色譜分析如今是實(shí)驗(yàn)分析中常見的方法,色譜法起源于20世紀(jì)初,色譜法利用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配,以流動(dòng)相對(duì)固定相中的混合物進(jìn)行洗脫,混合物中不同的物質(zhì)會(huì)以不同的速度沿固定相移動(dòng),Z終達(dá)到分離的效果。1960年代末科克蘭、哈伯、荷瓦斯等人開發(fā)了世界上**臺(tái)GX液相色譜儀,開啟了GX液相色譜的時(shí)代。什么是GX液相色譜法?
GX液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支,利用液體作為流動(dòng)相,通過高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱,待柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測,然后進(jìn)行試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)等科學(xué)領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。
根據(jù)用途和泵配置的不同,一般可以將常見的實(shí)驗(yàn)室級(jí)別LC分為以下幾種:分析型GX液相色譜儀(HPLC),半制備液相色譜儀(Semi-Prep HPLC)和制備型GX液相色譜儀(Prep-HPLC)以及中壓液相色譜儀(MPLC)。這三者的原理基本一樣,不同之處主要在于泵的Zda流速,一般而言,分析型HPLC的Zda流速為10.00mL/min,半制備HPLC為50mL/min,制備HPLC為100mL/min,中壓液相色譜更高。
制備型液相色譜儀的模式
低壓:一般而言,低壓適合易分離化合物,但分離時(shí)間長很容易造成敏感化合物分解。
中壓:中壓一般采用恒流泵提供恒定的流動(dòng)相流速,填料顆粒更小,分辨率更高,耐受更高壓力和更快流速。
高壓:高壓通常在分離制備的Z后階段采用,應(yīng)用于分離困難的樣品,純度甚至能達(dá)到99.9%。
制備型液相色譜儀的應(yīng)用領(lǐng)域
生物醫(yī)藥
天然產(chǎn)物
有機(jī)合成產(chǎn)物
抗生素
質(zhì)量控制的純化和制備等領(lǐng)域
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