此次實驗主要是為膝關(guān)節(jié)滑液組織制備單細(xì)胞，讓我們一起來看看凈信單細(xì)胞制備儀是如何制備膝關(guān)節(jié)滑液組織單細(xì)胞懸液，對其樣品前處理效果和懸液效果如何？

　　實驗地點：上海**大學(xué)醫(yī)學(xué)院東區(qū)單細(xì)胞中心

　　實驗儀器：單細(xì)胞懸液制備儀（溫控型）JX-CKSM-6WK

　　樣品前處理制備實驗步驟：

　　1、打開儀器電源開關(guān)，將儀器界面中的加熱點開預(yù)熱一段時間持恒溫。

　　2、將組織稍微剪切成小塊，放入凈信2ml研磨管中。

　　3、加入凈信消化酶旋上蓋子，上下微微晃動將其組織和消化酶均勻混合。

　　4、將混合好的研磨管放入加熱模塊中，再將研磨管放入熱板中，蓋上蓋子。

　　5、啟動設(shè)備，待設(shè)備停止運行后打開儀器蓋子，取出樣品管

　　6、將樣品管中的液體和剩下的組織一起倒入過濾管中，再加入終止液后得到渾濁的液體，即單細(xì)胞懸液。

　　樣品處理前后效果圖：

　　顯微鏡下的細(xì)胞呈現(xiàn)：

　　實驗樣品組織制備注意事項：

　　1、消化酶和終止液均需要在冷凍環(huán)境下保存

　　2、消化酶解凍時需在常溫條件下解凍，不可以放入水浴或者其他加熱儀器中解凍，溫度升高對酶的活性會有很大的影響。

近日，2020年ZX癌癥負(fù)擔(dān)報告由世界衛(wèi)生組織下屬國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）發(fā)布，報告對2020年度常見的癌癥類型、導(dǎo)致死亡主要癌癥類型以及未來的癌癥發(fā)展趨勢進行了全面的分析。

2020年最常見新發(fā)癌癥類型及占比

　　
　　腫瘤研究領(lǐng)域是全世界的科研熱點，隨著對腫瘤研究的白熱化，越來越多的科學(xué)家需要從腫瘤組織里來獲得細(xì)胞，從而建立原代腫瘤細(xì)胞系、分選腫瘤干細(xì)胞或者其它細(xì)胞以進行下游的信號通路檢測、藥物試驗、疾病發(fā)生等。在對腫瘤細(xì)胞的研究中，從腫瘤組織中獲得細(xì)胞的DY步就是制備單細(xì)胞懸液。那么，細(xì)胞懸液制備一般原則是什么呢？

細(xì)胞懸液制備一般原則

　　
　　傳統(tǒng)的單細(xì)胞懸液制備方法有機械法、酶消化法以及兩者的組合等，這些方法需要繁瑣的操作過程，費時費力。凈信單細(xì)胞懸液儀將會使單細(xì)胞懸液制備變得快速、簡單。僅需30min即可獲得大量單細(xì)胞懸液，細(xì)胞活性可達80%以上，具有自動溫控的特點。樣品范圍包括人類及小鼠腫瘤組織/正常組織，哺乳動物軟組織，植物愈傷及根尖組織。

　　SM-12型單細(xì)胞懸液儀器，由凈信實業(yè)發(fā)展有限公司自主研發(fā)，核心成員在上海交通大學(xué)、上海市中山醫(yī)院、中科院藥物所等國內(nèi)外知名高?；蛘咂髽I(yè)從事多年產(chǎn)品開發(fā)或者技術(shù)研究。公司將分子生物學(xué)、細(xì)胞領(lǐng)域的高科技人才有效聚集在一起，突破現(xiàn)術(shù)瓶頸，突破進口壟斷，開發(fā)出了單細(xì)胞懸液儀器。
　　
　　從組織獲得存活單細(xì)胞是一個復(fù)雜過程，目前市面上組織單細(xì)胞化的方法有采用機器處理或者人工處理方法,以上處理方法均存在處理時間長、細(xì)胞處于逆境狀態(tài)時間長、 細(xì)胞得率低、細(xì)胞存活率低、操作繁瑣等問題。單細(xì)胞懸液儀結(jié)合特定組織松解劑，快速、輕柔、安全、簡捷、GX、自動化的從組織如（脂肪、骨骼肌、動脈血管內(nèi)皮、心臟、肝臟、pi臟、肺泡、腎臟、腦、腫瘤）30min內(nèi)全自動完成組織單細(xì)胞的解離。

