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- 美麗的公主5368 2016-12-27 00:00:00
- 恒溫法的和PCR探針法的哪一種效果好些 熒光定量PCR法檢測的是SYBR Green摻入到雙鏈DNA中的量。SYBR Green摻入到雙鏈DNA中后會(huì)發(fā)出熒光。但是只要是雙鏈，它都摻。 而探針法是當(dāng)探針結(jié)合到目標(biāo)序列上以后，聚合酶降解探針后，探針上自帶的熒光基團(tuán)離開淬滅基團(tuán)，從而發(fā)出熒光。 從兩者的原理上來看，不難判斷，熒光PCR法更加簡單方便，而且成本低。而探針法特異性更強(qiáng)。
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- 開機(jī)6154645 2017-01-17 00:00:00
- 恒溫?zé)晒夥肿訖z測試劑，內(nèi)含針對靶基因六個(gè)獨(dú)立區(qū)域設(shè)計(jì)的引物和具有高保真新能的Bst DNA聚合酶，能將拷貝數(shù)極低的DNA片段快速擴(kuò)增，具有高靈敏度、高特異性的特點(diǎn)。PCR-熒光探針法試劑，內(nèi)含針對靶基因2個(gè)獨(dú)立區(qū)域設(shè)計(jì)的引物和1個(gè)熒光標(biāo)記探針，熒光信號(hào)強(qiáng)度隨著PCR反應(yīng)產(chǎn)物的不斷累計(jì)而增加。通過實(shí)時(shí)收集熒光信號(hào)實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測產(chǎn)物量的變化。引物和探針均具有序列特異性，且能將極低起始拷貝數(shù)的DNA片段短時(shí)間內(nèi)快速擴(kuò)增，檢測特異性強(qiáng)，靈敏度高。 兩種方法的試劑效果一樣，恒溫法相對簡單些
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在之前發(fā)表的文章《實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法，你選對了嗎?》中提到，實(shí)時(shí)熒光定量PCR常用的方法包括了SYBR Green染料法、TaqMan探針法、分子信標(biāo)、熒光共振能量傳遞(FRET)和LUX Primers等。那么應(yīng)用最為廣泛的則是SYBR Green染料法和TaqMan探針法，兩者各有所長。今天，先給大家介紹TaqMan探針法，它優(yōu)秀在哪里？
TaqMan 探針法
最關(guān)鍵的Taqman探針，是一條與靶序列特異性結(jié)合的寡核苷酸序列，其能夠結(jié)合到正反向引物結(jié)合區(qū)域的中間部位，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，DNA聚合酶在延伸到探針位置時(shí)會(huì)將其水解，從而釋放熒光基團(tuán)，擴(kuò)增產(chǎn)物產(chǎn)生信號(hào)。
TaqMan探針法的優(yōu)勢
? 高特異性，只有在探針和靶標(biāo)基因之間發(fā)生特異性的水解，才會(huì)生成熒光信號(hào)。
? 多重分析，可選擇不同的報(bào)告基因染料標(biāo)記探針，在一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)擴(kuò)增并檢測多個(gè)不同的序列。
? 無需PCR后處理，減少分析工作量并節(jié)省材料成本。
探針序列的設(shè)計(jì)原則
1. TaqMan探針的長度zuihao不超過30bp。理想情況下，有15bp可獲得ZJ特異性；
2. Tm值在67℃-72℃之間，確保探針的Tm值比引物的高5-10℃，在退火過程中優(yōu)先結(jié)合到模板上；
3. 探針序列的GC含量在20％至80％之間，避免多個(gè)重復(fù)的堿基出現(xiàn)，尤其要避免4個(gè)或超過4個(gè)的G堿基；
4. 探針盡量避免出現(xiàn)二聚體或者發(fā)夾結(jié)構(gòu)，以保證足夠高的模板結(jié)合效率；
5. 探針5’端不能為G，因?yàn)榧词箚蝹€(gè)G堿基與FAM熒光報(bào)告基團(tuán)相連時(shí)，G也可以淬滅FAM基團(tuán)所發(fā)出的熒光信號(hào)，從而導(dǎo)致假陰性的出現(xiàn)。
引物探針設(shè)計(jì)不再犯愁
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如何選擇熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)
