細(xì)胞骨架不僅能夠作為細(xì)胞支架,還參與細(xì)胞器轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞分裂、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和信號(hào)傳導(dǎo),因而常作為細(xì)胞健康和疾病進(jìn)程研究的核心。細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)由多種蛋白纖維組成,包括:微絲(肌動(dòng)蛋白)、微管(肌球蛋白、驅(qū)動(dòng)蛋白和動(dòng)力蛋白)和中間纖維 [1]。在固定細(xì)胞/組織和活細(xì)胞中,可以使用一系列染料、抗體和熒光蛋白,通過(guò)熒光成像法來(lái)識(shí)別這些蛋白纖維。
今天我們一起來(lái)盤(pán)一盤(pán)常見(jiàn)的細(xì)胞骨架標(biāo)記方法有哪些吧。文末還有互動(dòng)活動(dòng),細(xì)胞骨架染料免費(fèi)送,不要錯(cuò)過(guò)哦~
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固定細(xì)胞/組織標(biāo)記
【不挑物種的經(jīng)典方法】鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物
鬼筆環(huán)肽是一種雙環(huán)肽,當(dāng)與熒光染料偶聯(lián)時(shí),可用于標(biāo)記固定和透化細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白。鬼筆環(huán)肽鬼筆環(huán)肽與 Alexa Fluor 染料的熒光偶聯(lián)物是大多數(shù)應(yīng)用的首選 F-actin染料,因?yàn)樗鼈冊(cè)谡麄€(gè)光譜范圍內(nèi)都具有明亮的信號(hào)和光穩(wěn)定性。鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物可與大的或小的肌動(dòng)蛋白微絲結(jié)合,其中鬼筆環(huán)肽與肌動(dòng)蛋白Actin亞基之間的化學(xué)計(jì)量比為 1:1,但不會(huì)與 G-actin單體結(jié)合。本方法不適用于石蠟包埋的切片。
圖1. 三重?zé)晒鈽?biāo)記的麂皮成纖維細(xì)胞
(細(xì)胞骨架使用鬼筆環(huán)肽-AF488標(biāo)記,貨號(hào)A12379)
【想標(biāo)哪里標(biāo)哪里】細(xì)胞骨架抗體
我們可提供適于不同應(yīng)用的肌動(dòng)蛋白和微管蛋白高品質(zhì)一抗,包括免疫熒光,免疫組化,WB。對(duì)于成像應(yīng)用,抗體可用于固定細(xì)胞、冰凍組織切片和石蠟包埋切片。在靶點(diǎn)多樣性和檢測(cè)通道靈活性方面,抗體法標(biāo)記細(xì)胞骨架有著突出優(yōu)勢(shì)。熱門(mén)細(xì)胞骨架一抗請(qǐng)見(jiàn)下表:
圖2. 雙重?zé)晒鈽?biāo)記的大鼠原代皮層神經(jīng)元細(xì)胞
(細(xì)胞骨架標(biāo)記抗體貨號(hào)MA1-118)
【高效+方便+便宜】ReadyProbes系列細(xì)胞骨架染料(文末有樣品送哦)
ReadyProbes試劑ActinGreen? 488 和 ActinRed? 555用于標(biāo)記固定和透化細(xì)胞/組織中的 F-肌動(dòng)蛋白,具有與傳統(tǒng)鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物相當(dāng)?shù)?span style="color: rgb(180, 17, 36);box-sizing: border-box;">高度親和力,也與其他固定細(xì)胞染料兼容,包括抗體、熒光染料、 和 Qdot? 量子點(diǎn)染料。
ReadyProbes試劑是簡(jiǎn)單、便捷max的肌動(dòng)蛋白熒光染色方法——直接滴加即可,無(wú)需計(jì)算,無(wú)需稀釋?zhuān)瑹o(wú)需移液,其中:
ActinGreen? 488 試劑用的是發(fā)綠色熒光的 Alexa Fluor? 488 染料,非常亮且光穩(wěn)定。
圖3. 三重?zé)晒鈽?biāo)記的Hela細(xì)胞
(細(xì)胞骨架使用ActinGreen 488標(biāo)記,貨號(hào)R37110)
ActinRed? 555 試劑用的是發(fā)紅橙色熒光的四甲基羅丹明染料,也有出色的光譜特性。
圖4. 三重?zé)晒鈽?biāo)記的HeLa細(xì)胞
(細(xì)胞骨架使用ActinGreen 555標(biāo)記,貨號(hào)R37112)
【可死可活,不挑樣品】CellMask肌動(dòng)蛋白染料
