蛋氨酸羥基類似物（MHA）作為一種重要的蛋氨酸替代物，憑借良好的生物利用率、穩(wěn)定性及成本優(yōu)勢，被廣泛應用于飼料工業(yè)中，對促進畜禽生長發(fā)育、提高飼料轉(zhuǎn)化率具有關鍵作用。飼料中MHA的含量直接關系到飼料營養(yǎng)價值、養(yǎng)殖效益及動物產(chǎn)品質(zhì)量安全，因此，建立一種準確、高效、便捷的MHA含量測定方法具有重要的現(xiàn)實意義，此方法可為飼料行業(yè)的質(zhì)量管控提供科學、可靠的技術手段。

標準GB/T 19371-2025將于2026年3月1日起實施，代替GB/T 19371.2-2007 飼料中蛋氨酸羥基類似物的測定。與GB/T19371.2—2007相比，主要技術變化如下:

悟空K2025高效液相色譜儀可以滿足《GB/T 19371-2025 飼料中蛋氨酸羥基類似物的測定 高效液相色譜法》中對飼料中蛋氨酸羥基類似物含量測定的需求。

試樣中的蛋氨酸羥基類似物用10%乙腈水溶液提取，氫氧化鉀溶液水解，經(jīng)反相高效液相色譜法配置紫外-可見光檢測器測定，以保留時間定性，外標法定量。

K2025高效液相色譜儀：K2025P2二元高壓輸液泵、K2025AS自動進樣器、K2025CO柱溫箱、K2025UVD紫外-可見光檢測器、Wookinglab色譜工作站。

色譜柱：C₁₈（AQ）色譜柱，4.6 mm×250 mm，5 μm或者相當?shù)纳V柱；

流動相：甲酸乙腈水溶液（含0.05%甲酸的5%乙腈水溶液）；

流速：1.0 mL/min；

進樣量：20 μL；

洗針液：10 %乙腈水溶液；

柱溫：30 ℃；

檢測器及檢測波長：檢測器為紫外-可見光檢測器，檢測波長為210 nm。

1.重復性測試結果

按照色譜條件進行采集，蛋氨酸羥基類似物標準溶液（濃度為20 μg/mL）的色譜圖如圖1所示，積分結果如表1所示。

圖1  蛋氨酸羥基類似物標準溶液的色譜圖

表1  蛋氨酸羥基類似物標準溶液色譜圖積分結果

由表1中數(shù)據(jù)可知，蛋氨酸羥基類似物的保留時間為12.892 min，理論塔板數(shù)為18029，拖尾因子為0.90，具有良好的峰形。

將蛋氨酸羥基類似物標準溶液連續(xù)進樣7針，疊加的色譜圖如圖2所示，結果見表2。

圖2  蛋氨酸羥基類似物標準溶液連續(xù)進樣7針疊加的色譜圖

表2  蛋氨酸羥基類似物標準溶液連續(xù)進樣7針重復性數(shù)據(jù)統(tǒng)計

由表2中數(shù)據(jù)可知，蛋氨酸羥基類似物標準溶液連續(xù)進樣7針進行重復性測試，蛋氨酸羥基類似物保留時間的RSD為0.15 %，峰面積的RSD為0.23 %，具有良好的定性定量重復性。

2.儀器靈敏度測試結果

按照色譜條件進行采集，以濃度為1 μg/mL的蛋氨酸羥基類似物標準溶液作為靈敏度溶液，計算結果見表3。

3.含量測定結果

按照色譜條件，將蛋氨酸羥基類似物標準系列工作液上機測定，蛋氨酸羥基類似物在1 μg/mL~80 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關系，確定系數(shù)R²＞0.999。

蛋氨酸羥基類似物標準系列工作液疊加的色譜圖如圖3所示。

圖3  蛋氨酸羥基類似物標準系列工作液疊加的色譜圖

試樣含量測定結果

按照色譜條件，對空白溶液、供試品溶液和供試品加標溶液進行采集，計算試樣中蛋氨酸羥基類似物的含量。

空白溶液、供試品溶液和供試品加標溶液的色譜圖如圖4~圖6所示。試樣中蛋氨酸羥基類似物的含量計算結果如表4所示。

圖4  空白溶液的色譜圖

圖5  供試品溶液的色譜圖

圖6  供試品加標溶液的色譜圖

表4  試樣中蛋氨酸羥基類似物的含量計算結果

經(jīng)計算，市售飼料試樣中蛋氨酸羥基類似物的含量為1.58×10^-3 %，在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的偏差為6.8%，滿足《GB/T 19371-2025 飼料中蛋氨酸羥基類似物的測定 高效液相色譜法》中規(guī)定的該值不超過10%的要求；加標回收實驗中，蛋氨酸羥基類似物的加標回收率為96.3%。

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