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  真真切切ii 2012-03-09 00:00:00

  Z常用的是酶切

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  我前天訂的 2012-03-09 00:00:00

  可以PCR，但這樣獲得的基因通常要測序，因?yàn)槿菀子绣e(cuò)誤參入 反轉(zhuǎn)錄cDNA 直接提取dna

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  敏姐是個(gè)好人0 2012-03-09 00:00:00

  鳥槍法 這種方法類似于鳥槍發(fā)射散彈。具體的做法是：用若干個(gè)合適的限制酶處理一個(gè)DNA分子，將它切成若干個(gè)DNA片段。這些片段的長度相當(dāng)于或略大于一個(gè)基因。然后，將這些不同的DNA片段分別與適當(dāng)?shù)妮d體結(jié)合，形成重組DNA，再將它導(dǎo)入到相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型細(xì)菌中。例如，當(dāng)我們要提取維生素B1合成酶基因時(shí)，就要采用維生素B1的營養(yǎng)缺陷型細(xì)菌（它在不含維生素B1的培養(yǎng)基上不能生長）。把整合了不同DNA片段的營養(yǎng)缺陷型細(xì)菌分別接種到不含維生素B1的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，只有那些整合了含有維生素B1合成酶基因的DNA片段的細(xì)菌才能正常生長。Z后，把這些細(xì)菌中的這段DNA分離出來，再進(jìn)行一系列的操作，就可以獲得維生素B1合成酶基因。這種方法的缺點(diǎn)是專一性較差，分離出來的有時(shí)并非一個(gè)基因，但由于這種方法操作簡便，所以現(xiàn)在仍然廣泛采用。 反轉(zhuǎn)錄法 這種方法是在核糖體合成多肽的旺盛時(shí)期，首先把含有目的基因的mRNA的多聚核糖體提取出來，分離出mRNA，然后以mRNA為模板，用反轉(zhuǎn)錄酶合成一個(gè)互補(bǔ)的DNA，即cDNA單鏈，再以此單鏈為模板合成出互補(bǔ)鏈，就成為雙鏈DNA分子。這種方法專一性強(qiáng)，但是操作過程比較麻煩，特別是mRNA很不穩(wěn)定、生存時(shí)間短，所以要求的技術(shù)條件較高。 氨基酸序列合成法 這種方法是建立在DNA序列分析基礎(chǔ)上的。當(dāng)把一個(gè)基因的核苷酸序列搞清楚后，可以按圖紙先合成一個(gè)個(gè)含少量（10～15個(gè)）核苷酸的DNA片段，再利用堿基對(duì)互補(bǔ)的關(guān)系使它們形成雙鏈片段，然后用連接酶把雙鏈片段逐個(gè)按順序連接起來，使雙鏈逐漸加長，Z后得到一個(gè)完整的基因。這種方法專一性Z強(qiáng)，現(xiàn)在用計(jì)算機(jī)自動(dòng)控制的DNA合成儀，進(jìn)行基因合成，使基因合成的效率大大提高。但是這種方法目前于合成核苷酸對(duì)較少的一些簡單基因，而且必須事先把它們的核苷酸序列搞清楚。對(duì)于許多復(fù)雜的、目前尚不知道核苷酸序列的基因就不能用這種方法合成，只能用前兩種方法或其他方法分離或合成。這種合成基因的方法還有一個(gè)很大的優(yōu)點(diǎn)，就是可以人工合成自然界不存在的新基因，使生物產(chǎn)生新的性狀以滿足人類需求。因此，這一方法今后將隨著技術(shù)的不斷改進(jìn)而得到越來越廣泛的應(yīng)用。

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