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  宋澈鐘意勛 2017-04-02 00:00:00

  就是破碎 分離 提取 病毒的話就是提取 純化然后再取樣做DNA。 供體DNA或外源性DNA 它可以通過提取、人工合成或從mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得。由于大多數(shù)真核基因和病毒基因有插入順序，所以從mRNA反轉(zhuǎn)錄合成的cDNA往往不能完全代表真核基因的真正結(jié)構(gòu)。 載體 載體也就是轉(zhuǎn)移外源性DNA片段的運載體，常用的有細(xì)菌質(zhì)粒、粘性質(zhì)粒、酵母質(zhì)粒、噬菌體或動物病毒。根據(jù)不同的目的和要求選用不同的載體系統(tǒng)，也可不用載體把外源性DNA直接轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中去。 受體細(xì)胞 受體細(xì)胞就是指作為DNA重組體增殖或復(fù)制的宿主細(xì)胞。如果采用細(xì)菌時，要考慮到安全性?，F(xiàn)認(rèn)為，大腸桿菌K12品系是安全的。如采用動物細(xì)胞來生產(chǎn)疫苗或其他活性多肽時，要考慮到潛在的致癌因子。 重組體的改造與基因表達(dá) 人工合成一個DNA片段，含有一定的酶切點以及所需要的序列。．加上人工合成的接頭，造成一定的內(nèi)切酶粘性末端；用末端轉(zhuǎn)移酶在3′端加上dA－dT，或 dC－dG后進(jìn)行接連；．使粘端修飾成平端，或用Bal 3l修飾后，再進(jìn)行平端連接；．T4DNA 連接酶進(jìn)行平端連接；．T4DNA 連接酶進(jìn)行粘端連接；．人類遺傳病的基因ZL。．利用病毒基因組中的基因表達(dá)增強子；．GX表達(dá)真核基因，用于研制病毒疫苗或生產(chǎn)多種活性多肽物質(zhì)；．研究真核基因表達(dá)調(diào)控原理；．在動物病毒載體中，要考慮基因表達(dá)增強子的作用。而在λ噬菌體，目前尚未見報道。．在病毒載體中，還沒有有效的可以控制病毒基因轉(zhuǎn)錄的具體方法。而在λ噬菌體的克隆實驗中，可以采用λcIts857的溶原性細(xì)菌或帶有cIts857的質(zhì)粒來控制PL啟動子。采用這樣的系統(tǒng)，就可以表達(dá)許多對細(xì)菌本身有毒性的多肽。動物病毒作為載體，首先要求對該病毒的轉(zhuǎn)錄機制有清楚的了解。因為在大多數(shù)情況下，真核基因克隆的目的是要使插入基因能夠GX表達(dá)；而在λ或M13噬菌體的大多數(shù)工作中，基因克隆的目的大都是為了使外源性DNA進(jìn)行擴增或者進(jìn)行序列分析。．作為載體的多數(shù)病毒基因的非必需區(qū)比較短。在設(shè)計λ噬菌體載體時，Z簡單的途徑就是先確定一個對溶細(xì)胞性生長不必要的基因片段，然后在這一非必需區(qū)替代外源性DNA；在設(shè)計動物病毒載體時，外源性DNA往往代替了病毒基因的必需區(qū)。因此，重組病毒是缺損性的，必須在輔助病毒存在的條件下才能繁殖，或者在染色體中已整合有輔助病毒基因的細(xì)胞中才能生長。再者，能夠作為感染性病毒繁殖的重組DNA分子大小，還要受到病毒顆粒包裝容量的限制，還沒有動物病毒的試管內(nèi)包裝系統(tǒng)?？梢灾苽鋯我怀煞植《疽呙纾部梢灾苽渫徊《镜亩鄠€成分的病毒疫苗?？梢酝耆コ《净蛑芯哂袧撛谖：π缘牟糠郑缒承┎《镜闹掳┗?；如采用重組病毒系統(tǒng)，例如痘苗病毒，易于制備同一載體的多價病毒疫苗；可以生產(chǎn)尚無敏感細(xì)胞的病毒疫苗，例如乙型肝炎病毒表面抗原疫苗；生產(chǎn)成本可以大幅度降低；年代以來，分子生物學(xué)有了飛躍的發(fā)展，新技術(shù)、新方法的應(yīng)用，使病毒學(xué)的研究煥然一新。在這一時期內(nèi)基本上弄清了DNA和RNA病毒的繁殖機理，發(fā)現(xiàn)了一類亞病毒，建立了許多病毒基因組的無性繁殖系；闡明了某些病毒的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系和一些病毒的基因表達(dá)調(diào)控原理；搞清了有48，502對核苷酸的λ噬菌體DNA的全結(jié)構(gòu)（Sanger et al 1982）以及許多動物病毒基因組的一級結(jié)構(gòu)，甚至具有十幾萬對核苷酸的EB病毒基因組的序列分析也已完成（Epstein，個人通訊1984）。分子病毒學(xué)在理論上的迅速發(fā)展，給病毒性疾病的FZ實踐帶來了新的突破。如果說，由受染動物組織制備的病毒疫苗為diyi代產(chǎn)品；由受染組織培養(yǎng)細(xì)胞制備的為第二代；那么，采用DNA重組技術(shù)生產(chǎn)的病毒疫苗則為第三代?？谔阋卟《净蚬こ桃呙缭谶M(jìn)行動物實驗，乙型肝炎病毒疫苗也已經(jīng)研制成功。DNA重組技術(shù)不僅更新了病毒疫苗，對預(yù)防病毒性疾病將做出重大的貢獻(xiàn)；而且也使抗病毒ZL發(fā)生了革命性的變化。例如，具有廣譜抗病毒活性的多肽物質(zhì)——干擾素，在我國也已經(jīng)可以采用基因工程技術(shù)，由細(xì)菌發(fā)酵來生產(chǎn)（侯云德等1982，1983，1984）。DNA重組技術(shù)為生產(chǎn)新的多肽類藥物，開辟了一條新的途徑。1892年ИBAHOCКИЙ發(fā)現(xiàn)病毒以來，病毒學(xué)在人類與病毒性疾病長期斗爭的實踐中，已逐步發(fā)展成為在生物學(xué)界和醫(yī)學(xué)界中一門十分重要的學(xué)科。鑒于象乙型肝炎、流行性出血熱、病毒性腦炎、病毒性肺炎、流行性感冒等一些病毒性疾病在我國還比較嚴(yán)重，所以病毒學(xué)在我國衛(wèi)生保健事業(yè)中占有十分重要的地位。

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