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- sijie199396 2013-04-11 00:00:00
- 目的基因是指準(zhǔn)備導(dǎo)入受體細胞內(nèi)的，以研究或應(yīng)用為目的所需要的外源基因稱目的基因。獲得目的基因的方法很多，但也是十分困難的一步。目前獲得目的基因有4條途徑：1.從生物基因組群體中分離目的基因 原核生物基因組較小，基因容易定位，用限制性內(nèi)切酶將基因組切成若干段后，用帶有標(biāo)記的核酸探針，從中選出目的基因。真核生物一般通過基因組文庫的方法獲得目的基因。2.人工合成目的基因DNA片段 人工合成目的基因DNA片段有化學(xué)合成和酶促合成法兩條途徑。一般是采用DNA合成儀來合成長度不是很大的DNA片段。3.PCR反應(yīng)合成DNA 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR)是以DNA變性、復(fù)制的某些特性為原理設(shè)計的。通過PCR技術(shù)獲取所需要的特異DNA片段在實際應(yīng)用用得非常多，但是前提條件是必須對目的基因有一定的了解，需要設(shè)計引物。4.mRNA差異顯示法獲得目的基因 mRNA差異顯示(mRNA differential display， DD)是1992年由哈佛醫(yī)學(xué)院Peng Liang等人建立的。原理是先用PCR技術(shù)擴增所有的mRNA、生成cDNA群體，再用測序凝膠電泳獲取所需要的目的基因，然后再次用PCR擴增。簡單的講，就是從基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA來反轉(zhuǎn)錄成cDNA作為目的基因。5、用機械的方法，例如超聲波把基因組打成片段。
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