操作流程

　　
　　凈信單細(xì)胞懸液儀可應(yīng)用于單細(xì)胞測序、多色流式分析、質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)、原代細(xì)胞分離培養(yǎng)、細(xì)胞ZL等。具有組織利用率高、單細(xì)胞化過程GX、大細(xì)胞高產(chǎn)出的優(yōu)勢。
　　
　　使用凈信單細(xì)胞懸液儀，讓科學(xué)研究變得簡單GX。

　　近日，由上海凈信自主研發(fā)的國內(nèi)首臺溫控型單細(xì)胞懸液制備儀順利下線并通過客戶驗收。從組織獲得存活單細(xì)胞是一個復(fù)雜過程，目前市面上組織單細(xì)胞化的方法均存在處理時間長、細(xì)胞處于逆境狀態(tài)時間長、 細(xì)胞得率低、細(xì)胞存活率低、操作繁瑣等問題。聚焦單細(xì)胞測序領(lǐng)域，獲得優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞懸液是研究單細(xì)胞的前提條件，針對不同的樣本類型，如何制備高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液是目前比較關(guān)注的問題。

　　凈信單細(xì)胞懸液制備儀針對組織單細(xì)胞測序，快速完成單細(xì)胞化處理，能獲得高產(chǎn)且活率在85%以上的單細(xì)胞。

　　在江蘇中新醫(yī)藥，客戶現(xiàn)場做了結(jié)腸癌實體瘤樣本制備實驗，實驗結(jié)果令人滿意，客戶反饋極好。做測序流式?jīng)]有任何問題，如果做培養(yǎng)就加大樣品量就可以。

（制備后細(xì)胞計數(shù)）

　　凈信單細(xì)胞懸液制備儀是一種集成金屬浴消化與溫和剪切組織的新一代細(xì)胞懸液制備設(shè)備，應(yīng)用于流式細(xì)胞術(shù)/單細(xì)胞測序/原代細(xì)胞培養(yǎng)等實驗。具有起始組織量小，時間短，細(xì)胞得率高，細(xì)胞活性高的特點。采用國際DIN方法設(shè)計，低噪音，使用方便，性能穩(wěn)定。這款制備儀還帶加熱功能，對樣品的消化處理過程始終處在恒溫狀態(tài)。在腫瘤研究、心血管研究、干細(xì)胞研究、免疫研究、神經(jīng)科學(xué)研究等領(lǐng)域都能應(yīng)用的到。

（常見樣品）

　　操作簡單，省時GX，僅需幾步就能完成實驗。

　　主要優(yōu)勢：組織高利用率、單細(xì)胞化過程GX、單細(xì)胞高產(chǎn)出

　　*針對臨床穿刺樣本，使組織的利用率達到100%，細(xì)胞產(chǎn)量可達10萬個以上

　　*針對原細(xì)胞培養(yǎng)樣本，在15min內(nèi)完成組織到單細(xì)胞過程，降低細(xì)胞逆境時間，提高細(xì)胞存活率

　　*針對組織單細(xì)胞測序，快速完成單細(xì)胞化處理，獲得高產(chǎn)且活率在85%以上的單細(xì)胞

　　JX-CKSM-12WK溫控型單細(xì)胞懸液制備儀是上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司自主研發(fā)，核心成員在上海交通大學(xué)、上海市中山醫(yī)院、中科院藥物所等國內(nèi)外知名高?；蛘咂髽I(yè)從事多年產(chǎn)品開發(fā)或者技術(shù)研究。公司將分子生物學(xué)、細(xì)胞領(lǐng)域的高科技人才有效聚集在一起，突破現(xiàn)術(shù)瓶頸，突破進口壟斷，開發(fā)出了單細(xì)胞懸液制備儀器。

　　我們有強大的技術(shù)團隊做我們的堅實后盾，使用凈信單細(xì)胞懸液儀，讓單細(xì)胞技術(shù)研究變得簡單。

作為構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)和功能單位，神經(jīng)細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)在神經(jīng)科學(xué)研究中占據(jù)前沿地位。由于神經(jīng)元分離后不會再次分裂、增殖，因此在進行相關(guān)細(xì)胞實驗時，需要高效地制備高質(zhì)量原代神經(jīng)細(xì)胞保證實驗材料的供應(yīng)。

然而神經(jīng)細(xì)胞的分離制備難度較大，相較于新生鼠，成年鼠腦的解離更復(fù)雜，需要機械和酶解聯(lián)合作用來降解細(xì)胞外基質(zhì)，同時大量的髓鞘碎片和紅細(xì)胞也會干擾下游實驗。

