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2025-01-10 17:02:33多色熒光標(biāo)記原理: 多色熒光標(biāo)記原理是指利用不同波長的熒光染料對同一細胞或組織中的多種生物分子進行標(biāo)記，通過特定的熒光顯微鏡或成像系統(tǒng)觀察并區(qū)分這些染料所發(fā)出的熒光信號，從而實現(xiàn)對多種生物分子的同時檢測和定位。這種技術(shù)能夠大大提高實驗效率和準(zhǔn)確性，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的研究中，如細胞分選、蛋白質(zhì)相互作用分析、基因表達研究等。通過多色熒光標(biāo)記，研究人員可以更深入地了解生物分子的功能和相互作用關(guān)系。

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多色熒光標(biāo)記原理問答

2025-10-15 17:30:21水下葉綠素?zé)晒鈨x原理是什么: 水下葉綠素?zé)晒鈨x是海洋生物學(xué)研究和水質(zhì)監(jiān)測中不可或缺的儀器之一。本文將深入探討水下葉綠素?zé)晒鈨x的工作原理，幫助讀者理解其在科學(xué)研究中的應(yīng)用價值。通過分析其核心技術(shù)和操作流程，揭示該儀器在評估水體中藻類繁殖和水質(zhì)變化方面的重要作用，為相關(guān)行業(yè)提供技術(shù)支持和優(yōu)化方案。水下葉綠素?zé)晒鈨x的核心原理基于植物光合作用中的葉綠素?zé)晒猬F(xiàn)象。葉綠素是光合作用的關(guān)鍵色素，其在吸收光能后，部分能量會以熒光的形式釋放出來。該熒光信號的強度與葉綠素的濃度密切相關(guān)，因而成為檢測水中藻類濃度的重要指標(biāo)。當(dāng)水體中藻類繁繁盛象水體富營養(yǎng)化時，葉綠素含量會顯著增加，從而導(dǎo)致熒光信號增強。利用這一特性，水下葉綠素?zé)晒鈨x可實現(xiàn)非侵入性、實時監(jiān)測水域葉綠素濃度的目的。具體來說，水下葉綠素?zé)晒鈨x通常由激發(fā)光源、光探測器和數(shù)據(jù)處理單元組成。激發(fā)光源發(fā)出特定波長的光（通常為藍光或紫外線），照射到水中葉綠素。葉綠素吸收激發(fā)光后，產(chǎn)生特征性熒光，發(fā)出的熒光信號再被光探測器捕捉。檢測到的熒光強度通過電子技術(shù)轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號，經(jīng)過復(fù)雜的算法處理后，得出水體中的葉綠素濃度。儀器的特殊設(shè)計保證了其在水下復(fù)雜環(huán)境中的操作穩(wěn)定性和數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。濃度的計算通?；跓晒庑盘柵c已知標(biāo)準(zhǔn)的比較。不同的葉綠素?zé)晒鈨x配備了校準(zhǔn)模塊，確保檢測結(jié)果的可靠性?，F(xiàn)代水下葉綠素?zé)晒鈨x還整合了自動溫度補償和壓強調(diào)節(jié)技術(shù)，通過優(yōu)化參數(shù)，減少環(huán)境因素對測量結(jié)果的影響。這樣一來，儀器能夠在不同水域條件下持續(xù)提供高精度的葉綠素濃度數(shù)據(jù)，極大程度上提升了水質(zhì)監(jiān)測的效率和科學(xué)性。應(yīng)用方面，水下葉綠素?zé)晒鈨x不僅廣泛應(yīng)用于海洋生態(tài)環(huán)境監(jiān)測，還在湖泊、水庫、河流等淡水系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。研究人員利用其實時監(jiān)測藻類動態(tài)，提前預(yù)警水華爆發(fā)，有效防范生態(tài)災(zāi)害。漁業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)也借助該儀器優(yōu)化養(yǎng)殖環(huán)境，減少富營養(yǎng)化帶來的負面影響。而在水資源管理與污染治理中，水下葉綠素?zé)晒鈨x作為一種快速、精確的檢測工具，幫助相關(guān)部門實時掌握水質(zhì)變化趨勢，為決策提供科學(xué)依據(jù)。隨著科技不斷進步，水下葉綠素?zé)晒鈨x的技術(shù)也在不斷升級。例如，部分儀器加入了多參數(shù)監(jiān)測功能，可同步檢測溶解氧、濁度等水質(zhì)指標(biāo)，提升監(jiān)測的綜合能力。有些設(shè)備還具備長時間連續(xù)監(jiān)測和遠程數(shù)據(jù)傳輸?shù)墓δ?，為海洋和淡水環(huán)境的持續(xù)監(jiān)控提供了便利。這些創(chuàng)新不斷推動水質(zhì)監(jiān)測從傳統(tǒng)手工采樣向智能化、自動化方向發(fā)展。水下葉綠素?zé)晒鈨x的原理基于葉綠素的熒光特性，通過激發(fā)和捕捉特定波長的光信號，反映水體中的葉綠素濃度和藻類生長情況。借助先進的檢測技術(shù)和算法，該儀器在水環(huán)境監(jiān)測中的應(yīng)用效果日益顯著，為保護水資源、維護生態(tài)平衡提供了強有力的技術(shù)保障。在未來，隨著科技的不斷演進，水下葉綠素?zé)晒鈨x將在更廣泛的水環(huán)境管理和科學(xué)研究中發(fā)揮重要作用。

