液相色譜(HPLC)法是一種以液相為流動(dòng)相，在高壓和固定相下，顆粒很細(xì)的柱層析技術(shù)。液相色譜對(duì)樣品具有廣泛的適用性，不受分析物的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，彌補(bǔ)了氣相色譜的不足。約20%的已知有機(jī)化合物可以用氣相色譜法進(jìn)行分析，80%的有機(jī)化合物可以用液相色譜法進(jìn)行分析。

液相色譜與氣相色譜在基礎(chǔ)理論上沒(méi)有顯著性差異。兩者之間的顯著差異在于作為流動(dòng)相的液相和氣相性質(zhì)的差異。

液相色譜分析原理

主要結(jié)果如下：(1)液相色譜分析過(guò)程：將儲(chǔ)存瓶中的溶劑通過(guò)泵吸入到色譜系統(tǒng)中，然后輸出，經(jīng)流量和壓力測(cè)量后，將其導(dǎo)入采樣器。被測(cè)物體由取樣器注入，用流動(dòng)相分離在柱上。檢測(cè)信號(hào)由數(shù)據(jù)處理設(shè)備采集和處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。在復(fù)雜混合物分離(極性范圍寬)的情況下，梯度控制器也可用作梯度洗脫。這與氣相色譜法設(shè)定的溫度相似，不同之處在于氣相色譜改變了溫度，而HPLC改變了流動(dòng)相的極性，使樣品的組分在良好的條件下得以分離。

(2)液相色譜分離過(guò)程：與其他色譜過(guò)程一樣，HPLC是固定相和流動(dòng)相之間連續(xù)的、多次的溶質(zhì)交換過(guò)程，兩相間由于分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小的差異而引起的排阻差異使不同的溶質(zhì)分離。

首先，假設(shè)樣品中含有A、B和C三種組分，然后將樣品加入該柱，然后以流動(dòng)相進(jìn)入該柱，并開(kāi)始在固定相和流動(dòng)相之間劃分。"A組分分配系數(shù)小，不易被固定相堵塞，且較早流出色譜柱。高分配系數(shù)組分C在固定相上停留了很長(zhǎng)一段時(shí)間，隨后又從柱中流出。B組分的分配系數(shù)在A和C之間，第二流出柱之間。如果含有多種組分的混合物進(jìn)入系統(tǒng)，則混合物中的每一組分根據(jù)其在兩相之間的分配系數(shù)流出色譜柱，以達(dá)到分離的目的。

色譜過(guò)程中不同組分的分離首先取決于兩相的分配系數(shù)、吸附容量和親和力是否不同，這不僅是一個(gè)熱力學(xué)平衡問(wèn)題，也是分離的主要條件。其次，當(dāng)不同組分在色譜柱中移動(dòng)時(shí)，光譜帶隨柱長(zhǎng)而變寬，分離與兩相間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相的粒徑、柱的填充和流動(dòng)相的流動(dòng)速率有關(guān)。因此，分離的zui終效果是熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)的綜合效益。

工作原理

流動(dòng)相通過(guò)高壓泵進(jìn)入系統(tǒng)，樣品溶液通過(guò)注射器進(jìn)入流動(dòng)相，流動(dòng)相加載到色譜柱(固定相)中。由于樣品溶液中的組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，經(jīng)過(guò)多次吸附-解吸分配后，各組分在兩相中相對(duì)移動(dòng)時(shí)的運(yùn)動(dòng)速度有很大差異。它被分離成一個(gè)單獨(dú)的組件，然后依次從列中流出。當(dāng)樣品濃度通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)并傳送給記錄器，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來(lái)。

GX液相色譜法的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)

GX液相色譜法具有以下特點(diǎn)：

高壓可達(dá)150~300 kg/cm²，色譜柱壓降大于75 kg/cm²。

高速--流速為0.1~10.0ml/min。

每米可達(dá)5000盤(pán)，Z多可有100種元件同時(shí)在一列中分離。

高靈敏度--紫外檢測(cè)器的靈敏度可達(dá)0.01ng，同時(shí)可消耗較少的樣品。

與傳統(tǒng)的液相色譜相比，GX液相色譜法具有以下優(yōu)點(diǎn)：

快速-通常一個(gè)樣品可以在15分鐘內(nèi)分析30分鐘，有些樣品甚至可以在5分鐘內(nèi)完成。

高分辨率-固定相和流動(dòng)相可被選擇以達(dá)到良好的分離效果。

靈敏度高-紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01 ng，熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。

列可以重復(fù)使用，不同的化合物可以用一列分開(kāi)。

樣品體積小，易于回收--樣品在色譜柱后不會(huì)被破壞，可以收集或制備單一成分。