第一支為小膠質(zhì)細(xì)胞，胚胎期即由卵黃囊定植，終身自我更新，是腦實(shí)質(zhì)最豐富的固有免疫細(xì)胞；其通過(guò)突觸修剪、細(xì)胞碎片清除及代謝感知，調(diào)控神經(jīng)元可塑性與血腦屏障完整性。第二支為腦邊界相關(guān)巨噬細(xì)胞（BAMs），包括腦膜、血管周圍及脈絡(luò)叢巨噬細(xì)胞，出生后由骨髓單核細(xì)胞持續(xù)補(bǔ)充，分布于血-腦界面，負(fù)責(zé)監(jiān)測(cè)病原體、維持腦脊液免疫監(jiān)視并調(diào)節(jié)血管通透性。在阿爾茨海默病、腦缺血或腫瘤等病理狀態(tài)下，外周單核細(xì)胞進(jìn)一步浸潤(rùn)，轉(zhuǎn)化為疾病相關(guān)巨噬細(xì)胞（DAM 或 TAM），與小膠質(zhì)細(xì)胞協(xié)同或拮抗，放大神經(jīng)炎癥、促進(jìn)斑塊清除或支持腫瘤微環(huán)境。因此，大腦-巨噬細(xì)胞軸既是神經(jīng)保護(hù)的“守門人”，也是神經(jīng)退行性病變及腫瘤免疫治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

前面我們已經(jīng)介紹了巨噬細(xì)胞清除劑（Clodronate Liposomes）在清除肝臟、肺部、腸道巨噬細(xì)胞的應(yīng)用情況，今天我們來(lái)分享下使用巨噬細(xì)胞清除劑（Clodronate Liposomes）清除腦部巨噬細(xì)胞的相關(guān)文章及方法。

文章來(lái)源：CXCL12-mediated monocyte transmigration into brain perivascular space leads to neuroinflammation and memory deficit in neuropathic pain (IF=13.3,Q1)

巨噬細(xì)胞清除方法：于假手術(shù)或 SNI 手術(shù)前一天及術(shù)后第三天，經(jīng)尾靜脈注射氯膦酸鹽脂質(zhì)體（劑量 15 mL/kg），以耗竭循環(huán)中的單核細(xì)胞2?。對(duì)照小鼠在相同時(shí)間點(diǎn)注射 PBS。通過(guò)外周血流式細(xì)胞術(shù)及海馬免疫熒光染色，評(píng)估氯膦酸鹽在正常小鼠中耗竭單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的效率。

結(jié)果分享：首次注射 CLL 后 18 小時(shí)，通過(guò)外周血流式細(xì)胞術(shù)（FC）及腦組織免疫熒光（IF）驗(yàn)證其對(duì)單核細(xì)胞的清除效果。術(shù)后第 9 天，采用新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)（NORT）評(píng)估短期記憶（STM）指數(shù)，并進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)。與既往研究一致，氯膦酸鹽注射在 na?ve 小鼠注射后第1天即可清除絕大多數(shù)經(jīng)典單核細(xì)胞（CMo，CD11b?Ly6C^high）和非經(jīng)典單核細(xì)胞（NCMo，CD11b?Ly6C?），但不影響包括NK細(xì)胞和中性粒細(xì)胞在內(nèi)的淋巴細(xì)胞。

文章來(lái)源：B cell treatment promotes a neuroprotective microenvironment after traumatic brain injury through reciprocal immunomodulation with infiltrating peripheral myeloid cells (IF=10.1,Q1)

巨噬細(xì)胞清除方法：選用8至12周齡雄性C57Bl6/J小鼠。受體小鼠靜脈注射10 μL/g體重的氯膦酸鹽脂質(zhì)體。對(duì)照動(dòng)物接受相同劑量的PBS脂質(zhì)體空白對(duì)照。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析在多個(gè)組織中驗(yàn)證單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞耗竭。

結(jié)果分享：

使用氯膦酸鹽脂質(zhì)體的靜脈內(nèi)給藥來(lái)特異性消耗高度吞噬的 CD45^hiCD11b^hi單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞，并證實(shí)全身耗竭轉(zhuǎn)化為在CCI后48小時(shí)浸潤(rùn)大腦的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞數(shù)量豐度明顯減少約90%（圖7B，C）。

文章來(lái)源：Immunoregulatory and neutrophil-like monocyte subsets with distinct single-cell transcriptomic signatures emerge following brain injury (IF=10.1,Q1)

巨噬細(xì)胞清除方法：小鼠經(jīng)尾靜脈注射200 μL氯膦酸鹽脂質(zhì)體（Cl-LPM）或 PBS對(duì)照脂質(zhì)體（Control LPM），以及Dil標(biāo)記脂質(zhì)體（Dil-LPM），注射時(shí)間點(diǎn)為CCI或假手術(shù)前4天和1天。為定量Dil-LPM的攝取情況，制備血涂片，通過(guò)熒光與明場(chǎng)顯微鏡評(píng)估Dil標(biāo)記的白細(xì)胞百分比。

結(jié)果分享：

在假手術(shù)或CCI損傷小鼠中，分別注射PBS-脂質(zhì)體（PBS-LPMs）或氯膦酸鹽-脂質(zhì)體（Cl-LPMs）后，檢測(cè)CD45?/CD11b?/Ly6G?/CD115?細(xì)胞群。結(jié)果顯示：在未損傷的native小鼠（0 dpi）中，Cl-LPM注射使Ly6G?細(xì)胞百分比較對(duì)照PBS-LPM小鼠減少約40%；在這些Ly6G?細(xì)胞中，CD115?單核細(xì)胞比例較對(duì)照組（33.8 ± 4.3%）下降約85%，僅為5.5 ± 0.5%，且其絕對(duì)數(shù)量也相應(yīng)減少（圖2，B和C）。

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