參與評(píng)論

評(píng)論

登錄后參與評(píng)論

全部評(píng)論(1條)

• 

  漢共操耗侄障說 2017-10-08 07:48:48

  基因工程流程的diyi步就是獲得目的DNA片段，如何獲得目的DNA片段就成為基因工程的關(guān)鍵問題.所需目的基因的來源，不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因.常用的方法有PCR法、化學(xué)合成法、cDNA法及建立基因文庫的方法來篩選 直接獲取 1.從基因文庫中獲取 這個(gè)沒什么就是現(xiàn)成的基因儲(chǔ)存在受體菌上你用的時(shí)候提取出來就好了（基因組文庫法 就是原教材中的用限制性內(nèi)切酶直接獲取.利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫的一般操作程序如下：① 選用特定限制性內(nèi)切酶，DNA進(jìn)行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA.③ 經(jīng)適當(dāng)處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進(jìn)行體外重組.④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒.⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個(gè)DNA的重組DNA群體，即文庫. 2.cDNA文庫法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）.cDNA文庫，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體.雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫比其cDNA文庫大得多，相關(guān)工作量同樣大得多.更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達(dá)真核生物DNA.而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達(dá).因此，在基因工程中，cDNA文庫法是從真核生物細(xì)胞中分離目的基因的常用方法. 3.直接分離基因Z常用的方法是“鳥槍法”，又叫“散彈射擊法”.這種方法有如用發(fā)射的散彈打鳥，無論哪一顆彈粒擊中目標(biāo)，都能把鳥打下來.鳥槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性內(nèi)切酶）將供體細(xì)胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運(yùn)載體，然后通過運(yùn)載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在受體細(xì)胞中大量復(fù)制（在遺傳學(xué)中叫做擴(kuò)增），從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來.如許多抗蟲，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得. 用“鳥槍法”獲取目的基因的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是工作量大，具有一定的盲目性. 人工合成 1.(主要是序列已知的基因).主要是通過DNA自動(dòng)合成儀，通過固相亞磷酸酰胺法合成，具體過程可以網(wǎng)上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個(gè)一個(gè)連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因.對(duì)于大的基因一般是先用化學(xué)合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因. 2.聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction ，PCR)是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù).它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬乃至百萬倍，使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研 究和檢測(cè)鑒定.過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成.PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑 他只是給目的基因的擴(kuò)增

  贊(18)

  回復(fù)(0)

  評(píng)論

  評(píng)論

  登錄后參與評(píng)論