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  mghyjh2009 2017-12-16 00:00:00

  DNA與組蛋白構成核小體，核小體纏繞成中空的螺旋管狀結構，即染色絲，染色絲再與許多非組蛋白形成染色體。染色體存在于細胞核中，外有核膜及胞膜。從組織中提取DNA必須先將組織分散成單個細胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色體釋放出來，同時去除與DNA結合的組蛋白及非組蛋白。 注意事項： 1.盡量簡化操作步驟，縮短提取過程，以減少各種有害因素對核酸的破壞。 減少化學物質對DNA的降解，為避免過酸、過堿對DNA雙鏈中磷酸二酯鍵的破壞，操作多在pH值4.0-10.0的條件下進行。 2.防止基因組DNA的生物降解，主要是DNase降解基因組DNA，DNase需二價金屬陽離子如Mg2+等的激活，可用EDTA等金屬離子螯和劑螯和Mg2+以YZDNase的活性。 3.減少物理因素對DNA的降解，物理降解因素主要包括機械剪切力(如劇烈振蕩、攪拌等)，細胞突然置于低滲液中導致的細胞爆炸式破裂，DNase大量釋放，樣品反復凍融和高溫等。

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  美麗的公主5368 2018-07-30 00:00:00

  提染色體dna的基本原理： 基因工程實驗所需要的基因組DNA 通常要求分子量盡可能大，以此增加外源基因獲得率，但要獲得大片段的DNA 非易事，細菌基因組DNA通常是個很大的環(huán)狀態(tài)DNA，而在抽提過程中，不可避免的機械剪切力必將切斷DNA，如果要抽提到大的DNA 分子，就要盡可能地溫和操作，減少剪切力，減少切斷DNA 分子的可能性；分子熱運動也會減少所抽提到的DNA分子量，所以提取過程也要盡可能在低溫下進行。另外細胞內及抽提器皿中污染的核酸酶也會降解制備過程中的DNA，所以制備過程要YZ其核酸酶的活性。 另外制備的細菌染色體DNA 必須是高純度的，以滿足基因工程中各種酶反應的需要，制備的樣品必須沒有蛋白污染，沒有RNA，各種離子濃度應符合要求，這些在染色體制備時都應考慮到。 大腸桿菌染色體DNA 抽提首先收集對數(shù)生長期的細胞，然后用離子型表面活性劑十二烷基磺酸鈉（SDS）破裂細胞，SDS 具有的主要功能是：（1）溶解細胞膜上的脂類和蛋白質，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜；（2）解聚細胞膜上的脂類和蛋白質，有助于消除染色體DNA上的蛋白質；（3）SDS 能與蛋白質結合成為R1—0—SO3 R2 —蛋白質的復合物，使蛋白質變性而沉淀下來。但是SDS 能YZ核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取過程中，必須把它除干凈。以免影響下一步RNase的作用。破細胞后RNA經(jīng)RNase消化除去，蛋白質經(jīng)苯酚、氯仿:異戊醇抽提除去經(jīng)灑精沉淀回收DNA?？莶輻U菌染色體制備與上類似，但略加修改的方法要適合教學要求?？莶輻U菌是格蘭氏陽性菌，所以在SDS 處理前需要使用溶菌酶裂解細胞壁。溶菌酶是一種糖苷水解酶，它能水解菌體細胞壁的主要學成份肽聚糖中的β—1，4 糖苷鍵，有助于細胞壁破裂，破裂的細胞壁在SDS 的作用下溶菌，同時用蛋白酶K 消化蛋白質，能解離纏繞在染色體DNA上的蛋白質，然后加入一定量的醋酸鉀，使蛋白質變性，通常離心除去，在這期間可加入核糖酸酶消化RNA，Z后用乙醇回收DNA。 提染色體dna的注意事項： 1、 ZD防止DNA的損傷，包括各種物理、化學和機械損傷。 2、 干燥好的染色體DNAZ好溶于去離子水，以備后面直接利用。如果用TE 緩沖液溶解，后面還需去離子。 3、 取上清時，如果上清液過少，可再加入少量水，重新離心，取上清，避免DNA損失過多。

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