那么，如何快速制備高質(zhì)量的大/小鼠神經(jīng)細(xì)胞懸液樣本呢？接下來，我們從實驗儀器及材料、實驗步驟和實驗結(jié)果一一介紹，希望對你的實驗有所幫助。

實驗儀器及材料

瑞沃德 DSC-400單細(xì)胞懸液制備儀；

瑞沃德 HJ-400 加熱套；

瑞沃德 DHABE-5003大小鼠成年腦組織溫和酶解試劑盒；

瑞沃德 SCT-100組織處理管；

70μm 細(xì)胞濾器；

瑞沃德眼科手術(shù)器械；

細(xì)胞培養(yǎng)耗材、移液槍等。

實驗步驟

1、按照說明書要求，混合配置酶mix并37℃水浴激活。

2、剝離成年鼠（P>7）腦組織，暫存至盛有HBSS（含Ca2+和Mg2+）的培養(yǎng)皿中，用眼科鑷輕輕地將腦組織的血管盡可能去除。

盡可能剔除腦組織上的血管

3、將腦組織和酶mix放于組織處理管中，用剪刀將全腦簡單剪成4塊。

4、將組織處理管倒置至單細(xì)胞懸液制備儀上，安裝加熱套，運行程序 M_ABrain_Heater_2。

5、潤濕細(xì)胞濾器，過濾細(xì)胞懸液樣本，300×g ，離心10 min。

使用細(xì)胞篩過濾雜質(zhì)

6、轉(zhuǎn)移細(xì)胞樣本至15mL離心管，加入去碎片試劑后混勻，上層鋪預(yù)冷的PBS，3000×g， 4℃，升速為5，降速為3，離心10min，保留下層細(xì)胞后洗滌收集。

去除碎片，收集下層細(xì)胞

7、裂紅操作（可選）。

8、細(xì)胞計數(shù)及流式檢測。

實驗結(jié)果

使用瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀處理成年小鼠腦組織獲得的細(xì)胞可達90%，細(xì)胞活性高，不影響下游實驗。瑞沃德 DHABE-5003大小鼠成年腦組織溫和酶解試劑盒，可用于成年大鼠或小鼠(P>7)全腦組織的單細(xì)胞懸液制備，可支持腦內(nèi)所有神經(jīng)及非神經(jīng)細(xì)胞的分離。

文末驚喜免費試用福利

識別上方二維碼

免費申請試用單細(xì)胞懸液制備儀

原代細(xì)胞 (primary cell) 是指從機體的組織（如人體組織、小鼠組織等）經(jīng)特定方法獲得單個細(xì)胞，并在體外進行模擬機體培養(yǎng)的細(xì)胞。原代細(xì)胞離體時間較短，生物學(xué)特性未發(fā)生較大變化，仍保有機體組織的遺傳特征，能更好地反映細(xì)胞在體內(nèi)的生長狀態(tài)，因此可獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù)，更適合用于藥物測試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實驗研究。

原代細(xì)胞分離是指使用酶、螯合劑（常用EDTA）以及機械方法處理動物組織，使其分散為單細(xì)胞懸液樣品，后續(xù)在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)體系下使分離的原代細(xì)胞進行生存、生長和繁殖的過程。針對不同物種的不同組織類型，其具體的操作流程也要進行調(diào)整，常規(guī)原代細(xì)胞分離流程為取樣→預(yù)處理→分離處理→過濾清洗→后處理。

01

取樣→預(yù)處理

取樣是原代單細(xì)胞懸液制備非常重要的一步，其質(zhì)量會直接影響到后續(xù)處理效果。

操作時，首先根據(jù)不同實驗需求麻醉或處死動物后進行消毒、固定并切開相應(yīng)位置皮膚暴露目的組織。

（▲暴露目的組織）

同時不同組織類型，取樣時也有細(xì)微差別。

其次操作過程中有以下幾點也需要注意：

• 嚴(yán)格無菌操作，快速處理；

• 針對不同組織類型控制環(huán)境溫度；

• 保證工具鋒利，減少機械損傷，動作輕柔，保持組織濕潤；

• 盡量去除非相關(guān)組織，尤其是殘留的小血管等；

• 完整記錄組織情況、重量等信息。

拿到樣本后針對不同分離流程選擇不同的預(yù)處理方式（如將腫瘤組織剪切到2-4mm左右的小塊），如血液細(xì)胞等已經(jīng)是單細(xì)胞懸液的樣本在簡單的離心換液過后就可以直接使用了，其他類型的組織還需要進一步解離。