CellMask 肌動(dòng)蛋白示蹤染料用于在活細(xì)胞中進(jìn)行纖維狀肌動(dòng)蛋白的熒光成像。CellMask 可滲透細(xì)胞,對(duì)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架進(jìn)行特異、均勻且明亮的染色。
多重應(yīng)用:活細(xì)胞染色之后,細(xì)胞可固定用于多重分析,如免疫熒光、免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫組化實(shí)驗(yàn)。
多色可選:CellMask Actin有綠色、橙色和深紅三種顏色可選。
使用簡(jiǎn)單:僅需將1X染色工作液加入細(xì)胞,孵育15~60分鐘,洗滌后即可成像。
低毒性:在24小時(shí)內(nèi) CellMask不會(huì)造成可檢測(cè)的的細(xì)胞毒性。
圖5. 三重?zé)晒鈽?biāo)記的大鼠十二指腸冰凍切片
(細(xì)胞骨架使用CellMask Actin Deep Red標(biāo)記,貨號(hào)A57245)
活細(xì)胞標(biāo)記
【高效標(biāo)記活細(xì)胞微管】Tubulin Tracker染料
Taxol/paclitaxel紫杉醇和 Taxotere/ docetaxel多西紫杉醇偶聯(lián)物可用于活細(xì)胞中細(xì)胞骨架行為的終點(diǎn)分析,對(duì)聚合微管蛋白進(jìn)行高效標(biāo)記。該方法不推薦用于動(dòng)態(tài)細(xì)胞成像,因?yàn)榭赡軙?huì)干擾細(xì)胞功能,包括微管蛋白不穩(wěn)定性動(dòng)力學(xué)和細(xì)胞分裂。
Tubulin Tracker Green 試劑(紫杉醇偶聯(lián)物)和 Tubulin Tracker Deep Red 試劑(多西紫杉醇偶聯(lián)物)可通透過(guò)活細(xì)胞的細(xì)胞膜并對(duì)聚合微管蛋白進(jìn)行特異性染色。細(xì)胞固定會(huì)導(dǎo)致染色信號(hào)消失。
圖6. 單色熒光標(biāo)記的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元
(細(xì)胞骨架使用Tubulin Tracker Deep Red標(biāo)記,T34077)
【長(zhǎng)時(shí)間不掉“色”】CellLight 細(xì)胞骨架熒光融合蛋白
CellLight 試劑可標(biāo)記活細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白、微管蛋白或踝蛋白,使研究人員能夠追蹤細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)。
多重應(yīng)用:CellLight 熒光融合蛋白可與其他熒光探針在多重分析中一起標(biāo)記活細(xì)胞或固定后細(xì)胞以進(jìn)行共定位研究。
靶點(diǎn)可選:這類(lèi)即用型試劑可表達(dá)特定熒光融合蛋白,分別靶向 β-肌動(dòng)蛋白Actine 的 N-端、β-微管蛋白Tubulin的 N-端或踝蛋白Talin的 C-端。
簡(jiǎn)單無(wú)毒:CellLight 標(biāo)記只需一個(gè)簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)染步驟,與使用細(xì)胞染料一樣,幾乎無(wú)毒性和化學(xué)破壞性。
圖7. 四重?zé)晒鈽?biāo)記的U2OS細(xì)胞
(細(xì)胞骨架使用CellLight Talin-GFP標(biāo)記,貨號(hào)C10611)
【可死可活,不挑樣品】CellMask肌動(dòng)蛋白染料
詳見(jiàn)上文“固定細(xì)胞/組織標(biāo)記”部分。
圖8. 雙重?zé)晒鈽?biāo)記的HeLa球狀體
(細(xì)胞骨架使用CellMask Actin Deep Red標(biāo)記,貨號(hào)A57245)
*參考文獻(xiàn):
[1] Pollard TD and Goldman RD (2018). Cold Spring Harb Perspect Biol. 10(7):a030288. PMID: 29967009.
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請(qǐng)?jiān)谠u(píng)論中備注需要哪個(gè)顏色(數(shù)字編號(hào)即可):
綠色:Alexa Fluor 488, Ex/Em: 496/519 nm
紅色:羅丹明, Ex/Em: 555/565 nm
*參與截至1月23日下午5點(diǎn)。樣品預(yù)計(jì)于下周五(1月26日)之前發(fā)貨,如有特殊要求,請(qǐng)私信我們。
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