酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。

基本原理

采用抗原與抗體的特異反應(yīng)連接特異反應(yīng)將待測物與酶，之后通過底物和酶發(fā)生顏色反應(yīng)，從而用來定量測定。測定的對象既可以是抗體又可以是抗原。

在這種測定的方法中包括酶作用的底物（顯色劑）、固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）以及酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）3種必要的試劑。

在測量的時(shí)候，首先在固相載體上結(jié)合抗原（抗體），然而它的免疫活性仍然會(huì)保留。之后將一種抗體（抗原）與酶結(jié)合，使得偶聯(lián)物（標(biāo)記物）形成，它的原來的酶活性和免疫活性依然保留。當(dāng)固相載體上的抗原（抗體）和偶聯(lián)物結(jié)合后，再和酶的相應(yīng)底物反應(yīng)而顯色。

其所生成的顏色深淺和欲測的抗原（抗體）含量正相關(guān)?？梢允褂萌庋邸⒐鈱W(xué)顯微鏡、電子顯微鏡對這種有色產(chǎn)物進(jìn)行觀察，也可以使用分光光度計(jì)測定這種有色產(chǎn)物。它具有簡單快速的操作和很強(qiáng)的特異性。

特點(diǎn)

特異性強(qiáng)

抗體或抗原的選擇性是其特異性的來源。實(shí)質(zhì)上，只在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間發(fā)生抗原抗體的結(jié)合。因?yàn)樵诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上兩者呈互補(bǔ)關(guān)系，因此抗原抗體反應(yīng)的特異性非常的高。

靈敏性高

作為報(bào)告基團(tuán)的酶為該測定法的靈敏度的來源。大家都知道，酶是一種有機(jī)催化劑，大量的催化反應(yīng)均可以通過很少量的酶就能夠被誘導(dǎo)，從而使可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象產(chǎn)生。所以該體系通常被叫做酶放大體系。ELISA使得細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進(jìn)行定量實(shí)現(xiàn)了。

分類

該法由種類和變化可分為以下幾種：

（一）雙位點(diǎn)一步法

（二）捕獲法測IgM抗體

（三）應(yīng)用親和素和生物素的ELISA

（四）雙抗體夾心法

（五）間接法

（六）競爭法