超聲法破碎細胞提蛋白質(zhì)的具體步驟
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聽說用超聲破碎的方法提取蛋白質(zhì)能節(jié)省很多蛋白，但是我一直比較困惑，用超聲法提取蛋白不加蛋白裂解液了？至少我問的那個人他沒有加，但是他不告訴我具體的步驟，有沒有好心人告訴我... 聽說用超聲破碎的方法提取蛋白質(zhì)能節(jié)省很多蛋白，但是我一直比較困惑，用超聲法提取蛋白不加蛋白裂解液了？至少我問的那個人他沒有加，但是他不告訴我具體的步驟，有沒有好心人告訴我一下，這個到底怎么回事?。? 展開
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- wbeautifulgilr 2012-09-13 00:00:00
- 請問樓主，可否將得到的Z佳答案分享一下，在下也很需要了解。
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- 三十83year 2011-05-17 00:00:00
- 這樣說吧，如果我們用原核表達載體表達一段目標基因，我們先把這個基因通過酶切連接的原核表達載體上，再轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中進行誘導表達，常用的誘導物是IPTG，37度誘導表達4小時，這樣表達出的目標蛋白一般以包涵體的形式存在細菌內(nèi)，然后用超聲破碎細菌，首先將吸取5ml的細菌放入試管中，然后放在超聲儀中，開80hz的頻率進行破碎細菌，待到細菌全部破碎，溶液變清亮為止，然后你可以洗滌沉淀，進行包涵體蛋白的收集，后面你可以做一個SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳和Western-blot，這樣就可以確定你的要蛋白是不是你的蛋白。 Z后，你可以大量的搖菌提取蛋白質(zhì)了，祝你好運，我也是做這方面的研究，已經(jīng)做到蛋白質(zhì)電泳這一步了，祝你好運。
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- 6d32dbq60wp 2011-05-11 00:00:00
- 1、清洗后的的組織用攪切機切碎成小塊，混懸在至少兩倍體積的緩沖液內(nèi)；洗去培養(yǎng)液的細胞，混懸在至少兩倍體積的緩沖液中； 2、將超聲探頭沒入混懸液內(nèi)，進行超聲破碎。一般總超聲時間約2min，分為幾個周期，如4×30s，周期之間讓樣品在冰浴中冷卻。 總的過程就是這樣，不用加裂解液。
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