Fermentalg 科學家開發(fā)了一種創(chuàng)新的方法，使用 QPix 420 微生物克隆篩選系統(tǒng)（Molecular Devices）篩選和挑取微藻藻株。傳統(tǒng)上，克隆挑選是使用無菌移液管尖端或接種環(huán)手動進行的，這通常是緩慢、勞動密集和耗時的。QPix 420 系統(tǒng)允許高通量克隆挑取，可達 3000 克隆 / h，挑取效率 >98%。多種熒光通道增加了系統(tǒng)靈活性，能夠根據熒光蛋白表達或熒光色素的形態(tài)特征和水平對獨特克隆進行表型篩選。

一旦捕捉到圖像，QPix Fusion 軟件就會根據特征特性對其進行分析，并確定培養(yǎng)板（培養(yǎng)皿、Omnitray 或 QTray）上單個克隆的位置。Fusion 軟件的靈活性允許用戶根據菌落大小、緊湊度、軸比、直徑和最小臨近度等篩選所需的克隆。因此，基于設置的參數，符合的 G.sulphuraria 克隆被包括在內（圖 3，黃色），不符合的被排除在外（圖 3、紅色）。

定量的熒光強度閾值指定了所需的蛋白質表達水平。為了選擇含有最高濃度 C - 藻藍蛋白的克隆，需要調整熒光強度范圍。對于該實驗，選擇產生平均熒光強度（MFI）值在 36000 和 43000 之間的 C - 藻藍蛋白的克?。▓D 4A & B）。一旦根據用戶定義的標準進行選擇，就可以使用 QPix 420 系統(tǒng)準確地挑取克隆。

最后，使用 QPix 420 系統(tǒng)分析了產生不同含量 C - 藻藍蛋白的不同 G.sulphuraria 藻株，以測試 QPix 區(qū)分和選擇高表達 C - 藻藍素克隆的能力，這些克隆在視覺上看起來是深綠色的（圖 5A）。正如預期的那樣，具有低濃度的 C - 藻藍蛋白的克隆在瓊脂平板上呈現(xiàn)白色，而表達平均水平的克隆呈現(xiàn)淺綠色。因此，用 QPix 420 在透射光中對不同克隆進行成像，然后基于 C - 藻藍蛋白熒光強度進行篩選（圖 5B & C）。檢測到深綠色和淺綠色菌落的熒光信號。特別地，基于先前設置的 36000 至 43000 的平均熒光強度值，成功地選擇和挑選了深綠色克隆。最后，熒光成像中白色克隆的消失證實了這些克隆中不存在 C - 藻藍蛋白。

由于對天然和可持續(xù)食品成分的需求增加，食品行業(yè)對微藻的興趣正在上升。Fermentalg 正在利用微藻代謝來開發(fā)和篩選多種能產生低 pH 值和高溫穩(wěn)定的天然藍色色素作為食品成分的 G.sulphuraria 藻株（BLUE ORIGINS）。為了加速該產品的工業(yè)應用，進行了 G.sulphuraria 藻株克隆的自動化篩選。與傳統(tǒng)篩選方法相比，高通量克隆篩選具有顯著優(yōu)勢，包括更快地鑒定所需克隆，從而簡化后續(xù)的下游分析。

QPix 420 微生物克隆篩選系統(tǒng)

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