近日，由上海凈信自主研發(fā)的國(guó)內(nèi)首臺(tái)溫控型單細(xì)胞懸液制備儀順利下線并通過(guò)客戶驗(yàn)收。從組織獲得存活單細(xì)胞是一個(gè)復(fù)雜過(guò)程，目前市面上組織單細(xì)胞化的方法均存在處理時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞處于逆境狀態(tài)時(shí)間長(zhǎng)、 細(xì)胞得率低、細(xì)胞存活率低、操作繁瑣等問(wèn)題。聚焦單細(xì)胞測(cè)序領(lǐng)域，獲得優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞懸液是研究單細(xì)胞的前提條件，針對(duì)不同的樣本類型，如何制備高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液是目前比較關(guān)注的問(wèn)題。

　　凈信單細(xì)胞懸液制備儀針對(duì)組織單細(xì)胞測(cè)序，快速完成單細(xì)胞化處理，能獲得高產(chǎn)且活率在85%以上的單細(xì)胞。

　　在江蘇中新醫(yī)藥，客戶現(xiàn)場(chǎng)做了結(jié)腸癌實(shí)體瘤樣本制備實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果令人滿意，客戶反饋極好。做測(cè)序流式?jīng)]有任何問(wèn)題，如果做培養(yǎng)就加大樣品量就可以。

（制備后細(xì)胞計(jì)數(shù)）

　　凈信單細(xì)胞懸液制備儀是一種集成金屬浴消化與溫和剪切組織的新一代細(xì)胞懸液制備設(shè)備，應(yīng)用于流式細(xì)胞術(shù)/單細(xì)胞測(cè)序/原代細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)。具有起始組織量小，時(shí)間短，細(xì)胞得率高，細(xì)胞活性高的特點(diǎn)。采用國(guó)際DIN方法設(shè)計(jì)，低噪音，使用方便，性能穩(wěn)定。這款制備儀還帶加熱功能，對(duì)樣品的消化處理過(guò)程始終處在恒溫狀態(tài)。在腫瘤研究、心血管研究、干細(xì)胞研究、免疫研究、神經(jīng)科學(xué)研究等領(lǐng)域都能應(yīng)用的到。

（常見(jiàn)樣品）

　　操作簡(jiǎn)單，省時(shí)GX，僅需幾步就能完成實(shí)驗(yàn)。

　　主要優(yōu)勢(shì)：組織高利用率、單細(xì)胞化過(guò)程GX、單細(xì)胞高產(chǎn)出

　　*針對(duì)臨床穿刺樣本，使組織的利用率達(dá)到100%，細(xì)胞產(chǎn)量可達(dá)10萬(wàn)個(gè)以上

　　*針對(duì)原細(xì)胞培養(yǎng)樣本，在15min內(nèi)完成組織到單細(xì)胞過(guò)程，降低細(xì)胞逆境時(shí)間，提高細(xì)胞存活率

　　*針對(duì)組織單細(xì)胞測(cè)序，快速完成單細(xì)胞化處理，獲得高產(chǎn)且活率在85%以上的單細(xì)胞

　　JX-CKSM-12WK溫控型單細(xì)胞懸液制備儀是上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司自主研發(fā)，核心成員在上海交通大學(xué)、上海市中山醫(yī)院、中科院藥物所等國(guó)內(nèi)外知名高?；蛘咂髽I(yè)從事多年產(chǎn)品開(kāi)發(fā)或者技術(shù)研究。公司將分子生物學(xué)、細(xì)胞領(lǐng)域的高科技人才有效聚集在一起，突破現(xiàn)術(shù)瓶頸，突破進(jìn)口壟斷，開(kāi)發(fā)出了單細(xì)胞懸液制備儀器。

　　我們有強(qiáng)大的技術(shù)團(tuán)隊(duì)做我們的堅(jiān)實(shí)后盾，使用凈信單細(xì)胞懸液儀，讓單細(xì)胞技術(shù)研究變得簡(jiǎn)單。

　　此次實(shí)驗(yàn)主要是為膝關(guān)節(jié)滑液組織制備單細(xì)胞，讓我們一起來(lái)看看凈信單細(xì)胞制備儀是如何制備膝關(guān)節(jié)滑液組織單細(xì)胞懸液，對(duì)其樣品前處理效果和懸液效果如何？

