土壤酸性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒分光光度法 天津本生

　　中文名稱:土壤酸性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒

　　儲(chǔ)存條件2-8℃

　　單位盒

　　有效期6個(gè)月

　　英文名稱Soil Acid Protease Activity Assay Kit

　　檢測(cè)方法可見(jiàn)分光光度法 Spectrophotometer

　　規(guī)格50T/24S

　　產(chǎn)品組成：使用請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。

　　試劑名稱 規(guī)格 保存條件

　　試劑一 液體 20 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　試劑二 粉劑×1 瓶 2-8°C保存

　　試劑三 液體 12 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　試劑四 液體 40 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　試劑五 液體 10 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　試劑六 液體 15 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1 mL×1 支 2-8°C保存

　　溶液的配制：

　　1、 試劑二：臨用加入 10 mL 試劑六，沸水浴攪拌溶解后待用，用不完的試劑 2-8°C保存 1 個(gè)月。

　　2、 標(biāo)準(zhǔn)品：20μmol/mL 酪氨酸溶液。

　　產(chǎn)品說(shuō)明：

　　土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源。土壤酸性蛋白酶在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。酸性條件下，土壤酸性蛋白酶可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸;在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)，在680nm有特征吸收峰。

　　Casein Tyrosine Phosphomolybdic acid + Tyrosine Tungsten blue 680nm

　　注意：實(shí)驗(yàn)之建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者

　　增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

　　需自備的儀器和用品：

　　可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、臺(tái)式離心機(jī)、研缽、蒸餾水、30-50

　　目篩。

　　操作步驟：

　　一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn))新鮮土樣自然風(fēng)干或 37°C烘箱風(fēng)干，過(guò) 30~50 目篩。

　　二、測(cè)定步驟

　　Soil acid protease，H+OH-

　　1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至680nm，蒸餾水調(diào)零。

　　2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：取10μL  20μmol/mL酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液，加入990μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.2μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。(實(shí)驗(yàn)中每管需要220μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。)

　　3、 樣本測(cè)定

　　試劑名稱 測(cè)定管 對(duì)照管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管

　　風(fēng)干土樣(g) 0.1 0.1 - -

　　試劑一(μL) 200 200 - -

　　試劑二(μL) 100 - -

　　充分混勻后，37°C水浴/恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)24h，期間振蕩5-6 次，

　　使土樣與反應(yīng)液充分接觸。 - -

　　試劑三(μL) 200 200 - -

　　試劑二(μL) - 100 - -

　　混勻，10000rpm 室溫離心10min，取上清液待測(cè) - -上清液(μL) 220 220 - -

　　0.2μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液(μL) - - 220 -

　　蒸餾水(μL) - - - 220

　　試劑四(μL) 650 650 650 650

　　試劑五(μL) 130 130 130 130

　　混勻，40°C水浴或恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 10min，10000rpm 室溫離心 10min，取上清液于 680nm 下讀取各管吸光值 A，分別記為 A  測(cè)定管、A 對(duì)照管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管，計(jì)算ΔA 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。(標(biāo)準(zhǔn)管、空白管只需測(cè) 1-2   次，每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管)

　　三、土壤酸性蛋白酶活性計(jì)算

　　單位定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol的酪氨酸為一個(gè)土壤酸性蛋白酶活力單位。

　　土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)=C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V反總÷W÷T=0.1×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

　　C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.2μmol/mL;V反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL;T：反應(yīng)時(shí)間，1d;W：樣本質(zhì)量，g。

　　注意事項(xiàng)：

　　當(dāng)吸光值大于1時(shí)，建議將上清液用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。

　　實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

　　1、 分別稱取 2 份 0.1g 土樣于 1.5mLEP 管中，分別為對(duì)照管及測(cè)定管。按照測(cè)定步驟操作，使用 1mL 玻璃比色皿 測(cè) 定 吸 光 度  ， 計(jì) 算 ΔA 測(cè) 定 =A 測(cè) 定 管 -A 對(duì) 照 管 =0.206-0.178=0.028 ， ΔA 標(biāo) 準(zhǔn) =A 標(biāo) 準(zhǔn) 管 -A 空 白  管=0.540-0.028=0.512，按土壤質(zhì)量計(jì)算酶活得：

　　土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W= 0.1×0.028÷0.512÷0.1= 0.0547U/g 土樣。

　　2、 分別稱取 2 份 0.1g 三葉草土樣于 1.5mLEP 管中，分別為對(duì)照管及測(cè)定管。按照測(cè)定步驟操作，使用 1mL   玻璃比色皿測(cè)定吸光度，計(jì)算ΔA 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管=0.831-0.612=0.219，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A   空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤質(zhì)量計(jì)算酶活得：

　　土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W= 0.1×0.219÷0.512÷0.1=0.0313 U/g 土樣。

　　相關(guān)系列產(chǎn)品：

　　BC0270/BC0275 土壤中性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒

　　BC0880/BC0885 土壤堿性蛋白酶(S-ALPT)活性檢測(cè)試劑盒

　　測(cè)定意義：土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源。S-ACPT  在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。

　　測(cè)定原理：酸性條件下，S-ACPT 可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸;在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán);在680nm 有特征吸收峰。

　　所需儀器及設(shè)備：可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿、蒸餾水。

　　備注：

　　以上數(shù)據(jù)均來(lái)自公開文獻(xiàn), 暫未進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證, 僅供參考。

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