轉(zhuǎn)染是大部分細胞實驗室都會進行的常規(guī)操作,不過,要想轉(zhuǎn)染效率高,細胞活力好,省事又省力可是不容易。今天,我們走訪了A大的細胞重點實驗室,來聽聽大家對轉(zhuǎn)染的想法~
問題一:
轉(zhuǎn)染過程中遇到Z大的困難是什么?
Z大的困難就是遇到難轉(zhuǎn)染的細胞,比如免疫細胞,原代細胞,干細胞這種,轉(zhuǎn)染效率實在是太低了
我平時轉(zhuǎn)染的細胞類型非常多,不知道怎么針對性的選擇Z適合的轉(zhuǎn)染試劑。
問題二:
對于難轉(zhuǎn)染這個問題,有沒有考慮過使用電轉(zhuǎn)的方法?
當然想過,但是電轉(zhuǎn)想想就很復雜,哪有轉(zhuǎn)染試劑方便易操作呢。
如果電轉(zhuǎn)可以治療我的選擇困難癥,我當然愿意了。
問題三:
理想的電轉(zhuǎn)儀是什么樣的?
操作方便,省時省力排第一
內(nèi)置多種protocol,還能隨時修改各種參數(shù)的,Z適合我這種細胞類型多的了。
可是,真的有這樣的電轉(zhuǎn)儀嗎?
別急,這不就來了嗎?
Neon NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)
Invitrogen? Neon? NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)是新一代電轉(zhuǎn)染平臺,它采用創(chuàng)新設(shè)計,顯著減化了哺乳動物的細胞轉(zhuǎn)染流程。Neon NxT專有的移液器吸頭技術(shù)通過盡可能增加兩個電極之間的距離,同時減小其表面積,保證樣本具有:
更均勻的電場
更少的離子形成
更小的pH變化
可忽略不計的發(fā)熱
從而實現(xiàn)卓越的電轉(zhuǎn)染效率和細胞活力。同時操作簡單,僅需 3 個步驟:吸樣、電轉(zhuǎn)染和分液即可完成。
圖1. Neon NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)
讓我們再回到細胞實驗室,看看在電轉(zhuǎn)實驗中,大家還會遇到哪些問題。
01
場景一:小C用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)染原代細胞,第二天觀察發(fā)現(xiàn),細胞死了一大半,無法進行下游實驗.
分析原因:傳統(tǒng)的比色皿式電轉(zhuǎn)儀,對細胞傷害較大,造成大量細胞死亡。在比色皿中進行電轉(zhuǎn),電場不均勻,pH變化大,加上將細胞移進和移出的過程中,細胞多次經(jīng)受剪切力,導致原本脆弱的細胞更加脆弱,Z終導致細胞死亡。
解決方案:對于脆弱細胞,推薦使用溫和的電轉(zhuǎn)系統(tǒng),如Neon NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。該系統(tǒng)采用專有的電轉(zhuǎn)染吸頭技術(shù),電極間隔較寬,且表面積很小。較小的表面積產(chǎn)生更均勻的電場,并且pH值變化微弱。轉(zhuǎn)染過程中產(chǎn)生的熱量和離子較少,因此細胞生理條件不會受到嚴重干擾。Neon NxT省去了將細胞移進和移出比色皿的步驟,減少細胞受到的剪切力。
02
場景二:小L使用電轉(zhuǎn)儀推薦的電轉(zhuǎn)參數(shù),總是達不到理想的轉(zhuǎn)染效率
分析原因:雖然很多電轉(zhuǎn)儀自帶針對不同細胞系的實驗方案,但是,具體實驗條件千變?nèi)f化,任何微小條件都可能影響實驗結(jié)果,還需要在此基礎(chǔ)上進行參數(shù)優(yōu)化。
解決方案:推薦選擇可以靈活調(diào)節(jié)電轉(zhuǎn)參數(shù)的電轉(zhuǎn)儀,快速微調(diào)特定參數(shù)以優(yōu)化流程。使用 Neon NxT 電轉(zhuǎn)染系統(tǒng),可以精確地控制重要的實驗參數(shù),無需浪費寶貴的時間去調(diào)整不重要的參數(shù)。
使用Neon NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng),您可以獲得:
1
可靠的性能和極佳的細胞活力
專有的電轉(zhuǎn)染吸頭技術(shù),可幫助您自信地轉(zhuǎn)染具有挑戰(zhàn)性的細胞系并保持細胞活力。
圖2. Neon NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)的轉(zhuǎn)染效率。在10 μL或100 μL電轉(zhuǎn)染反應中,采用GFP質(zhì)粒DNA或GFP mRNA轉(zhuǎn)染細胞。轉(zhuǎn)染效率為GFP陽性細胞的百分比(n=3)。注:初始T細胞僅在100 μL反應中進行電轉(zhuǎn)染。
圖3. Neon NxT系統(tǒng)電轉(zhuǎn)染后的細胞活率。在10 μL或100 μL電轉(zhuǎn)染反應中,采用GFP質(zhì)粒DNA或GFP mRNA轉(zhuǎn)染細胞。用Invitrogen? SYTOX?紅色死細胞染色劑對轉(zhuǎn)染細胞進行染色,并在Invitrogen? Attune? NxT流式細胞儀上評估細胞活率。細胞活率(%)以3次測量的平均值報告。注:初始T細胞僅 在100 μL反應中進行電轉(zhuǎn)染。
2
節(jié)省珍貴的樣本
Neon NxT 電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)的電穿孔過程發(fā)生在移液器吸頭內(nèi),而非比色皿內(nèi),盡可能地減少樣本損失和細胞承受的剪切力。
3
節(jié)省研究時間
Neon NxT 系統(tǒng)僅需 3 個簡單的步驟:吸樣、電轉(zhuǎn)染和分液。孔板設(shè)置模式可設(shè)置不同參數(shù)條件,20 分鐘內(nèi)可對24 份樣本進行電轉(zhuǎn)染。
4
靈活易用
采用 Neon NxT 電轉(zhuǎn)染系統(tǒng),可以精確地控制重要的實驗參數(shù),無需浪費寶貴的時間去調(diào)整不重要的參數(shù)。
使用 Thermo Fisher Connect 上 的Invitrogen ? TransfectionLab ?基于云的應用程序優(yōu)化電轉(zhuǎn)染參數(shù),提高生產(chǎn)率和可追溯性。在輸入詳細實驗信息后,將會生成從設(shè)計階段開始為您的實驗量身定制的分步指南。
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