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  紫丁香的孤單 2018-04-09 00:00:00

  1.機械破碎法（勻漿）1利用機械力將細胞破碎。常用的設(shè)備：高速組織搗碎機，勻漿器，研缽等。不同組織的特性來選擇不同的方法，動物的胰肝腦一般較柔軟，用普通勻漿器研磨即可，而肌及心肌組織較韌，需預(yù)先攪碎成勻漿。2.超聲破碎法1利用震蕩頻率為15-25KHz的超聲波在細胞液中產(chǎn)生的空化效應(yīng)和機械效應(yīng)將細胞膜破碎的方法，多用于細胞裂解。2注意事項：（1）為了避免在溶液中產(chǎn)生泡沫，要將超聲探頭完全置于液面以下，并不接觸的前提下盡可能靠近容器底部。（2）應(yīng)該使用塑料試管，避免使用玻璃試管。（3）超聲劑量應(yīng)由樣品量和菌體來決定，攻率可以在200-600w。過強的超聲波可導(dǎo)致多聚物降解和蛋白失活。如果超聲出現(xiàn)沉淀說明超聲功率太大。（4）一般超聲5-10s，反復(fù)多次。（4）將試管置于冰水中以避免蛋白質(zhì)變性和失活。3.反復(fù)凍融法1將細胞在-20度以下或液氮條件下冰凍，室溫溶解，反復(fù)多次。特點：成本低，操作簡便，過程緩慢，但不適用于對溫度比較敏感的蛋白質(zhì)。END4.表面活性劑裂解及酶解法自溶法：利用自身的酶將細胞破使細胞內(nèi)物質(zhì)釋放出來。該法比較穩(wěn)定，且蛋白不易分解。自溶過程中PH會有顯著的變化。酶融法：利用生物酶使細胞成分溶于溶劑中。3表面活性劑處理：通過破壞細胞膜磷脂雙分子層將胞內(nèi)物質(zhì)釋放出來。

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