　　實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：上海**大學(xué)醫(yī)學(xué)院東區(qū)單細(xì)胞中心

　　實(shí)驗(yàn)儀器：單細(xì)胞懸液制備儀（溫控型）JX-CKSM-6WK

　　樣品前處理制備實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1、打開(kāi)儀器電源開(kāi)關(guān)，將儀器界面中的加熱點(diǎn)開(kāi)預(yù)熱一段時(shí)間持恒溫。

　　2、將組織稍微剪切成小塊，放入凈信2ml研磨管中。

　　3、加入凈信消化酶旋上蓋子，上下微微晃動(dòng)將其組織和消化酶均勻混合。

　　4、將混合好的研磨管放入加熱模塊中，再將研磨管放入熱板中，蓋上蓋子。

　　5、啟動(dòng)設(shè)備，待設(shè)備停止運(yùn)行后打開(kāi)儀器蓋子，取出樣品管

　　6、將樣品管中的液體和剩下的組織一起倒入過(guò)濾管中，再加入終止液后得到渾濁的液體，即單細(xì)胞懸液。

　　樣品處理前后效果圖：

　　顯微鏡下的細(xì)胞呈現(xiàn)：

　　實(shí)驗(yàn)樣品組織制備注意事項(xiàng)：

　　1、消化酶和終止液均需要在冷凍環(huán)境下保存

　　2、消化酶解凍時(shí)需在常溫條件下解凍，不可以放入水浴或者其他加熱儀器中解凍，溫度升高對(duì)酶的活性會(huì)有很大的影響。

無(wú)數(shù)細(xì)胞生物學(xué)研究實(shí)驗(yàn)表明，制備高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液是開(kāi)展下游實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。但在單細(xì)胞制備過(guò)程中，你是不是常被以下問(wèn)題困擾著：

• 單細(xì)胞樣品活性低、活細(xì)胞數(shù)量少；分散效果不好、細(xì)胞團(tuán)較多；雜質(zhì)碎片過(guò)多

• 單細(xì)胞樣品制備流程復(fù)雜，人工誤差大，難以保證樣品穩(wěn)定性；操作過(guò)程中還可能導(dǎo)致細(xì)胞污染

• 制備單細(xì)胞樣品處理速度慢，效率低

• 作為實(shí)驗(yàn)室新手，對(duì)組織處理過(guò)程不清楚，需花費(fèi)時(shí)間摸索，得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性差

以上問(wèn)題，都會(huì)影響到有效單細(xì)胞數(shù)的產(chǎn)出及質(zhì)量等，導(dǎo)致ZZ得到的單細(xì)胞數(shù)據(jù)分析結(jié)果不可信。

現(xiàn)在，你將有機(jī)會(huì)一次性告別上述所有問(wèn)題。

瑞沃德全新發(fā)布的單細(xì)胞懸液制備儀采用自主研發(fā)的組織解離技術(shù)搭配組織處理管、酶解試劑盒、內(nèi)置不同組織優(yōu)化處理程序，可將組織智能化地制備成高活性的單細(xì)胞懸液或組織勻漿。對(duì)于神經(jīng)組織、腦組織、小鼠脾 臟、肺、肝臟、心臟以及小鼠和人的腫瘤組織，實(shí)現(xiàn)溫和、自動(dòng)化的組織解離。

_{（▲瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀）}

該設(shè)備不僅能有效縮短操作時(shí)間，還更好地保留了細(xì)胞抗原表位的完整性，從而保障了優(yōu)異的細(xì)胞活性，有利于細(xì)胞分選、細(xì)胞分析、細(xì)胞培養(yǎng)等下游實(shí)驗(yàn)。尤其利于腫瘤研究、干細(xì)胞研究、免疫研究、神經(jīng)科學(xué)研究的原代細(xì)胞培養(yǎng)。更標(biāo)準(zhǔn)化的組織處理流程，增強(qiáng)了實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。

下面讓我們一起來(lái)看看瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀有哪些功能優(yōu)勢(shì)吧！

功能優(yōu)勢(shì)

