對于- 40°C型號能夠選用單極·致冷循環(huán)系統(tǒng),，還可以選用復(fù)疊式致冷呼吸系統(tǒng)，但單極·致冷循環(huán)系統(tǒng)是靠調(diào)小制冷壓縮機的空調(diào)膨脹閥打開度，減少冷媒總流量制人數(shù)來降低揮發(fā)工作壓力（約0.7個大氣壓力），進(jìn)而得到更低的揮發(fā)溫度的，那樣的設(shè)計構(gòu)思要以系統(tǒng)軟件的空調(diào)制冷量來超過的（空調(diào)制冷約只能規(guī)范的0.7~0.8），造成致冷高效率低并增加了制冷壓縮機的負(fù)荷，并且易造成制冷壓縮機電磁線圈超溫，影響了制冷壓縮機的使用壽命。

冷藏控制系統(tǒng)設(shè)計：獲得-20°C下列的超低溫時均選用復(fù)疊式致冷呼吸系統(tǒng)。

為皓天環(huán)境試驗箱獲得超低溫而選用二級縮小復(fù)疊致冷循環(huán)系統(tǒng)的緣故：

(1)單極縮小蒸汽致冷循環(huán)系統(tǒng)壓比的限定單極蒸汽縮小式制冷機組的最之低揮發(fā)溫度，關(guān)鍵在于它的冷疑工作壓力及壓縮比冷媒的冷疑工作壓力由冷媒的類型和自然環(huán)境物質(zhì)（如氣體或水）的溫度決策，在一般來說，它處在0.7~1.8Mpa范圍之內(nèi)壓縮比與冷疑工作壓力和揮發(fā)工作壓力相關(guān)，當(dāng)冷疑工作壓力必須時，隨之揮發(fā)溫度的減少，揮發(fā)工作壓力也相對降低，因此使壓縮比升高，它將造成制冷壓縮機排氣管溫度的上升，潤滑脂變稀，使?jié)櫥瘶?biāo)準(zhǔn)化壞，比較嚴(yán)重時乃至?xí)霈F(xiàn)結(jié)炭和拉缸狀況；與此同時，壓縮比的擴大將造成制冷壓縮機的輸氣指數(shù)減少，空調(diào)制冷量降低,具體縮小全過程偏移等熵全過程越來越遠(yuǎn)制冷壓縮機功率提升，致冷指數(shù)降低合理性減少將出現(xiàn)下列某些危害。

a.一切冷媒，揮發(fā)溫度越低，則揮發(fā)工作壓力也越多低過低的揮發(fā)工作壓力，有時候?qū)?dǎo)致制冷壓縮機無法呼吸，或是使外部的氣體進(jìn)到制冷機組。

b.當(dāng)揮發(fā)溫度過低時，一些常見冷媒已達(dá)凝結(jié)溫度，沒法保持冷媒的流動性，循環(huán)系統(tǒng)。

c.揮發(fā)工作壓力減少，冷媒的比體積擴大冷媒的質(zhì)量流量降低空調(diào)制冷量大大的降低以便得到需要空調(diào)制冷量務(wù)必擴大呼吸容量，使制冷壓縮機容積過度巨大。

(2)冷媒熱物理學(xué)特點的限定。

如今溫濕度試驗箱中單極·致冷循環(huán)系統(tǒng)大部分選用的中溫冷媒是R404A，在一個大氣壓下其揮發(fā)溫度是46.59C（R22/-40.7°C），但蒸發(fā)冷卻式冷卻器熱傳導(dǎo)溫度差一般取10°C上下（在強制性排風(fēng)熱管散熱循環(huán)系統(tǒng)下空調(diào)蒸發(fā)器和內(nèi)箱的溫度差），就是箱里只有制得-36.5°C的超低溫?；蛟S，根據(jù)降低制冷壓縮機的揮發(fā)工作壓力，能夠?qū)404A冷媒的最之低揮發(fā)溫度減少到-50°C；因此要獲得- 50°C及下列的超低溫時務(wù)必選用中溫冷媒與超低溫冷媒復(fù)疊式的致冷循環(huán)系統(tǒng)，制得-50°C ~ -80°C的超低溫，超低溫冷媒通常采用R23它在一個大氣壓下的揮發(fā)溫度是-81.7°C。

(3)制冷壓縮機電磁線圈熱管散熱的限定單極制冷壓縮機工作中時，在做-35°C上下，由于制冷壓縮機的電磁線圈是旋空在制冷壓縮機正中間的，這就造成1個難題。-35°C時，制冷壓縮機的底壓是為負(fù)標(biāo)值，也就是說造成了1個真空值，那樣電磁線圈的頂部發(fā)熱量就沒有方法消散，那樣就制冷壓縮機表層是非常涼，但是事實上內(nèi)部，他的溫度是很高的（由于真空泵是最之好的隔熱保溫物質(zhì)）！