修飾基團(tuán)的選擇是探針法的重要環(huán)節(jié)，那么我們需要注意以下幾項(xiàng)：
1. 根據(jù)熒光定量PCR儀熒光通道，選擇適配的熒光基團(tuán)，優(yōu)先選擇常用的熒光基團(tuán)，如FAM、VIC或CY5等；
2. 根據(jù)熒光基團(tuán)類型選擇淬滅基團(tuán)。早期的淬滅基團(tuán)TAMRA，自身會(huì)發(fā)出熒光信號(hào)，干擾檢測結(jié)果，后續(xù)慢慢地被其他淬滅基團(tuán)替代。目前淬滅基團(tuán)最常用的就是BHQ、NFQ-MGB或QSY等；
3. 進(jìn)行多重qPCR檢測時(shí)，每個(gè)通道要選擇不同的熒光基團(tuán)，且避免各標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)和發(fā)射波長重疊，出現(xiàn)熒光干擾的情況。
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CG編號(hào) 產(chǎn)品描述 包裝規(guī)格 DBI-2073 Bestar? SybrGreen qPCR Master Mix
DBI-2043 Bestar? SybrGreen qPCR Master Mix
DBI-2044 Bestar? SybrGreen qPCR Master Mix
DBI-2074 Bestar? qPCR Master Mix (Taqman Probe)
DBI-2041 Bestar? qPCR Master Mix (Taqman Probe)
DBI-2042 Bestar? qPCR Master Mix (Taqman Probe)
DBI-2141 Storm star qPCR Master Mix (Taqman Probe)
DBI-2142 Stormstar qPCR Master Mix (Taqman Probe)
DBI-2143 Storm star SybrGreen qPCR Master Mix
DBI-2144 Stormstar SybrGreen qPCR Master Mix
DBI-2241 Storm star qPCR Master Mix (Taqman Probe)(UNG)
DBI-2242 Storm star qPCR Master Mix (Taqman Probe)(UNG)
DBI-2243 Stormstar SybrGreen qPCR Master Mix (UNG)
DBI-2244 Stormstar SybrGreen qPCR Master Mix (UNG)
DBI-2220 Bestar? qPCR RT Kit ( gDNA Remover )
DBI-2222 Bestar? qPCR RT Mix ( gDNA Remover)
DBI-2223 Bestar? one step RT qPCR kit ( SybrGreen )
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DBI-2226 Bestar? one step RT qPCR kit ( Taqman Probe )
DBI-2227 Bestar? one step RT qPCR kit ( Taqman Probe )
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DBI-2231 Bestar? HRM Master Mix
DBI-2232 Bestar? HRM Master Mix
DBI-2233 Universal qPCR Mix (Taqman probe)
DBI-2234 Universal qPCR Mix (Taqman probe)
DBI-2235 High-throughput qPCR Mix (Taqman probe)
DBI-2236 High-throughput qPCR Mix (Taqman probe)包裝規(guī)格：
25 ml
5 ml
1 ml
5 ml
200 Reaction
100 Reaction (50uL)熒光定量PCR試劑
產(chǎn)品優(yōu)勢：本生生物代理實(shí)驗(yàn)室R耗材品種全，可替代儀器原廠耗材，性價(jià)比高，質(zhì)量穩(wěn)定，對用戶可以節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本。
適應(yīng)客戶：醫(yī)院檢驗(yàn)科PCR實(shí)驗(yàn)室，驗(yàn)室；第三方檢測機(jī)構(gòu)，科研院所，大專院校，制藥廠，試劑生產(chǎn)廠家，疾控，檢驗(yàn)檢疫。
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