1.高 效

• 四通道獨(dú)立工作，可同步處理不同組織，節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間

• 可配置加熱套，實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)樣品制備

• 一機(jī)兩用，不僅可以制備出高活性的單細(xì)胞懸液還可進(jìn)行組織勻漿

2.溫和

• 專業(yè)的控制電機(jī)轉(zhuǎn)速平穩(wěn)可靠，滿足從20到4000rpm的不同應(yīng)用需求

• 配合多種酶解試劑盒、組織處理管，ZD限度保證細(xì)胞活性、降低損耗

3.智能

• 內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)化的處理流程不但全程可見(jiàn)，而且操作簡(jiǎn)單，更能支持自定義另存

• USB直接導(dǎo)入并輕松同步程序，實(shí)現(xiàn)多臺(tái)機(jī)器協(xié)同工作

4.安全

• 配件在位檢測(cè)、抖動(dòng)識(shí)別等多重報(bào)警機(jī)制全面保障用戶和樣本安全

• 全密封組織處理管，防止細(xì)胞污染

案例分享

用瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀對(duì)組織解離，是一種什么樣的體驗(yàn)？

山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院：“單細(xì)胞懸液制備儀對(duì)實(shí)驗(yàn)幫助很大，實(shí)驗(yàn)結(jié)果細(xì)胞活率相對(duì)較高，細(xì)胞活性更好且染色及分群表達(dá)更清楚，數(shù)據(jù)更可靠。”

記住哦，你的單細(xì)胞樣本制備，寶貴的腫瘤組織等，現(xiàn)在統(tǒng)統(tǒng)交給瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀就好；有了WM的樣本制備，還怕得不到理想的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)么？

你就不想體驗(yàn)一下？

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作為構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)和功能單位，神經(jīng)細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)在神經(jīng)科學(xué)研究中占據(jù)前沿地位。由于神經(jīng)元分離后不會(huì)再次分裂、增殖，因此在進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要高效地制備高質(zhì)量原代神經(jīng)細(xì)胞保證實(shí)驗(yàn)材料的供應(yīng)。

然而神經(jīng)細(xì)胞的分離制備難度較大，相較于新生鼠，成年鼠腦的解離更復(fù)雜，需要機(jī)械和酶解聯(lián)合作用來(lái)降解細(xì)胞外基質(zhì)，同時(shí)大量的髓鞘碎片和紅細(xì)胞也會(huì)干擾下游實(shí)驗(yàn)。

那么，如何快速制備高質(zhì)量的大/小鼠神經(jīng)細(xì)胞懸液樣本呢？接下來(lái)，我們從實(shí)驗(yàn)儀器及材料、實(shí)驗(yàn)步驟和實(shí)驗(yàn)結(jié)果一一介紹，希望對(duì)你的實(shí)驗(yàn)有所幫助。

實(shí)驗(yàn)儀器及材料

瑞沃德 DSC-400單細(xì)胞懸液制備儀；

瑞沃德 HJ-400 加熱套；

瑞沃德 DHABE-5003大小鼠成年腦組織溫和酶解試劑盒；

瑞沃德 SCT-100組織處理管；

70μm 細(xì)胞濾器；

瑞沃德眼科手術(shù)器械；

細(xì)胞培養(yǎng)耗材、移液槍等。

實(shí)驗(yàn)步驟

1、按照說(shuō)明書(shū)要求，混合配置酶mix并37℃水浴激活。

2、剝離成年鼠（P>7）腦組織，暫存至盛有HBSS（含Ca2+和Mg2+）的培養(yǎng)皿中，用眼科鑷輕輕地將腦組織的血管盡可能去除。

盡可能剔除腦組織上的血管

3、將腦組織和酶mix放于組織處理管中，用剪刀將全腦簡(jiǎn)單剪成4塊。

4、將組織處理管倒置至單細(xì)胞懸液制備儀上，安裝加熱套，運(yùn)行程序 M_ABrain_Heater_2。

5、潤(rùn)濕細(xì)胞濾器，過(guò)濾細(xì)胞懸液樣本，300×g ，離心10 min。

使用細(xì)胞篩過(guò)濾雜質(zhì)

6、轉(zhuǎn)移細(xì)胞樣本至15mL離心管，加入去碎片試劑后混勻，上層鋪預(yù)冷的PBS，3000×g， 4℃，升速為5，降速為3，離心10min，保留下層細(xì)胞后洗滌收集。

