在植物基因組DNA提取過程中β-巰基乙對DNA的影響？
-
我們用的是CTAB法，之前提過，藥品配制中加了β-巰基乙醇，OD比值不行，電泳效果不理想。再次實(shí)驗(yàn)時(shí)，配制藥品過程中沒有加β-巰基乙醇，準(zhǔn)備在加提取液時(shí)直接加到Ep管中，但是忘了，... 我們用的是CTAB法，之前提過，藥品配制中加了β-巰基乙醇，OD比值不行，電泳效果不理想。再次實(shí)驗(yàn)時(shí)，配制藥品過程中沒有加β-巰基乙醇，準(zhǔn)備在加提取液時(shí)直接加到Ep管中，但是忘了，結(jié)果OD比值接近1.7，電泳效果比之前的好。查閱文獻(xiàn)，CTAB法基本都要加β-巰基乙醇，防止氧化，而沒有涉及這種的現(xiàn)象的解釋。求解？ 展開
全部評論(1條)
-
- 追天攬?jiān)?23 2013-04-26 00:00:00
- 我是做動物的，沒有提過植物的DNA，對β-巰基乙醇也只在提蛋白的時(shí)候用過。 百度知道里有這么一句：“用CTAB法提取某些易發(fā)生褐變物種的DNA時(shí)不加肯定會對細(xì)胞產(chǎn)生影響，但具體會有何影響則視具體物種，操作環(huán)境和具體方法的不同而定”。雖然百度知道的可信性有點(diǎn)...不過物種不同所以效果不同也的確是普遍存在的現(xiàn)象。 我做實(shí)驗(yàn)的感覺是，東西做出來是王道，現(xiàn)成的protocol只是參考。比如我自己提蛋白用的裂解液的配方是自己摸出來的，跟其他人和文獻(xiàn)上都不一樣。如果你們實(shí)驗(yàn)室這種提取方法提取出的DNA質(zhì)量的確好，并且是可重復(fù)的，那就這么做好了。機(jī)理細(xì)節(jié)，也許就是物種特異性、氧化性不強(qiáng)，也有可能是你們用的這一批巰基乙醇質(zhì)量一般，或者混入了其他東西。如果想要驗(yàn)證，可以再買另一個(gè)公司的試試，當(dāng)然如果只focus在DNA上，并且現(xiàn)在已經(jīng)很好了，就這么做下去也不妨。不是不求甚解，而是主次有別。 植物學(xué)門外漢，一家之言，僅供參考。祝實(shí)驗(yàn)順利=)
-
贊(14)
回復(fù)(0)
熱門問答
- 在植物基因組DNA提取過程中β-巰基乙對DNA的影響？
- 我們用的是CTAB法，之前提過，藥品配制中加了β-巰基乙醇，OD比值不行，電泳效果不理想。再次實(shí)驗(yàn)時(shí)，配制藥品過程中沒有加β-巰基乙醇，準(zhǔn)備在加提取液時(shí)直接加到Ep管中，但是忘了，... 我們用的是CTAB法，之前提過，藥品配制中加了β-巰基乙醇，OD比值不行，電泳效果不理想。再次實(shí)驗(yàn)時(shí)，配制藥品過程中沒有加β-巰基乙醇，準(zhǔn)備在加提取液時(shí)直接加到Ep管中，但是忘了，結(jié)果OD比值接近1.7，電泳效果比之前的好。查閱文獻(xiàn)，CTAB法基本都要加β-巰基乙醇，防止氧化，而沒有涉及這種的現(xiàn)象的解釋。求解？ 展開
2013-04-25 02:56:59
615
1
- 植物基因組dna提取與其他生物基因組dna提取有何異同
2018-11-22 21:52:44
362
0
- 提取植物基因組DNA，DNA是綠色的
- 我用的是CTAB法提取植物基因組DNA，方法如下：1.稱取材料0.2g，加入適量PVP，500μl冰冷CTAB，20μl冰冷RNA酶研磨；2.研磨后加入500μl加熱的CTAB，裝入1.5ml離心管中... 我用的是CTAB法提取植物基因組DNA，方法如下： 1.稱取材料0.2g，加入適量PVP，500μl冰冷CTAB，20μl冰冷RNA酶研磨； 2.研磨后加入500μl加熱的CTAB，裝入1.5ml離心管中； 3.充分混勻后，65℃水浴1h，期間不時(shí)輕緩震蕩； 4.12000rpm離心10min，取750μl上清液至另一離心管中； 5.加入等體積的Tris飽和酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），搖勻后12000rpm、離心10min； 6.取上層清液650μl，加入等體積氯仿·異戊醇（24:1），搖勻后12000rpm離心10min； 7.取550μl上清液至另一離心管中，加入等體積異丙醇； 10.-20℃放置1h或室溫下過夜； 11.12000rpm離心10min，倒棄上清液；70%冰冷乙醇洗滌沉淀2次； 12.倒棄上清液，風(fēng)干沉淀； 14.加100μlTE溶解DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩? 可是不知道為什么Z后異丙醇沉淀出來的DNA居然是深綠色的，已經(jīng)接近黑色了。有的時(shí)候同樣的步驟做出來的又是白色或者黃色的，這到底是怎么回事??！希望知道的人給我個(gè)提示！ 會不會是因?yàn)楹吐确?異戊醇反應(yīng)的時(shí)間過長？因?yàn)槲野l(fā)現(xiàn)我剩下的那些材料過一段時(shí)間后都變得很綠。 展開
