流式細(xì)胞術(shù)是一種生物學(xué)技術(shù)，用于對(duì)懸浮于流體中的微小顆粒進(jìn)行計(jì)數(shù)和分選。這種技術(shù)可以用來(lái)對(duì)流過(guò)光學(xué)或電子檢測(cè)器的一個(gè)個(gè)細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)的多種參數(shù)分析。流式細(xì)胞術(shù)（Flow CytoMetry，F(xiàn)CM）是對(duì)懸液中的單細(xì)胞或其他生物粒子,通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記的熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)高速、逐一的細(xì)胞定量分析和分選的技術(shù)。

其特點(diǎn)是通過(guò)快速測(cè)定庫(kù)爾特電阻、熒光、光散射和光吸收來(lái)定量測(cè)定細(xì)胞 DNA含量、細(xì)胞體積、蛋白質(zhì)含量、酶活性、細(xì)胞膜受體和表面抗原等許多重要參數(shù)。根據(jù)這些參數(shù)將不同性質(zhì)的細(xì)胞分開，以獲得供生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究用的純細(xì)胞群體。下面就讓小編給你簡(jiǎn)單介紹一下流式細(xì)胞儀的細(xì)胞的染色方法。

染色方法主要有直接免疫熒光染色法和間接免疫熒光染色法。

直接標(biāo)記就是在標(biāo)記的時(shí)候加入連接著熒光素的特異性抗體，這種方法相對(duì)比較簡(jiǎn)單，因此在各個(gè)實(shí)驗(yàn)室被廣泛的使用

間接標(biāo)記是用特異的無(wú)熒光標(biāo)記的一抗和被檢測(cè)的標(biāo)本反應(yīng)，除去沒有結(jié)合的抗體，然后加入熒光標(biāo)記的二抗，生成含有熒光的抗原-抗體-抗體混合物。這樣的操作不僅復(fù)雜而且耗費(fèi)時(shí)間，所以現(xiàn)在基本很少用這種方法。在科學(xué)研究中想要一些新的抗體但是沒有直接抗體時(shí)，只好用這種方法。

依據(jù)細(xì)胞部位的不同，可以分為細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)抗。

細(xì)胞表面染色：

大多數(shù)免疫表型分析都采用細(xì)胞表面染色方法。因?yàn)楹芏嗫乖瑫r(shí)存在細(xì)

胞里，因此在細(xì)胞表面抗原檢測(cè)時(shí)必須十分留意保持細(xì)胞膜的完整從而保證檢測(cè)的特異性。表面標(biāo)記又分溶血前標(biāo)記和溶血后標(biāo)記兩種。如果紅細(xì)胞對(duì)標(biāo)記產(chǎn)生影響或血漿成分對(duì)標(biāo)記產(chǎn)生影響的，應(yīng)該采用溶血后標(biāo)記，但要注意溶血?jiǎng)┠た乖挠绊?，所以，溶血?jiǎng)┩ǔ２话ü潭▌?。像免疫球蛋白輕鏈檢測(cè)和陣發(fā)性血紅蛋白尿的檢測(cè)等。

細(xì)胞內(nèi)染色：

有些胞內(nèi)抗原的檢測(cè)對(duì)白血病的免疫分型十分重要，像TdT,MPO,

cCD3,cCD79a。胞內(nèi)染色的要點(diǎn)是使細(xì)胞膜通透，把抗體或核酸染料導(dǎo)入胞內(nèi)但是不影響細(xì)胞骨架的完整性。不僅如此，還要保證固定和透膜的步驟不影響有關(guān)抗原與相應(yīng)抗體的結(jié)合力和核酸與染料的結(jié)合。一些適用于胞內(nèi)染色的試劑可能不適用于表面標(biāo)記分析。一般胞內(nèi)染色不能與細(xì)胞活性的檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行，除非用EMA的方法。對(duì)于胞內(nèi)染色，所用的熒光素必須小到能夠穿透到胞膜內(nèi)。對(duì)于某些核酸染料（如DAPI、TO、AO等）為活細(xì)胞染料，無(wú)需固定或透膜。

胞膜和胞內(nèi)染色：通常，先胞膜染色，固定，膜通透和胞內(nèi)染色，Z后是DNA染色。