去除碎片，收集下層細(xì)胞

7、裂紅操作（可選）。

8、細(xì)胞計(jì)數(shù)及流式檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

使用瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀處理成年小鼠腦組織獲得的細(xì)胞可達(dá)90%，細(xì)胞活性高，不影響下游實(shí)驗(yàn)。瑞沃德 DHABE-5003大小鼠成年腦組織溫和酶解試劑盒，可用于成年大鼠或小鼠(P>7)全腦組織的單細(xì)胞懸液制備，可支持腦內(nèi)所有神經(jīng)及非神經(jīng)細(xì)胞的分離。

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免費(fèi)申請(qǐng)?jiān)囉脝渭?xì)胞懸液制備儀

       相分離 (Phase separation)是目前發(fā)展非常迅速的一個(gè)研究領(lǐng)域，大量研究表明相分離在細(xì)胞中普遍存在，與基因組的組裝、轉(zhuǎn)錄調(diào)控等生物學(xué)過(guò)程密切相關(guān)；相分離的失衡可能會(huì)導(dǎo)致一些疾病(如神經(jīng)退行性疾病)的發(fā)生，通過(guò)干擾異?！跋喾蛛x”也有希望會(huì)成為ZL相關(guān)疾病的新手段。

       由于技術(shù)的限制，研究相分離的方法并不多。大部分相分離的研究仍在依賴液滴間自發(fā)的相互作用，且僅能獲得"是"與"否"融合的結(jié)果，無(wú)法進(jìn)行更多的融合相關(guān)參數(shù)的比較。而實(shí)際上相分離的過(guò)程非常復(fù)雜，這就需要更加精密的技術(shù)手段。LUMICKS公司的熒光光鑷系統(tǒng)C-Trap將光鑷系統(tǒng)、共聚焦成像和微流控系統(tǒng)結(jié)合，可以實(shí)時(shí)的對(duì)單個(gè)蛋白液滴進(jìn)行捕獲、操控和測(cè)量（力學(xué)性質(zhì)+熒光信號(hào)），為相分離的研究提供新思路。

       以RNA/RNP的相互作用對(duì)蛋白液滴性質(zhì)與融合的影響為例，研究人員使用C-Trap光鑷系統(tǒng)誘導(dǎo)液滴融合，比較了不同凝結(jié)體的性質(zhì)，通過(guò)融合時(shí)間對(duì)其融合能力和液滴穩(wěn)定性進(jìn)行了評(píng)估。 K/G-rich多肽序列與poly(U)RNA的融合速度 (平均0.0028 s/μm) 約為R/G-rich多肽序列與poly(A)RNA融合速度的兩倍 (圖1)。以上結(jié)果表明，前者具有更高的流動(dòng)性和更低的黏度，以及短程引力和長(zhǎng)程力調(diào)節(jié)RNA–多肽凝結(jié)過(guò)程，包括結(jié)合與凝固。通過(guò)進(jìn)一步研究來(lái)源于FUS模型的R/G-rich序列與poly(A)或poly(U) RNA的相互作用可以確認(rèn)，相變性質(zhì)因序列不同而不同。

圖1. 不同RNA-RNP復(fù)合體在光鑷系統(tǒng)誘導(dǎo)下的融合狀態(tài)隨時(shí)間變化的圖像。R/G-rich序列的RNA-RNP復(fù)合體融合時(shí)間相對(duì)K/G-rich序列更長(zhǎng)。 Poly(A)RNA相對(duì)poly(U) RNA會(huì)延長(zhǎng)融合時(shí)間。

C-Trap系統(tǒng)具有多種適合測(cè)量液滴性質(zhì)并對(duì)不同實(shí)驗(yàn)條件下的結(jié)果進(jìn)行比較的功能。系統(tǒng)的空間與時(shí)間的高分辨率可在操控液滴的同時(shí)檢測(cè)液滴的活動(dòng)。

?  可操控液滴誘導(dǎo)融合

?  可檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)條件下液滴的融合時(shí)間變化

?  可通過(guò)微流變學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)液滴的黏彈性

?  可檢測(cè)單一液滴在不同實(shí)驗(yàn)條件下的各項(xiàng)性質(zhì)