在掌握完為皓天環(huán)境試驗箱的致冷循環(huán)系統(tǒng)技術(shù)性以后，在接下去，東莞皓天設(shè)備將會就高溫試驗箱、熱冷沖擊性環(huán)境試驗箱等環(huán)境試驗設(shè)備的有關(guān)技術(shù)性逐一開展新研發(fā)，讓顧客朋友們把握各類技術(shù)性步聚，為更強的搞好各類試驗服務(wù)項目。

概述

寡核苷酸是一類只有50個以下堿基的短鏈核苷酸的總稱（包括脫氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA的核苷酸）。

近幾年，隨著寡核苷酸療法在ZL各種疾病適應(yīng)癥方面取得了臨床上顯著的進(jìn)展，已有多種寡核苷酸類藥物，如小干擾RNA (siRNA) 和反義寡核苷酸 (ASO) 藥物獲得了FDA上市批準(zhǔn)。另外還有多種microRNA (miRNA) 和適配體 (Aptamer) 正在研發(fā)中。因此，更大量、更高純度的寡核苷酸產(chǎn)品的需求也隨之日益增長。

東曹生命科學(xué)提供多種具有高分辨率、選擇性的色譜柱和層析填料產(chǎn)品以滿足從分析到純化制備不同規(guī)模的應(yīng)用需求。

寡核苷酸的HPLC分離模式

下表中列舉了寡核苷酸HPLC分析的幾種分離模式及適用的分離條件。也可以通過連用MS進(jìn)行檢測。

ZL性寡核苷酸是由固相化學(xué)合成法制成。在合成過程中會產(chǎn)生工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)包含許多目標(biāo)產(chǎn)物的類似物（分子量的差別：堿基數(shù)n-1、n、n+1等），磷酸基S化等的不對稱化合物、異構(gòu)體等。因此，雜質(zhì)的分析監(jiān)控對工藝和質(zhì)量控制就顯得十分重要。一般而言，通過陰離子交換色譜法即可實現(xiàn)這一分析需求。

寡核苷酸IEC-HPLC分析

下圖是使用TSKgel DNA-STAT陽離子交換色譜柱分離具有不同序列的4種寡核苷酸引物 (單鏈) 。

在IEC分離模式中，如果使用無孔填料的色譜柱可以提高分辨率。此款色譜柱采用的是親水性無孔樹脂填料，粒徑5μm，表面由開放型多層陰離子交換基團構(gòu)成。這些特性與創(chuàng)新的化學(xué)鍵合方法相結(jié)合，使其載量更高、操作壓力更低，非常適合于寡核苷酸的高分辨率分析。

寡核苷酸的純度檢測

在離子交換色譜柱中，可以對離子基團與主成分有一處不同的化合物進(jìn)行分離，比如能夠分離n-1、n、n+1的化合物。下圖是TSKgel DNA-NPR陽離子交換色譜柱對13個堿基的硫代磷酸寡核苷酸粗樣分析的色譜圖。

TSKgel DNA-STAT色譜柱對粗制的寡核苷酸與純化后的樣品進(jìn)行純度評估。

寡核苷酸的分析要點

1、根據(jù)核酸樣品的穩(wěn)定性和大小來選擇合適的洗脫液。如果核酸的穩(wěn)定性很高，可以采用堿性溶液 (NaOH，pH12) 和高溫60℃條件下分離，可提高分辨率。如果是穩(wěn)定性差的，則推薦使用pH7-8的中性洗脫液，溫度40℃條件下分離。

2、在樣品吸附強的情況下，可使用比NaCl或NaBr洗脫能力更強的NaClO₄進(jìn)行梯度分離。

3、如果樣品是超巨大雙鏈DNA (如質(zhì)粒DNA)，使用TSKgel DEAE-NPR (4.6mm I.D.×3.5cm) 的話不僅可以獲得高分辨率，而且回收率也會更好。

上篇文章《寡核苷酸類藥物的HPLC分析 (一) TSKgel IEC色譜柱應(yīng)用例》中我們提到了隨著寡核苷酸藥物的研發(fā)步伐越來越快，對高純度寡核苷酸產(chǎn)品的需求也日趨旺盛。目前，寡核苷酸主要是通過化學(xué)合成法制成，在合成過程中會產(chǎn)生工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)，離子交換液相色譜法是分析這些雜質(zhì)的重要手段之一。此篇文章我們將介紹尺寸排阻色譜法在寡核苷酸藥物質(zhì)量控制中的應(yīng)用。