2025-11-28 16:50:01多歧管凍干機的工作原理是什么？: 冷凍干燥機是一種利用真空冷凍干燥技術(shù)進行物質(zhì)干燥的設(shè)備。其基本原理是將含水物質(zhì)先凍結(jié)成固態(tài)，然后通過升華原理使水分從固態(tài)直接升華為氣態(tài)，從而去除水分，保存物質(zhì)。凍干機廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、生物制品、食品等領(lǐng)域，具有干燥效果好、保存時間長、復(fù)水性好等優(yōu)點真空冷凍干燥機的工作原理是指利用升華原理進行干燥的一種技術(shù)，即被干燥物在低溫下快速凍結(jié)，然后在合適的真空環(huán)境下，使凍結(jié)的水分子直接升華為蒸汽逸出。該過程不會因為脫水而發(fā)生濃縮，干燥物呈干海綿多孔狀，體積基本不變，極易融水而恢復(fù)，防止干燥物質(zhì)的物理化學(xué)和生物學(xué)方面的變形。

2026-01-07 13:45:24能散型X射線熒光光譜儀原理是什么: 散型X射線熒光光譜儀（簡稱XRF光譜儀）在材料分析領(lǐng)域扮演著舉足輕重的角色。本文將深入探討其工作原理，幫助讀者理解背后的科學(xué)機制以及該技術(shù)廣泛應(yīng)用的原因。通過詳細解析散型X射線熒光光譜儀的基本原理、結(jié)構(gòu)組成及其在實際中的優(yōu)勢與限制，旨在為行業(yè)專業(yè)人士和科研人員提供一份全面、系統(tǒng)的技術(shù)指南。理解這一儀器的核心工作機制，有助于優(yōu)化檢測流程，提升分析精度，進而推動相關(guān)行業(yè)的發(fā)展。散型X射線熒光光譜儀的主要工作原理源于X射線與材料中元素的相互作用。當(dāng)高能X射線照射到樣品表面時，會導(dǎo)致樣品中的原子發(fā)生激發(fā)，電子從原子軌道被激發(fā)出去，形成空穴。這一過程隨即引發(fā)原子內(nèi)電子的躍遷，釋放出具有特定能量的熒光X射線，也就是我們常說的特征X射線。這些特征X射線的能量大小與元素的化學(xué)性質(zhì)直接相關(guān)，因此通過檢測和分析它們的能量與強度，就可以確定樣品中存在的元素類型和含量。散型X射線熒光光譜儀的檢測部分由高靈敏度的探測器組成，通常采用硅漂移探測器（SDD）或光電倍增管（PMT），以實現(xiàn)對樣品中釋放出的特征X射線的精確捕獲。此部分的設(shè)計確保能夠在短時間內(nèi)獲得高分辨率的熒光光譜數(shù)據(jù)。儀器中的能量分析系統(tǒng)負責(zé)篩選不同能量的X射線，構(gòu)建元素的光譜輪廓圖。通過專門的軟件對這些數(shù)據(jù)進行處理，科學(xué)家們能夠快速識別樣品中的多種元素并進行定量分析。散型XRF的“散型”特性指的是其檢測方式不同于集中型XRF設(shè)備。散型XRF采用側(cè)向激發(fā)和檢測的方式，使得樣品的分析更為靈活，可以在較為復(fù)雜的樣品環(huán)境中展開，減少樣品準(zhǔn)備時間，增強現(xiàn)場檢測能力。這種結(jié)構(gòu)特性使得散型XRF尤其適用于寶石、土壤、金屬、合金以及工業(yè)材料的快速成分分析。從環(huán)境監(jiān)測到礦物勘查，從考古研究到質(zhì)量控制，其應(yīng)用范圍極其廣泛。在性能方面，散型X射線熒光光譜儀具有一些顯著優(yōu)勢。它不損傷樣品，適合對樣品進行多次檢測而不影響其原始屬性。分析速度快，一套完整的測試可以在幾秒到幾分鐘內(nèi)完成，大大提高工作效率。其操作相對簡便，部分設(shè)備配備自動化功能，減少操作難度，為用戶帶來的用戶體驗。當(dāng)然，也存在一定局限。比如，對于輕元素（如氫、氦）檢測能力有限，復(fù)雜樣品中的元素重疊可能導(dǎo)致分析誤差。散型X射線熒光光譜儀作為一種高效、非破壞性元素分析工具，其工作原理基于X射線激發(fā)原子釋放特征熒光X線，結(jié)合高性能探測器和能量分析系統(tǒng)，實現(xiàn)元素的快速定性和定量。它的獨特結(jié)構(gòu)設(shè)計和操作簡便性，使得在多個行業(yè)展現(xiàn)出極大的應(yīng)用潛力，為推進科學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)提供了可靠的技術(shù)支撐。隨著檢測技術(shù)的持續(xù)優(yōu)化，未來散型XRF光譜儀將在更廣泛的領(lǐng)域展現(xiàn)出更強的競爭力和更高的應(yīng)用價值。