（▲組織預(yù)處理）

02

分離處理

常規(guī)組織處理一般有兩種方法，分別是通過物理機械剪切和化學(xué)生物酶解來實現(xiàn)細(xì)胞分離。

物理機械剪切是使用勻漿機打散組織或者使用剪刀、銅網(wǎng)或者組織研磨器進行的剪碎法、網(wǎng)搓法和研磨法。這種方法成本低，操作簡單、快速，但對組織機械損傷巨大，而且細(xì)胞分散效果不盡人意，只適用于一些質(zhì)地軟且較為松散的軟組織。

化學(xué)生物酶解法是組織樣本預(yù)處理之后，在酶的作用下，破壞組織間的膠原纖維和彈性纖維，同時水解粘多糖及其他連接細(xì)胞間的蛋白質(zhì)；或者通過EDTA等化學(xué)物質(zhì)與細(xì)胞上的鈣、鎂離子結(jié)合形成螯合物，利用結(jié)合后的機械力使細(xì)胞變圓而分散細(xì)胞，尤其對上皮組織的分散效果很好。

使用酶解體系進行組織解離時還需注意酶的選擇和配比，最常使用胰蛋白酶和膠原酶進行處理。其中胰蛋白酶對蛋白質(zhì)有水解作用，主要作用于賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵，使細(xì)胞間質(zhì)中的蛋白質(zhì)消化溶解而使細(xì)胞分散開，適用于多種組織。

膠原酶是一種從細(xì)菌中提取出來的酶，對膠原有很強的消化作用。適用于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織，它對細(xì)胞間質(zhì)有較好的消化作用。不同的膠原酶適用的組織也會有不同。

除上述兩種最常用的消化酶外，還有鏈霉蛋白酶這種解離效果強但容易造成細(xì)胞損傷以及解離效果弱，但對細(xì)胞損傷較小的裂解酶，可以根據(jù)實際樣本的情況進調(diào)整，或者通過復(fù)配聯(lián)用達到更好的效果，例如可以使用透明質(zhì)酸酶與膠原酶聯(lián)用消化細(xì)胞間基質(zhì)等。

同時，在進行消化處理的時候佐以機械剪切，便能使組織分散得更加均勻，樣本處理效果更好。另外實驗操作中還需要注意以下幾點：

• 預(yù)處理好的組織塊需要在緩沖液中清洗，避免影響后續(xù)實驗；

• 酶量和作用時間應(yīng)根據(jù)組織量及時調(diào)整，避免消化時間過長影響細(xì)胞狀態(tài)，期間需要搖晃整個解離體系以保證組織塊接觸均勻；

• 嚴(yán)格控制溫度濕度條件，雖然胰蛋白酶發(fā)揮效果的最佳溫度是56℃，但是細(xì)胞無法承受如此高溫，所以需要在37℃環(huán)境進行處理，另外還有部分組織需要冷消化處理；

• 酶的保存也需要注意，凍干粉要注意防潮，溶解后避免反復(fù)凍融，如蛋白水解酶可以自動分解，因此建議在使用前立即將其溶解，并在冰上保存2°C～8°C。

原代細(xì)胞分離過程復(fù)雜，同時整個分離處理過程都需要人工參與，機械剪切過程難以控制實驗可重復(fù)性。隨著科技的進步，瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀輕松化解這一難題，自主研發(fā)的組織處理管、酶解試劑盒和內(nèi)置不同組織優(yōu)化處理程序，可將組織制備成高活性單細(xì)胞懸液或組織勻漿。

現(xiàn)在購買還可贈送保修時長哦！

根據(jù)實際樣本可在15-30min內(nèi)完成活性高、均一性好的單細(xì)胞懸液制備，大大增加實驗可重復(fù)性。擁有獨立運行的四通道，搭配加熱套實現(xiàn)全自動處理，提高組織處理效率。廣泛應(yīng)用在單細(xì)胞測序、原代細(xì)胞培養(yǎng)、流式分析、細(xì)胞分選、細(xì)胞治療等研究領(lǐng)域。

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03

過濾清洗→后處理

在分離處理操作結(jié)束后要對樣品進行過濾、離心、換液，對獲得的單細(xì)胞懸液進行細(xì)胞計數(shù)和活力分析，終止反應(yīng)并將細(xì)胞置于培養(yǎng)體系或相應(yīng)的緩沖體系中。

（▲活細(xì)胞計數(shù)）

自動細(xì)胞計數(shù)儀的使用可以對原代細(xì)胞進行精準(zhǔn)計數(shù)，瑞沃德C100自動細(xì)胞計數(shù)儀可配合多熒光通道，對懸液中的細(xì)胞進行定量分析，并同時顯示明場及熒光圖像，清晰呈現(xiàn)計數(shù)結(jié)果及細(xì)胞形態(tài)。適用于免疫學(xué)及疫苗開發(fā)、細(xì)胞治療、腫瘤研究、干細(xì)胞及代謝研究等研究領(lǐng)域的細(xì)胞分析。

