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一文Get原代細(xì)胞培養(yǎng)秘笈

來(lái)源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 更新時(shí)間:2024-12-25 14:25:10 閱讀量:144

1

 

概述

原代細(xì)胞(Primary Cell)是指從機(jī)體的組織或器官經(jīng)胰蛋白酶、膠原酶、中性蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體環(huán)境培養(yǎng)的細(xì)胞。

鄭1.png

▲ 圖1.原代組織細(xì)胞培養(yǎng)(源于網(wǎng)絡(luò))

那原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別呢?小翌給你答案,見(jiàn)下表:
 

特性

原代細(xì)胞

細(xì)胞系

增殖能力

較弱

強(qiáng)

繁殖代數(shù)

一般只能傳10代以?xún)?nèi)

無(wú)限增殖,50代左右

遺傳物質(zhì)完整性

遺傳物質(zhì)未改變

遺傳物質(zhì)發(fā)生改變

生物特性

最接近臨床樣本

偏離臨床樣本

培養(yǎng)容易程度

比較復(fù)雜

簡(jiǎn)單,易操作

原代細(xì)胞培養(yǎng):由于原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,繁殖一定的代數(shù)停止生長(zhǎng)(一般10代以?xún)?nèi))。所以一般認(rèn)為:培養(yǎng)的原代的第1和傳代到第10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。

在原代細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中,支原體污染發(fā)生的頻率很高,但常常為人所忽視,原因在于支原體污染的培養(yǎng)液可能不發(fā)生混濁的現(xiàn)象,這就導(dǎo)致了很難被肉眼所觀察到。

 

2

 

原代細(xì)胞培養(yǎng)如何取材

 

▍ 皮膚和黏膜

主要取皮片,面積一般2-4cm2

▍ 內(nèi)臟和實(shí)體瘤

» 無(wú)菌環(huán)境;

» 熟悉所需組織的類(lèi)型和部位;

» 要避開(kāi)破潰、壞死、液化部分,以防污染、盡量去除混雜的結(jié)締組織。

 

▍ 血液細(xì)胞

» 一般多抽取靜脈外周血、或從淋巴組織中分離細(xì)胞;

» 取材時(shí)應(yīng)注意抗凝。

 

▍ 骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞

嚴(yán)格無(wú)菌、注意抗凝、還要盡快分離培養(yǎng)、離心后,用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng),不宜低溫存放。

 

▍ 動(dòng)物組織取材-鼠胚組織

» 用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動(dòng)物;
 

» 將其浸泡在含75%酒精的燒杯中,5分鐘后取出動(dòng)物;

» 在消毒過(guò)得木板上可用無(wú)菌的圖釘固定四肢,切開(kāi)皮膚;

» 用無(wú)菌操作法解剖取胚。

 

▍ 動(dòng)物組織取材-幼鼠胚腎/肺

» 幼鼠采用上述方法處死消毒后;

» 腹部朝上固定在木板上,先切開(kāi)游離毛皮并拉開(kāi)至兩側(cè);

» 采用無(wú)菌法打開(kāi)胸腔取肺,或從背部打開(kāi)腹腔取腎。

 

▍ 雞、鴨、鳥(niǎo)類(lèi)胚胎組織

» 取孵化至適當(dāng)胚齡(9-12天)的胚蛋,用照蛋燈在暗處燈檢,若有豐富血管、胚體有運(yùn)動(dòng)的胚蛋、說(shuō)明胚體發(fā)育良好,并用有色筆劃出氣室和胚體位置;

» 將胚蛋至于蛋架上,先將溫水清洗蛋殼,再用75%酒精棉球擦干,經(jīng)碘酒、75%酒精消毒后,在無(wú)菌條件下采用無(wú)菌法用剪刀或鑷子打開(kāi)氣室,沿氣室邊緣去除蛋殼;

» 用眼科鑷子撕去殼膜,暴露出雞胚;

» 用彎頭鑷挑起胚頭,取出胚胎,放入無(wú)菌平皿中,解剖取材。

 

3

 

常見(jiàn)問(wèn)題

 

 

Q1:細(xì)胞量太少,長(zhǎng)不起來(lái)怎么辦?

有幾種辦法,如對(duì)沒(méi)消化完的組織塊反復(fù)消化,盡量多收集一些細(xì)胞;并且盡量傳代到小皿里,如6孔板都可以。若是細(xì)胞仍太少,應(yīng)耐心等待,盡量不要傳代,只換液。

 

Q2:皮膚組織作為正常組織,與腫瘤組織分離主要區(qū)別在哪里?

首先,皮膚組織需要用中性分離酶dispaseII將表皮分離出來(lái);其次,在消化時(shí),用的是胰酶,而非膠原酶,并且胰酶的濃度用的是0.05%,而不是0.25%。

 

Q3:細(xì)胞難以貼壁怎么辦?

為了盡快促進(jìn)細(xì)胞貼壁,可以提前1h將0.5%的明膠鋪于培養(yǎng)板。另外,如果細(xì)胞被污染了肯定不貼壁,建議做支原體檢測(cè),結(jié)果如果是陽(yáng)性,立即加入支原體去除試劑,挽救您的細(xì)胞,咱們小翌可以為你的細(xì)胞提供全方位的護(hù)航!

4

 

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▲ 圖2.一步法支原體檢測(cè)操作流程

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鄭3-1.jpg
去除前
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去除后

▲ 圖3.Yeasen MycAwayTM 支原體去除效果的展示

 

  支原體去除試劑的特點(diǎn)

» 毒性低:對(duì)細(xì)胞毒性小,不影響后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn),如細(xì)胞活力檢測(cè)和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等;

» 穩(wěn)定性強(qiáng):-20℃試劑能較長(zhǎng)時(shí)間保存并保持高效用;

» 操作簡(jiǎn)單:只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可;

» 起效快:最快3天即可見(jiàn)效;

» 去除范圍廣:能去除實(shí)驗(yàn)室絕大多數(shù)支原體類(lèi)型。          
鄭4-1.jpg
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▲ 圖4.支原體去除試劑細(xì)胞毒性檢測(cè)圖示

 

5

 

產(chǎn)品信息

 

限時(shí)線(xiàn)下促銷(xiāo)正在進(jìn)行,詳情請(qǐng)咨詢(xún)當(dāng)?shù)劁N(xiāo)售

 

類(lèi)別

產(chǎn)品

貨號(hào)

規(guī)格

支原體檢測(cè)

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