參與評(píng)論

評(píng)論

登錄后參與評(píng)論

全部評(píng)論(1條)

• 

  我前天訂的 2017-02-20 00:00:00

  氯仿是分子量比較大的有機(jī)溶劑，在提取RNA時(shí)，氯仿可以有效的使有機(jī)相和無機(jī)相迅速分離.DNA提取過程 有機(jī)相中主要是酚和蛋白結(jié)合，從而使得蛋白和DNA脫離，DNA進(jìn)入水相.但是在RNA的提取過程就要避免蛋白和DNA脫離，否則DNA會(huì)釋放到水相.不管有酚也好，沒有酚也好，氯仿本身也對(duì)蛋白有變性作用，劇烈的震蕩，很容易使得DNA的親水基團(tuán)，與水相接觸.所以不要?jiǎng)×艺鹗? 異丙醇的作用是通過-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA鏈中的親水基團(tuán)受到保護(hù)，等同于沉淀，但是這是個(gè)反應(yīng)時(shí)發(fā)生在水相中，與前面的氯仿不矛盾. 氯仿的作用有多個(gè)方面，一是作為有機(jī)溶劑變性蛋白，使其沉淀并通過離心除去，同時(shí)也通過變性作用YZRNase活性；二是RNA提取試劑中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚，很多自己配試劑提的方法也用苯酚，抽提蛋白時(shí)也會(huì)用到苯酚），苯酚微溶于水，抽提烷之后水相里有痕量的酚，如果不除去會(huì)損傷核酸，需要通過氯仿把水相里參與的苯酚抽提掉；三是作為溶劑抽提樣品中的一些脂溶性雜質(zhì)（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除雜作用 通常氯仿里面會(huì)加少量異戊醇（1/25），減少蛋白質(zhì)在變性過程中由于震蕩產(chǎn)生的泡沫，影響后續(xù)操作，不過個(gè)人經(jīng)驗(yàn)感覺加不加沒什么太大區(qū)別，也許是我的樣品里蛋白不多吧 異丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一樣.只不過用量少一點(diǎn)，0.6V~1V就夠了，不像乙醇沉淀需要至少2V，一般需要2.5倍體積.在水相很多，離心管容積有限，加不下太多乙醇的時(shí)候一般會(huì)用異丙醇沉淀.不過感覺效果不如乙醇，偶爾會(huì)有沉淀不出來東西的時(shí)候

  贊(6)

  回復(fù)(0)

  評(píng)論

  評(píng)論

  登錄后參與評(píng)論