雌性激素（Estrogen），又稱女性激素，是一類主要的女性荷爾蒙。分為兩大類（均為類固醇激素），即雌激素和孕激素。雌性激素是雌性脊椎動物的性激素，具有促進第二性征出現(xiàn)的作用。過高的雌性激素會對男性的生殖系統(tǒng)產(chǎn)生明顯影響，包括影響雄性激素的水平，導(dǎo)致內(nèi)分泌紊亂，同樣過高的雌激素會增大女性生病的概率，也會對青春期的孩子發(fā)育造成影響，故找到一種快捷高效的檢測方法尤為重要。

本實驗參考《GB 31660.2-2019 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 水產(chǎn)品中辛基酚、壬基酚、雙酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法》，利用GPC1000全自動凝膠凈化系統(tǒng)對樣品提取液進行凈化，GC-MS進行檢測，方法簡單、快捷，能夠很好地去除干擾物對目標(biāo)物的影響。

關(guān)鍵詞：

水產(chǎn)品；雌激素；凝膠凈化

1.1 儀器與試劑

GPC1000全自動凝膠凈化系統(tǒng)（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）；

MVP 全自動高通量真空平行濃縮儀，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

氣質(zhì)聯(lián)用儀：7890B-5977B，安捷倫科技（中國）有限公司；

S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm，貨號：Y020207015），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

冷凍離心機，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學(xué)儀器廠；

甲醇、環(huán)己烷、乙酸乙酯（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

碳酸鈉（分析純），購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

1.2 工作液配制

混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲備液適量于10mL容量瓶中，甲醇定容，配成濃度為雙酚A50μg/L，已烯雌酚100μg/L，雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇200μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液50μL、100μL、200μL、500μL、1000μL于1.5mL樣品瓶中，40℃氮吹至干，按1.3.3方法衍生，制成雙酚A濃度均為2.5μg/L、5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L的梯度系列，已烯雌酚濃度均為5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L的梯度系列，雌酮17a-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇濃度均為10μg/L、20μg/L、40μg/L、100μg/L、200μg/L的梯度系列標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品制備

將水產(chǎn)品樣品均質(zhì)，稱取5.0g樣品，加入3mL100g/L的碳酸鈉溶液，加入20mL乙酸乙酯，超聲15min，5000r/min離心4min，取上清液，加入10mL乙酸乙酯復(fù)提，合并上清液后，40℃旋蒸至近干，加入8mL50%環(huán)己烷乙酸乙酯溶液復(fù)溶，混勻，待凝膠凈化處理；同時做樣品空白。

1.3.2 凝膠凈化處理

按照下圖所示的方法進行GPC1000方法編輯，并加載方法到相應(yīng)通道，進行樣品的凝膠凈化。收集洗脫液，40℃氮氣吹干，待衍生。

1.3.3 衍生化

在1.3.2中的濃縮瓶中加入200μL丙酮，加入30μL七氟丁酸酐，用錫箔紙封口，在35℃水浴中衍生1h，用正己烷定容至1.0mL待測。

1.3.4 GC-MS 檢測條件

色譜柱：HP-5MS 30m*0.25mm* 0.25μm

進樣口溫度：250℃，流速：1mL/min

不分流進樣，1min后分流60mL/min

進樣量：1μL

柱箱：120℃，保持2min，以15℃/min升至250℃，以5℃/min升至 300℃，保持5min

溶劑延遲：8.5min

離子源溫度：230℃

四極桿溫度：150℃

傳輸線溫度：280℃。

表1 水產(chǎn)品中雌激素的回收率

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖2 空白樣品色譜圖

圖3 加標(biāo)樣品色譜圖

本次實驗展示了一種使用S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm，貨號：Y020207015），對水產(chǎn)品中的雌激素測定的凈化，回收率在70.5%~110.5%之間，重現(xiàn)性RSD為3.9-8.1%，回收率高、重現(xiàn)性良好，說明S-X3不銹鋼凝膠凈化柱，適用于水產(chǎn)品中的雌激素測定的凈化，并且結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

[1] GB 31660.2-2019 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 水產(chǎn)品中辛基酚、壬基酚、雙酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法