誰(shuí)能說(shuō)說(shuō)用緩沖液，采用超聲波破碎細(xì)胞的方法提取蛋白質(zhì)的過(guò)程？謝謝
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破碎細(xì)胞后，提取上清液是否需用什么過(guò)濾？否則得到的上清液會(huì)有雜質(zhì)。離心速度過(guò)大是否會(huì)使蛋白質(zhì)沉淀？... 破碎細(xì)胞后，提取上清液是否需用什么過(guò)濾？否則得到的上清液會(huì)有雜質(zhì)。 離心速度過(guò)大是否會(huì)使蛋白質(zhì)沉淀？ 展開(kāi)
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- 時(shí)代的過(guò)逝節(jié)奏 2010-08-18 00:00:00
- 離心速度和時(shí)間不夠
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- ermost60386973 2012-04-13 00:00:00
- 離心Z好在4度的環(huán)境下，離心液會(huì)產(chǎn)熱的~~~
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- 與會(huì)者牧儇 2010-08-12 00:00:00
- 這個(gè)問(wèn)題太簡(jiǎn)單了吧，呵呵。 用離心的方法去除雜質(zhì)。有離心機(jī)吧？高速離心機(jī)20度20000g離心30分鐘，取上清，雜質(zhì)沉淀在離心管管底。具體過(guò)程如下： 1.超聲：超0.2秒停2秒，超聲15秒，樣品放在冰上進(jìn)行；如果超聲后細(xì)胞提取液還渾濁不清，可重復(fù)以上步驟一次 2.煮沸10分鐘，室溫放置30分鐘 3.按前面說(shuō)的條件離心 祝好運(yùn)！
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- lihui19891018 2010-08-16 00:00:00
- 所用樣品放在冰盒中，因?yàn)槌暺扑闀?huì)發(fā)大量的熱，如果溫度過(guò)高會(huì)使蛋白變性，設(shè)置功率，超4秒，停8秒，看你量的決定超的循環(huán)數(shù)，一般100次足夠了。 要提蛋白的話不能說(shuō)是用什么過(guò)濾，而是離心。 不知道樓上說(shuō)的超聲15秒能破碎多少細(xì)胞，反正我看沒(méi)戲。 離心的話8000rpm就可以 ，當(dāng)然看你提什么蛋白了，如果某一種蛋白的話，還學(xué)要做電泳之類的才可以徹底分開(kāi)。 千萬(wàn)不要聽(tīng)樓上的，尤其是第二步，如果你辛辛苦苦提的蛋白給煮沸了，那蛋白不就變形了嗎？ 你的工作就都白做了。
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