2010-06-20 00:43:24
707
4
- 植物基因組dna提取有多糖污染怎么辦
2017-07-23 05:04:14
510
1
- 在基因組dna的提取過程中應(yīng)注意哪些問題
2015-06-18 13:34:11
1343
1
- 如何獲得高純度植物基因組DNA
2018-12-07 19:32:02
408
0
- 用天根新型植物基因組dna提取試劑盒提取dna濃度大概多少
2018-11-14 05:53:02
453
0
- 季節(jié)因素會不會影響植物dna提取
2017-01-25 06:35:40
341
1
- 肝臟DNA提取過程中哪些因素不利于DNA分
2017-11-24 08:37:27
434
1
- 如何使用離心機(jī)提取植物基因組DNA
2017-08-24 21:45:12
1659
1
- 提取植物基因組dna后加多少rnase
2015-01-14 08:32:58
666
1
- 在動物DNA提取的實(shí)驗(yàn)中，在提取DNA過程中應(yīng)如何避免大分子DNA的降解.
2013-07-30 06:18:39
821
2
- 植物總DNA提取過程中應(yīng)該注意哪些問題
2017-06-12 00:09:53
713
1
- 植物基因組DNA提取跑膠條帶很寬，是為什么
2017-11-16 11:41:07
641
1
- 糞便基因組Dna提取
- 我用天根糞便基因組Dna提取試劑盒提取Dna然后直接跑電泳，marker可以看到，但樣品什么都沒有…請教高人
2013-03-18 10:01:59
458
2
- 75%乙醇，在植物基因組dna的提取試驗(yàn)中什么作用
2017-11-02 01:42:40
1182
1
- 高氯酸鈉對dna提取的影響
- 高氯酸鈉對于放線菌的dna提取有沒有影響啊？我們已經(jīng)提了幾天都沒有出現(xiàn)dna沉淀，不明白他有沒有破壞作用。。。 方法如下：1.5~2g濕菌體，加入20ml 1×TES，充分打散菌體 ↓加入2mg溶菌酶 37℃水浴保溫30-60分鐘，溫和搖動 ↓加入2ml 20% SDS (終濃度為2%)... 高氯酸鈉對于放線菌的dna提取有沒有影響啊？我們已經(jīng)提了幾天都沒有出現(xiàn)dna沉淀，不明白他有沒有破壞作用。。。 方法如下：1.5~2g濕菌體，加入20ml 1×TES，充分打散菌體 ↓加入2mg溶菌酶 37℃水浴保溫30-60分鐘，溫和搖動 ↓加入2ml 20% SDS (終濃度為2%) 55℃水浴保溫10分鐘，然后冷卻至室溫 ↓加入100μl蛋白酶K溶液 55℃水浴保溫30-60分鐘，溫和搖動 ↓加入5ml 5M NaClO4溶液 加入等體積(27ml) P:C:I混合液，充分振蕩使其呈乳濁液，約30~60分鐘 ↓5000rpm，4℃，20-30分鐘離心 用剪去槍尖的槍頭吸取上層水相，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，重復(fù)用P:C:I抽提2-3次至沒有蛋白膜出現(xiàn)為止 ↓加入70μl RNase溶液 37℃水浴保溫30-60分鐘 ↓ 加入等體積的C:I混合液，充分振蕩 ↓5000rpm，4℃，20-30分鐘離心 轉(zhuǎn)移上層水相至燒杯中，冰浴，加入1/10體積預(yù)冷的3M NaAc-1mM EDTA-Na2及等體積的冷異丙醇，使DNA沉淀 ↓用玻璃棒繞起DNA絲 望各位高手指點(diǎn)一二??！不勝感激。。 展開
2009-07-16 20:02:05
848
2
- 電泳過程中為什么基因組dna抽提過程中不能激烈的震蕩
2018-12-08 03:37:20
388
0
- 植物基因組DNA提取試劑盒試驗(yàn)用的哪家的更好一些
2016-12-26 01:49:55
526
1
- 植物基因組DNA提取試劑盒試驗(yàn)用的哪家的更好一些
2016-12-26 05:58:57
525
1
4月突出貢獻(xiàn)榜
推薦主頁
最新話題
滬公網(wǎng)安備 31011502008050號
參與評論
登錄后參與評論