前言

實(shí)驗(yàn)部分

試劑及標(biāo)準(zhǔn)品配置

乙腈（HPLC級）；三氟乙酸（HPLC級）；

牛乳鐵蛋白（編號：CDAA-200251）

● 磷酸鹽緩沖液Ⅰ：稱取7.1 g磷酸氫二鈉、58.4 g氯化鈉，加900 mL水溶解，用磷酸調(diào)pH至8.0±0.2，加水定容至1000 mL，臨用現(xiàn)配。

● 磷酸鹽緩沖液Ⅱ：稱取28.4 g磷酸氫二鈉，加800 mL水溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.5±0.2，再加入20 mL乳鐵蛋白結(jié)合液A，加水稀釋至1000 mL。

Tip：使用磷酸鹽緩沖液來配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液和稀釋待測樣品，提取其中乳鐵蛋白。這一步的原理是乳鐵蛋白在適當(dāng)?shù)膒H值和離子強(qiáng)度條件下具有良好的溶解性。而磷酸氫二鈉可以通過調(diào)節(jié)溶液的pH值和離子強(qiáng)度，有助于乳鐵蛋白從食品基質(zhì)（如牛乳、乳粉等）中溶解出來。在提取過程中，磷酸氫二鈉提供的緩沖環(huán)境能夠保護(hù)乳鐵蛋白不受酸堿變化的影響，從而保持其穩(wěn)定性和生物活性。提取后的離心操作，將溶解了乳鐵蛋白的緩沖液與食品基質(zhì)中的不溶物分離，以便后續(xù)純化和檢測。

結(jié)果

結(jié)論

實(shí)驗(yàn)總結(jié)

● 乳鐵蛋白結(jié)合液A放置時間過長可能會出現(xiàn)沉淀，使用前搖勻即可。

● 配制磷酸鹽緩沖液Ⅱ時，調(diào)pH前的溶液pH值應(yīng)在9.00以上，否則提取效率會降低。調(diào)完pH后加乳鐵蛋白結(jié)合液A然后定容，定容后混勻即可，不需要劇烈攪拌；

● 首次使用ChromCore 300 C4-T色譜柱時，可能會出現(xiàn)色譜峰型不對稱或響應(yīng)低的情況，此時需要使用高濃度牛乳鐵蛋白對照品（400 μg/mL進(jìn)樣100 μL）對色譜柱進(jìn)行鈍化處理，鈍化后將色譜柱沖洗至無牛乳鐵蛋白的目標(biāo)峰后，再進(jìn)行樣品分析；

● 因?yàn)榈鞍自贑4分析柱上會有一定殘留，建議在做柱容量測試后，空針進(jìn)樣兩次把蛋白殘留降低后再進(jìn)行后續(xù)測試

● 色譜柱使用結(jié)束后，需用純乙腈沖洗30 min對色譜柱進(jìn)行保存，保證下次色譜柱可以正常使用。

寫在最后

檢測乳鐵蛋白含量的實(shí)驗(yàn)并不復(fù)雜，但是也是食品安全防線中的一部分。除了乳鐵蛋白的檢測，賽里安還有多種產(chǎn)品和方案用于食品科學(xué)研究，這些產(chǎn)品方案在默默守護(hù)健康安全的餐桌的同時，也不斷助力食品科學(xué)的發(fā)展。

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