1.3.色譜圖中所有峰拖尾或峰變形通常是由物理作用導(dǎo)致的,而非化學(xué)作用。
如果色譜圖中的峰形均表現(xiàn)相同類型的變形(圖3),則問題Z早應(yīng)出現(xiàn)在分析物通過色譜柱遷移之前(主要問題發(fā)生在分析物在色譜柱中遷移之前)。
這種峰形變形Z常見的致因是:玻璃料或柱頭的空隙部分堵塞(此類峰變形Z常見的原因是篩板部分堵塞或色譜柱頭塌陷)。
除非在推薦的pH范圍之外使用色譜柱,否則現(xiàn)在的柱子基本不會(huì)受到空隙的影響(輕易不會(huì)發(fā)生塌陷)。
但是,玻璃料(篩板)堵塞仍然是一個(gè)普遍存在的問題。對(duì)于5m顆粒柱(的色譜柱),入口端的玻璃料(篩板)通常具有2.0m的孔隙度;對(duì)于(顆粒)3m的色譜柱,具有0.5m的孔隙度。
如果顆粒物來自于樣品,或顆粒物是因泵密封磨損或流動(dòng)相到達(dá)色譜柱而產(chǎn)生的(磨損的泵密封圈或者流動(dòng)相顆粒物進(jìn)入色譜),它們通常會(huì)集中在玻璃料上(都聚集在篩板上)。
這些顆粒會(huì)影響樣品在色譜柱入口端的分流,使得部分樣品通過不同的流動(dòng)路徑到達(dá)色譜柱,因此會(huì)晚于另一部分樣品。
由于此時(shí)(此位置)未發(fā)生分離,因此所有分析物會(huì)以相同的方式變形(被擾亂),進(jìn)而色譜圖顯示所有峰均具有相似(類似)的峰拖尾或變形。
為了防止(避免)這一問題,如果流動(dòng)相可能含有顆粒(如緩沖沉淀物或灰塵),應(yīng)對(duì)其進(jìn)行過濾;并在泵密封嚴(yán)重磨損(導(dǎo)致顆粒物的產(chǎn)生)之前更換新的泵密封(密封圈)。
如果樣品含有顆粒碎片(屑),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行過濾(例如0.5m孔隙度過濾器(微孔濾膜))或?qū)ζ溥M(jìn)行短暫離心(例如5分鐘,>1500×g),以去除顆粒。
我們強(qiáng)烈建議在自動(dòng)進(jìn)樣器下游(之后)安裝0.5m孔隙度的串聯(lián)(在線)過濾器,以過濾任何意外進(jìn)入HPLC系統(tǒng)的顆粒物。如果串聯(lián)(在線)過濾器玻璃料(濾片)發(fā)生堵塞,系統(tǒng)背壓會(huì)升高;而更換玻璃料(濾片)十分簡單、快速和經(jīng)濟(jì)。采用串聯(lián)(在線)過濾器可顯著延長色譜柱的使用壽命,而且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。
圖3. 由于玻璃料或色譜柱空隙被部分堵塞(色譜柱篩板部分堵塞或色譜柱塌陷),色譜圖中所有峰形均出現(xiàn)了變形。
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