在寡核苷酸的分析中，尺寸排阻分離模式是基于堿基數(shù)量、磷酸基不同導(dǎo)致的分子量差別進(jìn)行分離，通常用于簡單的質(zhì)量控制或純度研究。該模式的優(yōu)點是可以使用接近生理條件的洗脫溶液進(jìn)行等度分離。有時也會添加水溶性有機溶劑來YZ疏水吸附。

分析不同堿基數(shù)目的寡核苷酸

下圖是采用兩根串聯(lián)的SEC色譜柱TSKgel UP-SW2000來區(qū)分長度相差一個堿基的寡核苷酸混合物 (20-mer和N-1 19-mer)。

TSKgel UP-SW2000是東曹生命科學(xué)ZX開發(fā)的粒徑2μm、孔徑12.5nm的硅膠基質(zhì)SEC色譜柱，主要用于分離分子量范圍為1-150kDa的小蛋白、肽和寡核苷酸等生物分子。該色譜柱兼容HPLC和UHPLC系統(tǒng)，因此也能夠從傳統(tǒng)的HPLC-SEC方法轉(zhuǎn)換到UHPLC。

下圖是使用TSKgel G2000SWXL色譜柱分離不同堿基數(shù)量的合成寡核苷酸混合物的譜圖。為了YZ核酸酶活性，有時會在流動相中添加EDTA等約1 mmol/L的螯合劑。

SEC法分離脂質(zhì)體包被的siRNA

下圖是使用TSKgel SuperSW2000色譜柱對天然型DNA核酸藥物Defitelio進(jìn)行質(zhì)量分析的示例。

參考文獻(xiàn)：Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb.23 (2011) 125, Edited by J.V. Bonilla et al.

寡核苷酸分析用SEC色譜柱

下表中列出了適用于核酸分離的SEC色譜柱。對于＜375 bp的短鏈核酸或寡核苷酸，UP-SW3000、UP-SW2000、G3000SWXL以及G2000SWXL這幾款色譜柱都是比較推薦的。

目前，氮吹儀也叫氮氣吹干儀，自動快速濃縮儀等，在市場上普遍有兩種：干式氮吹儀和水浴式氮吹儀。氮吹儀代替?zhèn)鹘y(tǒng)的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對樣品進(jìn)行濃縮已經(jīng)被越來越多的人認(rèn)可并接受。
1. 氮吹儀的工作原理
我們知道，加快蒸發(fā)有兩個方法：加強它周圍的空氣流動和它的溫度。氮氣是一種不活潑的氣體，能起到隔絕氧氣的作用，防止氧化。氮吹儀利用氮氣的快速流動打破液體上空的氣液平衡，從而使液體揮發(fā)速度加快；并通過干式加熱或水浴加熱方式升高溫度（目標(biāo)物的沸點一般比溶劑的要高一些），從而達(dá)到了濃縮的目的。
2. 氮吹儀的主要部件
主要包括氣體分配室、氣針、高度調(diào)節(jié)支架、氮氣接口、高度微調(diào)部件、支柱、固定組件、機箱、襯套、加熱塊、樣品試管或試瓶等部件。
3. 氮吹儀的使用方法（以水浴式氮吹儀為例）
氮吹儀安裝好后，底盤支撐在恒溫水浴內(nèi)，打開水浴電源，設(shè)定水浴溫度，水浴開始加熱。提升氮吹儀，將需要蒸發(fā)濃縮的樣品分別安放在樣品定位架上，并由托盤托起，其中托盤和定位架高低可根據(jù)實驗樣品試管的大小調(diào)整。打開流量計針閥，氮氣經(jīng)流量計和輸氣管到達(dá)配氣盤，配氣后送往各樣品位上方的針閥管（安裝在配氣盤上）。然后，通過調(diào)節(jié)針閥管針閥，氮氣經(jīng)針閥管和針頭吹向液體樣品試管，可通過調(diào)整鎖緊螺母可以上下滑動針閥管，調(diào)整針頭高度，以樣品表面吹起波紋，樣品又不濺起為好。，將氮吹儀放于水浴中，直到蒸發(fā)濃縮完成。
4. 氮吹儀的優(yōu)點
（1）一次可處理多個樣品，在多因素、多水平的重復(fù)實驗中優(yōu)勢更為明顯。
（2）實驗操作簡潔、靈活。可以不受約束地隨時調(diào)節(jié)濃縮的進(jìn)程。
（3）實驗中不需要操作者長時間的維護，節(jié)省人力。
（4）氮吹儀在濃縮時準(zhǔn)確、靈敏可避免樣品損失。