睪丸巨噬細胞（testicular macrophages, tMΦ）是睪丸間質中數(shù)量最多的免疫細胞，約占間質細胞20%，與Leydig細胞緊密相鄰，形成細胞質交錯結構，被視為“生育力的守護者”。近年單細胞譜系研究將其分為兩個亞群：胚胎期即定植的卵黃囊來源“間質tMΦ”和出生后兩周才遷入的骨髓來源“管周tMΦ”。前者高表達IL-10，維持局部免疫抑制并促進睪酮合成；后者呈MHCII?，負責抗原呈遞與調節(jié)性T細胞互作，協(xié)助清除精子發(fā)生過程中逸出的自身抗原，鞏固免疫豁免。睪丸巨噬細胞還分泌25-羥膽固醇、M-CSF和視黃酸等因子，直接刺激Leydig細胞甾體生成并支持精原干細胞增殖與分化。耗竭模型顯示，tMΦ缺失可使睪酮下降50%，精子發(fā)生早期阻滯，證明其在內分泌和生殖功能中的雙重樞紐地位。

文章來源：Functional and phenotypic characteristics of testicular macrophages in experimental autoimmune orchitis (IF=5.2,Q1)

巨噬細胞清除方法：

使用50–60日齡的雄性Sprague–Dawley大鼠。預實驗顯示，用30 G針頭經睪丸白膜下直接注射PBS脂質體會造成睪丸實質損傷，因此后續(xù)實驗均改為腹腔（i.p.）給藥。免疫組大鼠自免疫第0天起，每隔2–3天腹腔注射 2 ml Clodronate Liposomes（Clod-Lip，n = 12）或PBS脂質體對照（PBS-lip，n = 15），直至首次免疫后第50–60天處死。

結果分享：

免疫過氧化物酶染色顯示，經睪丸組織和佐劑免疫、并分別注射PBS脂質體（A、C）或含氯膦酸鹽脂質體（B、D）的大鼠睪丸切片中，ED1+（A、B）和ED2+（C、D）睪丸巨噬細胞的定位。睪丸中ED1+和ED2+巨噬細胞數(shù)量顯著減少。

文章來源：Pituitary-testicular axis in rats lacking testicular macrophages (IF=5.2,Q1)

巨噬細胞清除方法：
實驗選用成年雄性Wistar大鼠。用30 G針頭在短暫乙醚麻醉下，向大鼠雙側睪丸內各注射150 μL巨噬細胞清除劑、PBS-脂質體（PBS-lp）或0.9% NaCl（每組15只）。分別于處理后第0、5、10與15天經頸靜脈穿刺采血，血清置–20 °C保存，待測FSH、LH 與睪酮。第15天處死動物，取出睪丸與附性腺器官稱重并做組織學檢查。每組另取5只大鼠，于處死前48 h腹腔注射2 ml 3%臺盼藍生理鹽水，以標記睪丸巨噬細胞。

結果分享：

圖為處理后第15天，NaCl處理組（A）與巨噬細胞清除劑處理組（B）大鼠睪丸代表性間質區(qū)。光鏡下，NaCl或PBS-lp注射組動物巨噬細胞胞質內充滿臺盼藍陽性空泡，清晰可辨；Leydig細胞及曲細精管結構正常（圖1A）。巨噬細胞清除劑處理組大鼠巨噬細胞缺失（圖1B），僅個別動物偶見，數(shù)量不足正常值的2%（巨噬細胞清除劑組：7±5；PBS-lp組：430±16；NaCl組：418±32個/mm2間質，mean±SEM，N=5）。除此之外，Leydig細胞及生精上皮結構保持正常（圖1B）。

文章來源：The human chorionic gonadotrophin-induced inflammation-like response is enhanced in macrophage-depleted rat testes (IF=3.9,Q2)

巨噬細胞清除方法：
為清除睪丸巨噬細胞，成年雄性 Wistar 大鼠 在右側睪丸內注射 150 μl 含 Cl?MDP（二氯亞甲基二膦酸）的脂質體（Clodronate Liposomes），使用 30 G 針頭；左側睪丸注射等量0.9% NaCl作為對照。注射后 第10天，腹腔注射 EDS（75 mg/kg） 誘導 Leydig 細胞凋亡，觀察清除巨噬細胞后的組織反應。

結果分享：

圖5A：巨噬細胞缺失側（Cl?MDP）淋巴細胞數(shù)量激增13倍（12 h峰值），對照側僅2倍。
圖5B：巨噬細胞數(shù)量在右側始終接近零，左側在24–72 h升高2倍。
圖5C：Leydig細胞清除效率兩側一致（24 h內完全消失），說明吞噬功能由浸潤單核細胞代償。

Figure 2a–b：幼年大鼠注射巨噬細胞清除劑后，巨噬細胞幾乎完全消失，Leydig 細胞數(shù)量減少約 50%，但細胞大小不變。Figure 3A–C：巨噬細胞清除劑處理組幼年大鼠巨噬細胞數(shù)量顯著減少，Leydig 細胞數(shù)量顯著減少。

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