一、雞α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)原理

　　雞α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)elisa試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)。往預(yù)先包被雞α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，計(jì)算樣品濃度。

　　二、雞α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

　　1、優(yōu)點(diǎn)明顯 眾所周知產(chǎn)品具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)決定的產(chǎn)品好壞，我司產(chǎn)品具有穩(wěn)定的重復(fù)性，吸附性能好,空白值低，并適用于血清血漿 組織勻漿等多種樣本類型的檢測(cè)，方法簡(jiǎn)單，操作方便，限度的節(jié)省了實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

　　2、品質(zhì)保障 產(chǎn)品保證質(zhì)量，出庫(kù)質(zhì)檢把控嚴(yán)格，保障提供給客戶的100%是優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，運(yùn)輸全程跟蹤，公司承諾有任何質(zhì)量問(wèn)題包退換，誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)，合作共贏。

　　3、專業(yè)定制 應(yīng)市場(chǎng)需求公司特推出專業(yè)定制elisa試劑盒服務(wù)，全程有專業(yè)的技術(shù)老師跟蹤并和客戶保持溝通，直到定制成功為止。

　　4、免費(fèi)代測(cè) 公司承諾訂購(gòu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒，享全程技術(shù)指導(dǎo)并可免費(fèi)代測(cè)，為您分憂。全程有專業(yè)技術(shù)老師負(fù)責(zé)代測(cè)，收到樣本一般7個(gè)工作日出結(jié)果。

　　5、服務(wù)周到 設(shè)立售后服務(wù)中心，24小時(shí)及時(shí)響應(yīng)，真正做到后顧無(wú)憂，不斷完善服務(wù)體系。

　　三、雞α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)標(biāo)本要求

　　1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

　　2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

　　3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

　　4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

　　6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能人上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

　　7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

　　四、操作步驟

　　1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

　　3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。

　　4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

　　五、注意事項(xiàng)

　　1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　2.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。

　　3.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔di一孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　5.底物請(qǐng)避光保存。

　　6.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　7.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　8.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

　　9.不能使用過(guò)期產(chǎn)品。

　　10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

　　七、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

　　以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。