阿托伐他汀是全球范圍內(nèi)使用最廣泛的處方藥之一，用于控制高膽固醇血癥等疾病、降低心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)，是數(shù)百萬(wàn)患者的首選藥物。然而，該藥物中可能存在的微量毒性雜質(zhì)會(huì)威脅到患者的安全，這就要求我們?cè)谒幬锷a(chǎn)過(guò)程中對(duì)雜質(zhì)控制保持高度警惕。

這種分析方法與Empower CDS軟件相輔相成，使雜質(zhì)分析過(guò)程更加簡(jiǎn)便、高效，確保數(shù)據(jù)合規(guī)性、完整性。

與《European Pharmacopoeia》相關(guān)專(zhuān)欄提出的方法不同，本分析方法考慮到四氫呋喃（THF）具有毒性和不穩(wěn)定性，沒(méi)有使用THF作為流動(dòng)相的一部分，而是在水性流動(dòng)相中加入醋酸銨緩沖液，在有機(jī)流動(dòng)相中加入甲酸，以降低整個(gè)樣品運(yùn)行過(guò)程中的pH值并改善峰形。

本方法比《European Pharmacopoeia》專(zhuān)欄方法縮短了約60分鐘，每次進(jìn)樣使用的溶劑量不到10%。

盡管大多數(shù)文獻(xiàn)方法都選擇了C18色譜柱，但事實(shí)證明CSH苯基己基色譜柱是提高阿托伐他汀化合物與相關(guān)雜質(zhì)C分離度的更優(yōu)選擇。色譜柱溫度設(shè)置為30 ℃，以削弱原料藥的峰尾現(xiàn)象。

03

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

高靈敏度與精確度

準(zhǔn)確測(cè)定已知雜質(zhì)相對(duì)于原料藥的濃度，且對(duì)三種不同的未知雜質(zhì)也均分別進(jìn)行了定量，相對(duì)濃度為0.11%、0.14%和1.15%。

圖1.加標(biāo)阿托伐他汀樣品（25 μg/mL）的PDA色譜圖。

通過(guò)使用分流閥，雜質(zhì)A和C可以在MS TIC色譜圖中更清晰地顯示出來(lái)。

圖2.MS TIC色譜圖使用分流閥定量分析雜質(zhì)A [m/z 541.1] 和雜質(zhì)C [m/z 557.1]。

圖3.阿托伐他汀原料藥在0.01-5.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)的校準(zhǔn)曲線。

對(duì)選定的阿托伐他汀相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行了線性和靈敏度評(píng)估。所有情況下的R2值均超過(guò)0.998，殘差率均小于16.3%。所有校準(zhǔn)反應(yīng)均為線性（1/X 加權(quán)）。

表1.雜質(zhì)A、C和I的校準(zhǔn)結(jié)果摘要。

盡管注入的原料藥濃度可高達(dá)75 μg/mL，但在隨后的空白進(jìn)樣中沒(méi)有出現(xiàn)攜帶現(xiàn)象。

圖4.雜質(zhì)A在0.01-1.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)的校準(zhǔn)曲線。

相比PDA曲線，MS TIC色譜圖更清晰地顯示了另外一種未知雜質(zhì) - 未知雜質(zhì)4的存在。且通過(guò)疊加空白樣品，表明MS TIC色譜圖中的未標(biāo)記峰并非API樣品獨(dú)有。

圖5.加標(biāo)（0.12%）阿托伐他汀原料藥樣品（75 μg/mL）的疊加PDA色譜圖（A）和MS TIC色譜圖（B）。

• 使用ACQUITY QDa II質(zhì)譜檢測(cè)器可以輕松獲得色譜圖中每個(gè)峰的質(zhì)譜：

圖6.阿托伐他汀和阿托伐他汀相關(guān)雜質(zhì)在1 μg/mL濃度下的質(zhì)譜圖。

• 源內(nèi)碎片分析幫助確定未知雜質(zhì)結(jié)構(gòu)：

對(duì)未知雜質(zhì)2的m/z 451.2前體離子施加50 V錐孔電壓，可產(chǎn)生m/z 422的碎片（圖 7A）。這種碎片模式與去氟阿托伐他汀和相關(guān)雜質(zhì)H相匹配。m/z 422后出現(xiàn)的m/z 380碎片表明該化合物更有可能是相關(guān)雜質(zhì)H。

圖7.未知雜質(zhì)2(A)和未知雜質(zhì)3(B)的質(zhì)譜圖，圖中各部分下方顯示了可能的雜質(zhì)剖面和碎片模式。

圖8.阿托伐他汀雜質(zhì)A在制備樣品15天后的質(zhì)譜比較。

若采用傳統(tǒng)紫外色譜法，則會(huì)觀察到雜質(zhì)A的相對(duì)含量似乎有所增加，得出錯(cuò)誤結(jié)論。然而這種差異并不是雜質(zhì)A的濃度變化導(dǎo)致，而是因?yàn)殡S著原料藥的降解，一種與雜質(zhì)A發(fā)生共洗脫的化合物的量增加。

圖9.加標(biāo)（0.12%）阿托伐他汀原料藥樣品（75 μg/mL）的紫外色譜圖與MS TIC圖像對(duì)比。

可重復(fù)性與穩(wěn)定性

基本所有雜質(zhì)%RSD都小于9%。

表2.加標(biāo)（0.12%）阿托伐他汀原料藥樣品（75 μg/mL）的[254 nm，4.8 mm]PDA痕量中定量峰的相對(duì)面積百分比，連續(xù)重復(fù)n=10次。

Empower CDS數(shù)據(jù)報(bào)告功能

圖10.Empower CDS生成的數(shù)據(jù)報(bào)告示例，用于分析添加了0.12%雜質(zhì)A、C和I以及其他未知雜質(zhì)的75 μg/mL阿托伐他汀樣品。

后記

ACQUITY QDa Ⅱ質(zhì)譜檢測(cè)器是希望改進(jìn)現(xiàn)有分析或純化工作流程、以改善醫(yī)療保健、環(huán)境、食品和水源或新材料生產(chǎn)的QC實(shí)驗(yàn)室的理想選擇。它能借助穩(wěn)定的光學(xué)檢測(cè)器覆蓋更多樣品，并降低小分子和大分子以及新型藥物中存在任何未檢出組分的風(fēng)險(xiǎn)，在分析和純化工作流程中盡可能多地獲取樣品信息。

ACQUITY QDa Ⅱ質(zhì)譜檢測(cè)器的可疊放系統(tǒng)不僅無(wú)需額外的工作臺(tái)空間，也不需要專(zhuān)門(mén)的培訓(xùn)，從而降低維護(hù)成本、大幅延長(zhǎng)系統(tǒng)運(yùn)行時(shí)間，提升整體生產(chǎn)效率。使用過(guò)程中也無(wú)需針對(duì)特定樣品進(jìn)行調(diào)整，可實(shí)現(xiàn)質(zhì)譜儀不間斷的運(yùn)行。

在方法開(kāi)發(fā)工作流程中增加質(zhì)譜檢測(cè)，可快速追蹤峰并獲得可靠的峰純度，讓您對(duì)分離的穩(wěn)定性充滿(mǎn)信心。