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  真真切切ii 2017-01-01 00:00:00

  DNA提取的幾種方法 (1).濃鹽法 利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質，此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來. 也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白. 兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些. 以稀鹽酸溶液提取DNA 時，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為YZ組織中的DNase對DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL，0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA. （2）.陰離子去污劑法: 用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合，因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA. （3）.苯酚抽提法: 苯酚作為蛋白變性劑，同時YZ了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與DNA 聯(lián)結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質，用乙醇沉淀DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質，可用玻璃漫漫繞成一團，取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài) . （ 4）.水抽提法: 利用核酸溶解于水的性質，將組織細胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% ٠80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，Z后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過程中加入SDS.

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