BCA法、凱氏定氮法、Brarford法、甲醛滴定法中哪個方法測多肽含量比較好？

度狗不讓申訴 2010-04-21 02:53:30 739 瀏覽

BCA法、凱氏定氮法、Brarford法、甲醛滴定法中哪個方法測多肽含量比較好？注意是多肽含量而不是蛋白質(zhì)含量。并說一下那個方法的原理哈！

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允浩先森 2010-04-22 00:00:00

Bicinchoninic acid (BCA )法是近來廣為應(yīng)用的蛋白定量方法。其原理與Lowery法蛋白定量相似，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA與Cu1+結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nM處有高的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據(jù)此可測定蛋白質(zhì)濃度。凱氏定氮法原理：蛋白質(zhì)分解，分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。 Brarford法原理：考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的Z大吸收峰的位置（lmax），由465nm變?yōu)?95nm，溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色。經(jīng)研究認(rèn)為，染料主要是與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸（特別是精氨酸）和芳香族氨基酸殘基相結(jié)合。在595nm下測定的吸光度值A(chǔ)595，與蛋白質(zhì)濃度成正比。甲醛滴定法原理：水溶液中的氨基酸為兼性離子，因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的—N+H3結(jié)合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羥甲基衍生物，使N+H3上的H+游離出來，這樣就可以用堿滴定N+H3放出H+，測出氨基氮，從而計算氨基酸的含量。綜上，甲醛滴定法直接排除，因?yàn)槭怯嬎惆被岷康?。BCA法和Brarford法原理對蛋白質(zhì)中的某些氨基酸的要求比較嚴(yán)格，適用于大型蛋白的定量，而如果你是較短的多肽的話可能會有比較大誤差。因此凱氏定氮法比較準(zhǔn)確。

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BCA法、凱氏定氮法、Brarford法、甲醛滴定法中哪個方法測多肽含量比較好？: BCA法、凱氏定氮法、Brarford法、甲醛滴定法中哪個方法測多肽含量比較好？注意是多肽含量而不是蛋白質(zhì)含量。并說一下那個方法的原理哈！

凱氏定氮法能測定多肽嗎:

凱氏定氮法測蛋白質(zhì)含量的誤差來源:

凱氏定氮法測小麥胚粉中蛋白質(zhì)的含量

1 前言

小麥胚粉是以小麥胚芽為主要原料，經(jīng)科學(xué)滅活加工而成，是一種蛋白質(zhì)和維生素含量都比較高，而熱量脂肪和膽固醇都相對比較低的一種營養(yǎng)品。參照《GB 5009.5-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)含量檢測》測定小麥胚粉中的蛋白質(zhì)。

2 儀器與試劑

2.1 儀器

K1160 全自動凱氏定氮儀，SH420F 石墨消解儀，分析天平。

2.2 試劑

硫酸（分析純），催化劑片（分析純無水硫酸鉀 3g 和分析純無水硫酸銅 0.2g），20g/L硼酸溶液，溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑，40%氫氧化鈉。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 取樣

將樣品外包裝打開，混勻樣品，精確稱取 0.2g 左右（精確值 0.1mg），用稱量紙包好放入消化管內(nèi)，然后分別加入 3g 硫酸鉀與 0.2g 硫酸銅，沿消化管壁加硫酸 10mL。

3.2 消解

利用石墨消解爐進(jìn)行消解，將消化管放在石墨爐上，蓋上排氣罩，連接廢氣吸收系統(tǒng)，消化過程采用曲線升溫模式，設(shè)定消解參數(shù)如表 1：

表 1 消解參數(shù)設(shè)置

3.3 測試

將消化管放置于凱氏定氮儀上，定氮儀參數(shù)設(shè)置如表 2：

表 2 定氮儀參數(shù)設(shè)置

4 測試結(jié)果

4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.2 結(jié)論

通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，測定小麥胚粉的粗蛋白平均值為 27.2027%。以上數(shù)據(jù)顯示，使用 K1160 全自動凱氏定氮儀測定小麥胚粉中的蛋白質(zhì)所得結(jié)果誤差符合《GB 5009.5-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測定》標(biāo)準(zhǔn)要求的兩個測定值的JD差值不得超過算術(shù)平均值的 10%。

參考文獻(xiàn)

[1] GB 5009.5-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測定[S].

2020-10-20 13:50:38 526 0