二氯甲烷殘留檢測的方法有哪些？

激素類藥物主要包括雄激素、雌激素、孕激素、皮質(zhì)醇激素等。激素類藥物的應(yīng)用，能夠較為有效地提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟效益，但同時激素的濫用對人體健康的危害也是不容忽視的。一些養(yǎng)殖戶片面追求經(jīng)濟利益，從而過度使用激素類藥物，導(dǎo)致飼養(yǎng)動物體內(nèi)的激素嚴(yán)重超標(biāo)，所生產(chǎn)的肉類食品中也有大量的激素殘留。如果食用這樣的肉類食品，也會造成人體自身激素紊亂，給人體健康造成很大威脅。

實驗部分

應(yīng)用范圍：動物源性食品/豬肉/豬肝/雞蛋/牛奶/牛肉/雞肉/蝦

檢測方法：液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

方法原理：試樣中的目標(biāo)化合物經(jīng)均質(zhì)，酶解，用甲醇-水溶液提取，經(jīng)固相萃取富集凈化，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標(biāo)法定量

前處理儀器：電子天平（感量0.0001 g和0.01 g）；組織勻漿機；渦旋混合器；恒溫振蕩器；超聲清洗儀；離心機（10000 r/min）；固相萃取裝置；氮吹儀；pH計；移液器。

檢測儀器：LC-MS/MS+ESI源

實驗制備

1.動物肌肉、肝臟、蝦

從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500g，剔除筋膜，蝦去除頭和殼。用組織搗碎機充分搗碎均勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于-18 ℃以下冷凍存放。

2.牛奶

從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g，充分搖勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于0 ℃～4 ℃ 以下冷藏存放。

3.雞蛋

從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g，去殼后用組織搗碎機充分?jǐn)嚢杈鶆?，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于0 ℃～4 ℃ 以下冷藏存放。

前處理方法

1.提取

稱取5g試樣（精確至0.01 g）于50mL具塞塑料離心管中，準(zhǔn)確加入混合內(nèi)標(biāo)溶液（100μg/L）100μL和10mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，渦旋混勻，再加入β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液100μL，于37℃±1 ℃振蕩酶解12h。取出冷卻至室溫，加入25mL甲醇超聲提取30min，0℃～4℃下10000r/min離心10min。將上清液轉(zhuǎn)入潔凈燒杯，加水100mL，混勻后待凈化。

2.凈化

分別用6mL二氯甲烷-甲醇（7+3），6mL甲醇，6mL水活化ENVI-Carb固相萃取柱（500mg，6 mL），將提取液以2mL/min～3mL/min的速度上樣。將小柱減壓抽干。再將用6mL二氯甲烷-甲醇（7+3）活化好的氨基固相萃取柱（500mg，6mL）串接在ENVI-Carb小柱下方。用6 mL二氯甲烷-甲醇（7+3）洗脫并收集洗脫液，取下ENVI-Carb小柱，再用2mL二氯甲烷-甲醇（7+3）洗氨基柱，合并洗脫液后在微弱的氮氣流下吹干，用1 mL甲醇-水（1+1）溶解殘渣，供儀器測定。

注意事項

1.激素類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及內(nèi)標(biāo)用甲醇配成1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液，在-18 ℃以下避光保存，可穩(wěn)定使用12個月。

2.如果有條件，建議每種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用其對應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)進行校正。實在沒有對應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)，選擇與其化學(xué)性質(zhì)最近似的同位素內(nèi)標(biāo)進行校正（參考國標(biāo)方法）。

3.β-葡萄糖醛酸酶只能冷藏，不能冷凍保存，否則會失活。

4.由于上樣液比較多，可以自制一種可控流速的大針筒，固定在ENVI-Carb小柱上面，一次加上全部提取液，提高凈化富集效率。

5.由于檢測項目比較多，在濃縮過程中需要微弱氮氣緩緩吹至近干，控制溫度不高于35 ℃。

6.國標(biāo)方法中激素類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)比較多，需要根據(jù)檢測的項目，制定不同的色譜方法。如果檢測項目比較多，建議使用一根150 mm長的色譜柱進行分離。根據(jù)出峰時間，使用正負(fù)離子切換模式進行掃描，提高檢測效率。

參考文獻：

GB/T 21981-2008 動物源食品中激素多殘留檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

