人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒使用說明書

　　BS-0081人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒

　　人L-Selectin/CD62L ELISA試劑盒

　　。

　　二、檢測原理

　　采用夾心法ELISA技術(shù)：

　　包被抗體：預(yù)包被的L-Selectin多克隆抗體捕獲樣本中的目標(biāo)蛋白。

　　生物素標(biāo)記抗體：特異性結(jié)合捕獲的L-Selectin。

　　ABC復(fù)合物：通過生物素-親和素放大信號。

　　顯色反應(yīng)：TMB底物在過氧化物酶催化下顯色，顏色深淺與L-Selectin濃度成正比。

　　三、操作步驟

　　1. 樣本準(zhǔn)備

　　血清/血漿：離心后取上清，避免溶血。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清/裂解液：離心去除顆粒，建議稀釋后檢測。

　　2. 標(biāo)準(zhǔn)品制備

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品用1mL樣品稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋(62.5-4000pg/mL)。

　　3. 加樣與孵育

　　每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育2小時。

　　棄去液體，洗滌3次(每次200μL PBS)。

　　加入100μL生物素標(biāo)記抗體(1:100稀釋)，37℃孵育1小時。

　　洗滌后加入100μL ABC復(fù)合物(1:100稀釋)，37℃避光孵育30分鐘。

　　4. 顯色與終止

　　每孔加入90μL TMB顯色液，避光反應(yīng)15-20分鐘。

　　加入50μL終止液(黃色→藍(lán)色)，立即檢測。

　　5. 結(jié)果分析

　　酶標(biāo)儀450nm讀數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本濃度。

　　四、注意事項

　　樣本處理：避免反復(fù)凍融，血漿樣本需使用EDTA抗凝。

　　試劑平衡：所有試劑使用前需恢復(fù)至室溫(25℃)。

　　洗滌徹底：洗滌不充分會導(dǎo)致背景升高。

　　安全防護(hù)：TMB和終止液具腐蝕性，需戴手套操作。

　　五、性能參數(shù)

　　檢測范圍：62.5-4000pg/mL

　　靈敏度：<5pg/mL

　　特異性：與其他選擇素?zé)o交叉反應(yīng)。

　　六、常見問題

　　信號弱：可能因樣本稀釋過度或孵育時間不足，建議優(yōu)化樣本濃度或延長孵育。

　　高背景：可能因洗滌不徹底或試劑污染，需嚴(yán)格按步驟操作。

　　注：以上僅供參考，科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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