【概述】國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)今年3月發(fā)布了《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》(GB2760-2024)等47項(xiàng)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和6項(xiàng)修改單的公告(2024年第1號(hào)),其中包含了GB 5009.299-2024食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中乳鐵蛋白的測(cè)定。新的標(biāo)準(zhǔn)于2024年2月8日發(fā)布，2024年8月8日開(kāi)始實(shí)施。乳鐵蛋白是轉(zhuǎn)鐵蛋白家族中的一種鐵結(jié)合糖蛋白，乳鐵蛋白存在于人體的乳汁和各種分泌液中，在母乳中含量zui高，初乳中含量非常高的核心免疫功能蛋白。它能與病原微生物競(jìng)爭(zhēng)鐵源，抵御病原微生物侵襲，從而保護(hù)嬰幼兒免疫損傷。肝素親和柱能夠特異性的純化樣品中的乳鐵蛋白，樣品前處理后，通過(guò)親和柱凈化，乳鐵蛋白特異性吸附在親和柱上，用淋洗液將親和柱上的雜質(zhì)除去，用洗脫液通過(guò)分離柱，將乳鐵蛋白從親和柱上分離下來(lái)，zui后，將洗脫液注入HPLC或LC-MS進(jìn)行測(cè)定。

【使用對(duì)象】

本方法適用于巴氏殺菌乳，調(diào)制乳，含乳飲料，調(diào)制乳粉，乳基嬰幼兒配方食品等。

【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】

高效液相色譜

色譜柱：Cloversil XB-C4, 5μm, 300?, 4.6×250mm

流速：1.0 mL/min

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，280nm

進(jìn)樣體積：50uL

流動(dòng)相：0.1%三氟乙酸與乙腈梯度洗脫，見(jiàn)下表

柱溫：30℃

【實(shí)驗(yàn)溶液制備】

洗脫液（磷酸鹽緩沖液Ⅰ）：將肝素洗脫液固體試劑包（貨號(hào)：C3012）用250mL純水溶解，混勻，配制于潔凈密封的試劑瓶中，保質(zhì)期6個(gè)月。

磷酸鹽緩沖液Ⅱ：將肝素磷酸鹽緩沖液Ⅱ固體試劑包（貨號(hào)：C3010）用1000mL純水溶解，混勻，配制于潔凈密封的試劑瓶中，保質(zhì)期1個(gè)月。

【樣品提取】

1、液體奶樣品：(巴氏殺菌乳、調(diào)制乳、含乳飲料）

稱取 5g (精確至0.01g )試樣于燒杯中,加入適量磷酸鹽緩沖液Ⅱ 提取，分次將樣品轉(zhuǎn)移至 25mL容量瓶,用磷酸鹽緩沖液Ⅱ 定容至刻度，充分混勻后轉(zhuǎn)入離心管，在 4 ℃ 條件下 10000r / min 離心8min ,取樣液待凈化。

2、固體樣品：（嬰幼兒配方奶粉、乳粉等）

稱取 1g~5g (精確至 0.01g )試樣于燒杯中，加入溫?zé)?溫度不超過(guò) 50℃ )的磷酸鹽緩沖液Ⅱ，攪拌使樣品溶解，冷卻至室溫，分次將樣品轉(zhuǎn)移至 50mL 容量瓶并用磷酸鹽緩沖液Ⅱ 定容至刻度，充分混勻后轉(zhuǎn)入離心管中，取 40.0mL 溶液在 4℃條件下 10000r / min 離心 8min，取樣液待凈化。

【實(shí)驗(yàn)/操作方法】

親和柱凈化程序：

      肝素親和柱（貨號(hào)：IAC323）

（1）活化：將10mL玻璃注射器連接于親和柱上端，放掉柱管保護(hù)液，加入5.0mL 磷酸鹽緩沖液Ⅱ 活化。

（2）上樣：準(zhǔn)確移取  10. 0mL 上述樣液過(guò)柱，控制流速在1mL / min~3mL / min，待樣液滴完

（3）淋洗：用 10.0mL 磷酸鹽緩沖液Ⅱ 淋洗，棄去流出液

（4）洗脫：用5.0mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ 洗脫，收集洗脫液并用磷酸鹽緩沖液Ⅰ定容至5.0mL，過(guò)0.45μm水相針頭濾器，供上機(jī)檢測(cè)分析用。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果/結(jié)論】

實(shí)驗(yàn)圖譜及數(shù)據(jù)：

高效液相色譜儀檢測(cè)乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（400ppm)譜圖如下：

添加回收實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：

【儀器/耗材清單】

親和柱配置清單

需要準(zhǔn)備的設(shè)備及試劑（中檢維康提供）

標(biāo)簽：食品添加劑