轉(zhuǎn)染是大部分細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室都會(huì)進(jìn)行的常規(guī)操作,不過(guò),要想轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞活力好,省事又省力可是不容易。今天,我們走訪(fǎng)了A大的細(xì)胞重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,來(lái)聽(tīng)聽(tīng)大家對(duì)轉(zhuǎn)染的想法~
問(wèn)題一:
轉(zhuǎn)染過(guò)程中遇到Z大的困難是什么?
Z大的困難就是遇到難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,比如免疫細(xì)胞,原代細(xì)胞,干細(xì)胞這種,轉(zhuǎn)染效率實(shí)在是太低了
我平時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類(lèi)型非常多,不知道怎么針對(duì)性的選擇Z適合的轉(zhuǎn)染試劑。
問(wèn)題二:
對(duì)于難轉(zhuǎn)染這個(gè)問(wèn)題,有沒(méi)有考慮過(guò)使用電轉(zhuǎn)的方法?
當(dāng)然想過(guò),但是電轉(zhuǎn)想想就很復(fù)雜,哪有轉(zhuǎn)染試劑方便易操作呢。
如果電轉(zhuǎn)可以治療我的選擇困難癥,我當(dāng)然愿意了。
問(wèn)題三:
理想的電轉(zhuǎn)儀是什么樣的?
操作方便,省時(shí)省力排第一
內(nèi)置多種protocol,還能隨時(shí)修改各種參數(shù)的,Z適合我這種細(xì)胞類(lèi)型多的了。
可是,真的有這樣的電轉(zhuǎn)儀嗎?
別急,這不就來(lái)了嗎?
Neon NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)
Invitrogen? Neon? NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)是新一代電轉(zhuǎn)染平臺(tái),它采用創(chuàng)新設(shè)計(jì),顯著減化了哺乳動(dòng)物的細(xì)胞轉(zhuǎn)染流程。Neon NxT專(zhuān)有的移液器吸頭技術(shù)通過(guò)盡可能增加兩個(gè)電極之間的距離,同時(shí)減小其表面積,保證樣本具有:
更均勻的電場(chǎng)
更少的離子形成
更小的pH變化
可忽略不計(jì)的發(fā)熱
從而實(shí)現(xiàn)卓越的電轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞活力。同時(shí)操作簡(jiǎn)單,僅需 3 個(gè)步驟:吸樣、電轉(zhuǎn)染和分液即可完成。
圖1. Neon NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)
讓我們?cè)倩氐郊?xì)胞實(shí)驗(yàn)室,看看在電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)中,大家還會(huì)遇到哪些問(wèn)題。
01
場(chǎng)景一:小C用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞,第二天觀察發(fā)現(xiàn),細(xì)胞死了一大半,無(wú)法進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn).
分析原因:傳統(tǒng)的比色皿式電轉(zhuǎn)儀,對(duì)細(xì)胞傷害較大,造成大量細(xì)胞死亡。在比色皿中進(jìn)行電轉(zhuǎn),電場(chǎng)不均勻,pH變化大,加上將細(xì)胞移進(jìn)和移出的過(guò)程中,細(xì)胞多次經(jīng)受剪切力,導(dǎo)致原本脆弱的細(xì)胞更加脆弱,Z終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
解決方案:對(duì)于脆弱細(xì)胞,推薦使用溫和的電轉(zhuǎn)系統(tǒng),如Neon NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。該系統(tǒng)采用專(zhuān)有的電轉(zhuǎn)染吸頭技術(shù),電極間隔較寬,且表面積很小。較小的表面積產(chǎn)生更均勻的電場(chǎng),并且pH值變化微弱。轉(zhuǎn)染過(guò)程中產(chǎn)生的熱量和離子較少,因此細(xì)胞生理?xiàng)l件不會(huì)受到嚴(yán)重干擾。Neon NxT省去了將細(xì)胞移進(jìn)和移出比色皿的步驟,減少細(xì)胞受到的剪切力。
02
場(chǎng)景二:小L使用電轉(zhuǎn)儀推薦的電轉(zhuǎn)參數(shù),總是達(dá)不到理想的轉(zhuǎn)染效率
分析原因:雖然很多電轉(zhuǎn)儀自帶針對(duì)不同細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)方案,但是,具體實(shí)驗(yàn)條件千變?nèi)f化,任何微小條件都可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,還需要在此基礎(chǔ)上進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化。
解決方案:推薦選擇可以靈活調(diào)節(jié)電轉(zhuǎn)參數(shù)的電轉(zhuǎn)儀,快速微調(diào)特定參數(shù)以?xún)?yōu)化流程。使用 Neon NxT 電轉(zhuǎn)染系統(tǒng),可以精確地控制重要的實(shí)驗(yàn)參數(shù),無(wú)需浪費(fèi)寶貴的時(shí)間去調(diào)整不重要的參數(shù)。
使用Neon NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng),您可以獲得:
1
可靠的性能和極佳的細(xì)胞活力
專(zhuān)有的電轉(zhuǎn)染吸頭技術(shù),可幫助您自信地轉(zhuǎn)染具有挑戰(zhàn)性的細(xì)胞系并保持細(xì)胞活力。
圖2. Neon NxT電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)的轉(zhuǎn)染效率。在10 μL或100 μL電轉(zhuǎn)染反應(yīng)中,采用GFP質(zhì)粒DNA或GFP mRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞。轉(zhuǎn)染效率為GFP陽(yáng)性細(xì)胞的百分比(n=3)。注:初始T細(xì)胞僅在100 μL反應(yīng)中進(jìn)行電轉(zhuǎn)染。
圖3. Neon NxT系統(tǒng)電轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞活率。在10 μL或100 μL電轉(zhuǎn)染反應(yīng)中,采用GFP質(zhì)粒DNA或GFP mRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞。用Invitrogen? SYTOX?紅色死細(xì)胞染色劑對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行染色,并在Invitrogen? Attune? NxT流式細(xì)胞儀上評(píng)估細(xì)胞活率。細(xì)胞活率(%)以3次測(cè)量的平均值報(bào)告。注:初始T細(xì)胞僅 在100 μL反應(yīng)中進(jìn)行電轉(zhuǎn)染。
2
節(jié)省珍貴的樣本
Neon NxT 電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)的電穿孔過(guò)程發(fā)生在移液器吸頭內(nèi),而非比色皿內(nèi),盡可能地減少樣本損失和細(xì)胞承受的剪切力。
3
節(jié)省研究時(shí)間
Neon NxT 系統(tǒng)僅需 3 個(gè)簡(jiǎn)單的步驟:吸樣、電轉(zhuǎn)染和分液??装逶O(shè)置模式可設(shè)置不同參數(shù)條件,20 分鐘內(nèi)可對(duì)24 份樣本進(jìn)行電轉(zhuǎn)染。
4
靈活易用
采用 Neon NxT 電轉(zhuǎn)染系統(tǒng),可以精確地控制重要的實(shí)驗(yàn)參數(shù),無(wú)需浪費(fèi)寶貴的時(shí)間去調(diào)整不重要的參數(shù)。
使用 Thermo Fisher Connect 上 的Invitrogen ? TransfectionLab ?基于云的應(yīng)用程序優(yōu)化電轉(zhuǎn)染參數(shù),提高生產(chǎn)率和可追溯性。在輸入詳細(xì)實(shí)驗(yàn)信息后,將會(huì)生成從設(shè)計(jì)階段開(kāi)始為您的實(shí)驗(yàn)量身定制的分步指南。
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