豬肉、豬肝、雞蛋、牛奶、牛肉、雞肉和蝦中激素類藥物殘留量測定的前處理流程圖

激素類藥物信息表

《GB 5009.168-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測定》適用于食用油、乳粉等食品中脂肪酸的檢測。在開展食品脂肪酸的檢測時，實驗員經(jīng)常會遇到各種小問題，小編今天整理了一些常見問題進行分享學(xué)習(xí)。

\ 脂肪酸甲酯和脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品如何選擇？/

國標(biāo)《GB 5009.168-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測定》按照定量方法分為三個方法，分別是內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法和歸一化法。內(nèi)標(biāo)法需要使用37種脂肪酸甲酯混標(biāo)作為定性外標(biāo)，十一碳酸甘油三酯作為定量內(nèi)標(biāo)；外標(biāo)法需要使用相應(yīng)的脂肪酸甘油三酯作為定量外標(biāo)；歸一化法需要使用37種脂肪酸甲酯混標(biāo)作為定性外標(biāo)。

\ 37種脂肪酸甲酯混標(biāo)如何使用，

內(nèi)標(biāo)法如何配置標(biāo)準(zhǔn)曲線？/

上圖為國標(biāo)GB 5009.168-2016 標(biāo)準(zhǔn)截圖，可以看出，內(nèi)標(biāo)法需要配置5mg/mL十一碳酸甘油三酯的內(nèi)標(biāo)溶液；而混合脂肪酸甲酯標(biāo)液不需要配置標(biāo)準(zhǔn)曲線，僅用于定性和脂肪酸甲酯響應(yīng)因子的計算。

如果選購安譜實驗的37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)液（CDAA-252795-MIX-1ml，不同濃度于異辛烷，總計10 mg/mL），建議取1.0mL 混合標(biāo)液稀釋至5mL或10mL，得到總計2mg/mL或1mg/mL的37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

內(nèi)標(biāo)法的計算公式見上圖，可以看出，脂肪酸甲酯混標(biāo)的作用主要是用來計算脂肪酸甲酯相對十一碳酸甲酯的響應(yīng)因子，因此進樣單點的標(biāo)準(zhǔn)溶液即可；樣品中脂肪酸甲酯的含量計算主要取決于樣品中添加的十一碳酸甲酯內(nèi)標(biāo)的含量和樣品中各脂肪酸甲酯的峰面積及其響應(yīng)因子。樣品中脂肪酸的含量需要由脂肪酸甲酯的含量再乘以轉(zhuǎn)換系數(shù)得到。

\ 使用CD-2560進樣37種脂肪酸甲酯為什么只出了36個峰？/

不同品牌、不同規(guī)格的色譜柱，色譜柱污染、柱效下降的色譜柱都可能導(dǎo)致37種脂肪酸的分離有所變化，建議可通過調(diào)整流速等參數(shù)優(yōu)化色譜條件，以達(dá)到最 優(yōu)分離度。

建議先在 0.8mL/min 的流速條件下查看目標(biāo)峰的分離情況，根據(jù)出峰情況，如果是 31 號和 32 號峰分離變差就增加流速，如果是 24 號峰、30 號峰和 35號峰分離變差就減小流速，通過流速的微調(diào)以找到最 優(yōu)的分離條件。具體調(diào)整方法可查看安譜實驗相關(guān)的單頁“37種脂肪酸甲酯分離的小秘密，你知道嗎？”。

\ 外標(biāo)法檢測有哪些需要注意？/

如標(biāo)準(zhǔn)截圖所示，外標(biāo)法使用脂肪酸甘油三酯作為標(biāo)準(zhǔn)品，但需要將脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過酯交換轉(zhuǎn)變?yōu)橹舅峒柞ド蠙C檢測，不可直接將脂肪酸甘油三酯直接上機檢測，也不可使用脂肪酸甲酯作為外標(biāo)進行定量計算。

上圖為外標(biāo)法計算公式，可以看出，外標(biāo)法是直接計算樣品中脂肪酸的含量，不需要計算脂肪酸甲酯的含量。通過脂肪酸甘油三酯的單點外標(biāo)法進行計算，計算結(jié)果主要與脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度、脂肪酸甲酯的峰面積和脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的系數(shù)有關(guān)。脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的選擇可根據(jù)實際樣品中脂肪酸的含量進行優(yōu)化調(diào)整，使其盡量接近樣品中含量。