人P選擇素(P-Selectin)ELISA試劑盒說明書

　　一、產品概述 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液或其它相關生物液體中人P選擇素的含量。P選擇素作為一種重要的細胞粘附分子，在炎癥、血栓形成等生理和病理過程中起著關鍵作用。本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、操作簡便、結果準確等特點，適用于科研、臨床等領域的研究和診斷。

　　二、試劑組成

　　1. 微孔板：預包被人P選擇素抗體的96孔板

　　2. 標準品：凍干人P選擇素標準品

　　3. 酶標抗體：辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗人P選擇素抗體

　　4. 樣品稀釋液：用于稀釋待測樣品的緩沖液

　　5. 顯色劑A：四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物溶液

　　6. 顯色劑B：過氧化氫(H?O?)溶液

　　7. 終止液：硫酸溶液，用于終止顯色反應

　　8. 洗滌液：含Tween-20的磷酸鹽緩沖液(PBS-T)

　　三、實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。在微孔板中預包被人P選擇素抗體，形成固相抗體。在檢測時，加入標準品或待測樣品，樣品中的人P選擇素與固相抗體結合，形成固相抗原-抗體復合物。隨后加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗人P選擇素抗體，與固相抗原-抗體復合物結合，形成固相抗原-抗體-酶標抗體復合物。加入顯色劑，在HRP的催化下，TMB底物溶液發(fā)生顏色反應，呈現(xiàn)藍色。加入終止液后，顏色由藍色變?yōu)辄S色，顏色的深淺與樣品中人P選擇素的含量呈正比。通過酶標儀測定各孔的光密度(OD值)，根據(jù)標準曲線計算樣品中人P選擇素的含量。

　　四、操作步驟

　　1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為120ng/ml，80ng/ml，40ng/ml，20ng/ml，10ng/ml)。

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

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