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細(xì)胞培養(yǎng)是原代細(xì)胞分離流程最后一步，瑞沃德二氧化碳培養(yǎng)箱，可精準(zhǔn)控制溫度、二氧化碳濃度，并且是維持高濕度環(huán)境的高性能細(xì)胞培養(yǎng)箱。HEPA高效過濾器可有效去除空氣中的微粒污染，140℃高溫干熱滅菌功能可實現(xiàn)培養(yǎng)箱的定期滅菌維護，為原代細(xì)胞樣品提供穩(wěn)定潔凈的培養(yǎng)環(huán)境。

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無數(shù)細(xì)胞生物學(xué)研究實驗表明，制備高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液是開展下游實驗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。但在單細(xì)胞制備過程中，你是不是常被以下問題困擾著：

• 單細(xì)胞樣品活性低、活細(xì)胞數(shù)量少；分散效果不好、細(xì)胞團較多；雜質(zhì)碎片過多

• 單細(xì)胞樣品制備流程復(fù)雜，人工誤差大，難以保證樣品穩(wěn)定性；操作過程中還可能導(dǎo)致細(xì)胞污染

• 制備單細(xì)胞樣品處理速度慢，效率低

• 作為實驗室新手，對組織處理過程不清楚，需花費時間摸索，得出的實驗結(jié)果重復(fù)性差

以上問題，都會影響到有效單細(xì)胞數(shù)的產(chǎn)出及質(zhì)量等，導(dǎo)致ZZ得到的單細(xì)胞數(shù)據(jù)分析結(jié)果不可信。

現(xiàn)在，你將有機會一次性告別上述所有問題。

瑞沃德全新發(fā)布的單細(xì)胞懸液制備儀采用自主研發(fā)的組織解離技術(shù)搭配組織處理管、酶解試劑盒、內(nèi)置不同組織優(yōu)化處理程序，可將組織智能化地制備成高活性的單細(xì)胞懸液或組織勻漿。對于神經(jīng)組織、腦組織、小鼠脾 臟、肺、肝臟、心臟以及小鼠和人的腫瘤組織，實現(xiàn)溫和、自動化的組織解離。

_{（▲瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀）}

該設(shè)備不僅能有效縮短操作時間，還更好地保留了細(xì)胞抗原表位的完整性，從而保障了優(yōu)異的細(xì)胞活性，有利于細(xì)胞分選、細(xì)胞分析、細(xì)胞培養(yǎng)等下游實驗。尤其利于腫瘤研究、干細(xì)胞研究、免疫研究、神經(jīng)科學(xué)研究的原代細(xì)胞培養(yǎng)。更標(biāo)準(zhǔn)化的組織處理流程，增強了實驗的可重復(fù)性。

下面讓我們一起來看看瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀有哪些功能優(yōu)勢吧！

功能優(yōu)勢

1.高 效

• 四通道獨立工作，可同步處理不同組織，節(jié)約實驗時間

• 可配置加熱套，實現(xiàn)全自動樣品制備

• 一機兩用，不僅可以制備出高活性的單細(xì)胞懸液還可進行組織勻漿

2.溫和

• 專業(yè)的控制電機轉(zhuǎn)速平穩(wěn)可靠，滿足從20到4000rpm的不同應(yīng)用需求

• 配合多種酶解試劑盒、組織處理管，ZD限度保證細(xì)胞活性、降低損耗

3.智能

• 內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)化的處理流程不但全程可見，而且操作簡單，更能支持自定義另存

• USB直接導(dǎo)入并輕松同步程序，實現(xiàn)多臺機器協(xié)同工作

4.安全

• 配件在位檢測、抖動識別等多重報警機制全面保障用戶和樣本安全

• 全密封組織處理管，防止細(xì)胞污染

案例分享

用瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀對組織解離，是一種什么樣的體驗？

山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院：“單細(xì)胞懸液制備儀對實驗幫助很大，實驗結(jié)果細(xì)胞活率相對較高，細(xì)胞活性更好且染色及分群表達更清楚，數(shù)據(jù)更可靠?！?/p>

記住哦，你的單細(xì)胞樣本制備，寶貴的腫瘤組織等，現(xiàn)在統(tǒng)統(tǒng)交給瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀就好；有了WM的樣本制備，還怕得不到理想的實驗數(shù)據(jù)么？

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