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  十幾年x 2016-12-27 00:00:00

  高中： 原理： 1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。 2.用冷酒精提取出含雜質(zhì)較少的DNA。 3.DNA在沸水浴時(shí)被二苯胺染成藍(lán)色。 方法步驟： 1．提取細(xì)胞核物質(zhì)：順時(shí)針方向攪拌，稍快，稍重。 5 min 2．溶解DNA： 3．析出含DNA的黏稠物：蒸餾水300mL，逆時(shí)針方向攪拌，緩慢 4．過濾：取黏稠物 5．再溶解：順時(shí)針方向攪拌，較慢。3 min 6．過濾：取濾液。 7．提取出含雜質(zhì)較少的DNA，逆時(shí)針方向攪拌，稍慢。5 min 8．DNA的鑒定：沸水浴5min 大學(xué) DNA提取分為三個(gè)基本步驟，每個(gè)步驟的具體方法可根據(jù)樣品種類、影響提取的物質(zhì)以及后續(xù)步驟的不同而有區(qū)別。 利用研磨或者超聲破碎細(xì)胞，并通過加入去污劑以除掉膜脂。 加入蛋白酶，醋酸鹽沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉細(xì)胞內(nèi)的蛋白，如與DNA結(jié)合的組蛋白。 將DNA在冷乙醇或異丙醇中沉淀，因?yàn)镈NA在醇中不可溶而黏在一起，這一步也能除掉鹽分。 另外，目前也有利用吸附過柱的方法提取DNA的商業(yè)化試劑盒。 2.細(xì)胞的破碎 細(xì)菌有堅(jiān)硬的細(xì)胞壁，首先要破碎經(jīng)胞。方法有三種;①機(jī)械方法：超聲波處理法、研磨法、勻漿法;②化學(xué)試劑法：用SDS處理細(xì)胞;③酶解法：加入溶菌酶或蝸牛酶，都可使細(xì)胞壁破碎。 3.DNA提取的幾種方法 (1).濃鹽法 A. 利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來. B. 也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白. 兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些. C.以稀鹽酸溶液提取DNA 時(shí)，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離。在提取過程中為YZ組織中的DNase對DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL，0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA. （2）.陰離子去污劑法; 用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因?yàn)殛庪x子去污劑能夠破壞這種價(jià)鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA （3）.苯酚抽提法：苯酚作為蛋白變性劑，同時(shí)YZ了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí)，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA 。此時(shí)DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團(tuán)，取出。此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài) （4）.水抽提法:利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細(xì)胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% ，80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，Z后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過程中加入SDS.

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