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- Fiend丶影 2016-12-25 00:00:00
- 堿裂解法：此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下： 1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細胞于2ml LB培養(yǎng)基。 2、37℃振蕩培養(yǎng)過夜。 3、取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。 4、加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。 5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH，1％ SDS)，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5 min 。 6、加入0.15m1預(yù)冷溶液III(5 mol/L KAc，pH4.8)，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5 min 。 7、以10，000rpm離心20min，取上清液于另一新Ep管 8、加入等體積的異戊醇，混勻后于?0℃靜置10min。 9、再以10，000rpm離心20min，棄上清。 10、用70％乙醇0．5ml洗滌一次，抽干所有液體。 11、待沉淀干燥后，溶于0．05mlTE緩沖液中
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