裝規(guī)格
細(xì)胞(組織)培養(yǎng)瓶/貼壁培養(yǎng)
191-0181T-25,50ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶,斜口,密封蓋,螺口,滅菌,貼壁培養(yǎng)10個(gè)/組,200個(gè)/箱
191-2000-25T-25,50ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶,透氣濾膜蓋,斜口,螺口,滅菌,貼壁培養(yǎng)10個(gè)/組,200個(gè)/箱
191-2003-75T-75, 250ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶,透氣濾膜蓋,斜口,螺口,滅菌,貼壁培養(yǎng)5個(gè)/組,100個(gè)/箱
191-3181T-75, 250ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶,斜口,密封蓋,螺口,滅菌,貼壁培養(yǎng)
5個(gè)/組,100個(gè)/箱
191-2011-75T-75, 250ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶,透氣濾膜蓋,直口,螺口,滅菌,貼壁培養(yǎng)5個(gè)/組,100個(gè)/箱
191-2181T-175, 650ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶,斜口,密封蓋,螺口,滅菌,貼壁培養(yǎng)5個(gè)/組,40個(gè)/箱
191-2002-175T-175, 650ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶,透氣濾膜蓋,斜口,螺口,滅菌,貼壁培養(yǎng)5個(gè)/組,40個(gè)/箱

細(xì)胞(組織)培養(yǎng)瓶/貼壁培養(yǎng)  50ml適應(yīng)客戶:醫(yī)院檢驗(yàn)科PCR實(shí)驗(yàn)室,中心實(shí)驗(yàn)室,肝病中心;第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu),科研院所,大專院校,制藥廠,試劑生產(chǎn)廠家,疾控中心,檢驗(yàn)檢疫。


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