ELISA作為一種快速、靈敏且準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，其應(yīng)用范圍廣泛，涵蓋了從常規(guī)的血液、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液到細(xì)胞裂解液等多種樣本。此外，ELISA還能處理一些特殊樣本，如分泌物（唾液、乳汁）、排泄物（尿液、大便）甚至土壤等。由于不同類型樣本的處理方法存在顯著差異，因此正確處理這些樣本對(duì)于確保ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。

在之前的文章中，我們已經(jīng)詳細(xì)介紹了血液、細(xì)胞和組織樣本的處理方法。接下來，我們將重點(diǎn)介紹幾種特殊類型樣本的處理技巧，以供參考。

1. 唾液樣本處理

唾液樣本的收集應(yīng)選擇新鮮樣本，受試者在采集前1小時(shí)內(nèi)應(yīng)避免進(jìn)食、抽煙或飲用飲料。建議使用鹽水漱口后，讓唾液自然流出，用無菌管收集未刺激的唾液2-5mL。隨后，立即在4℃條件下以4000 rpm的速度離心15分鐘，以去除任何顆?；虺练e物。取上清進(jìn)行檢測(cè)，剩余上清可分裝后保存于-80℃。

2. 痰液樣本處理

痰液樣本通常選擇清晨起床后未刷牙或吃飯前的樣本。建議使用生理鹽水或清水漱口，確保痰量達(dá)到1mL以上，并避免與鼻涕、唾液等混合。選擇痰液中較為粘稠的部分稱重，加入2倍體積的0.1% DTT（二硫蘇糖醇）溶解粘液，反復(fù)吹打，渦旋震蕩15-30秒。隨后，加入2倍于痰量的PBS緩沖液，振蕩混勻15-20分鐘。在4℃條件下，以1500 rpm離心10分鐘，吸取上清進(jìn)行檢測(cè)或保存。

3. 尿液樣本處理

用無菌容器收集當(dāng)天初次中段尿液。4℃，2000-3000 rpm離心20分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè)或-80℃保存。

4. 腦脊液樣本處理

臨床上人腦脊液的抽取采用腰椎穿刺法。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如小鼠的腦脊液量較少，通常僅有幾微升，可以針頭插入枕骨打孔進(jìn)行抽取，當(dāng)出現(xiàn)紅色液體時(shí)說明腦脊液已經(jīng)抽完。樣品收集后，4℃，2000-3000 rpm離心20分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè)或-80℃保存。

胸腹水、關(guān)節(jié)積液可參考此方法。

5. 肺泡灌洗液樣本處理

在纖維支氣管鏡下，按照常規(guī)方法進(jìn)行支氣管肺泡灌洗。每次注入無菌生理鹽水20 mL，然后緩慢洗出?；厥辗闻莨嘞匆?，4℃，2000-3000 rpm離心10分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè)或-80℃保存。

6. 乳汁樣本處理

收集樣品，4℃，2000-3000 rpm離心15分鐘，收取上清。重復(fù)離心3次，取上清進(jìn)行檢測(cè)或-80℃保存。

7. 糞便樣本處理

盡量采集干的糞便，重量應(yīng)大于50mg。將糞便用PBS洗3次，一般情況下每克糞便中加入9mL PBS緩沖液。超聲破碎，功率150-300W，裂解1-2s，間歇20-30s，3-5個(gè)循環(huán)。然后5000×g離心10分鐘，取上清檢測(cè)，或分裝凍存于-20℃或-80℃?zhèn)溆谩?/p>

8. 精液樣本處理

收集精液后需在室溫或37℃條件下，用纖維蛋白溶解酶進(jìn)行處理。之后將精液于4℃，4000 rpm離心10 分鐘分離精漿，進(jìn)行檢測(cè)，或分裝凍存于-20℃或-80℃?zhèn)溆谩?/p>

9. 蛋黃樣本處理

取新鮮蛋黃用超純水稀釋10倍。用鹽酸調(diào)pH至5.0-5.2，4℃靜置6小時(shí)，然后10000 rpm離心10分鐘，收集上清。再調(diào)pH至7.2-7.4，進(jìn)行檢測(cè)，或分裝凍存于-20℃或-80℃?zhèn)溆谩?/p>

10.土壤樣本處理

取1g土壤，加入9mL的PBS（pH7.3），充分混勻。4℃，5000-36000 rpm離心5分鐘，收取上清。

11. 植物樣本樣本處理

取新鮮植物組織在液氮中研磨。加入樣品體積9倍的PBS緩沖液（pH7.3），于4℃，8000rpm，離心30分鐘，取上清進(jìn)行檢測(cè)。

留個(gè)作業(yè)：

我們雖然羅列的多種樣本的處理方法，但無法涵蓋各種樣本。對(duì)于一些特殊樣本，還需要參考已發(fā)表的文獻(xiàn)或Protocol，設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇合理高效的樣本處理方案。

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