2022-07-22 15:27:25熒光定量PCR實驗，熒光標(biāo)記怎么選？: 熒光定量PCR技術(shù)是將常規(guī)的PCR和熒光檢測技術(shù)相結(jié)合，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，以此實現(xiàn)對初始模板的定量分析。熒光定量PCR技術(shù)作為當(dāng)今生物學(xué)研究的重要手段之一，在基礎(chǔ)科學(xué)、生物技術(shù)、醫(yī)學(xué)研究、法醫(yī)學(xué)、診斷學(xué)等多方面具有廣泛的應(yīng)用前景。說到熒光定量PCR技術(shù)，我們經(jīng)常會問類似于“你的實驗是染料法還是探針法”，“你用的探針是什么類型”等之類的問題，這其實是對熒光標(biāo)記的選擇。根據(jù)熒光標(biāo)記的不同，可以將熒光定量PCR實驗分為探針法和染料法兩大類。染料法染料法利用能與DNA雙鏈結(jié)合的染料來實現(xiàn)，如SYBR Green I。該染料在游離狀態(tài)下呈現(xiàn)微弱的熒光，一旦與雙鏈DNA的雙螺旋小溝結(jié)合，其綠色熒光增強約1000倍。因此其總的熒光強度與雙鏈DNA含量成正比，利用這一關(guān)系可以反映生成的PCR產(chǎn)物的量（圖 1）。SYBR Green I的吸收約在497 nm，發(fā)射波長約在520 nm，與FAM熒光分子的光譜性質(zhì)類似，因此在所有的熒光定量PCR設(shè)備中都是通道檢測，即“FAM/SYBR Green I”通道?！?圖1 染料法原理圖理論上，所有能與雙鏈DNA結(jié)合的染料都可以用于qPCR檢測，如溴化乙錠EtBr，碘化丙啶PI，吖啶橙、Cy3等。而選擇用于qPCR反應(yīng)的染料通常會從信號強度、生物安全性、檢測簡便性和經(jīng)濟適用性這幾個因素考慮。例如EtBr可能存在潛在的致癌性。綜合考慮下來，SYBR Green I成了比較理想的選擇。目前，使用Evagreen的實驗者也越來越多，Evagreen作為一種新型的染料，其光譜性質(zhì)與SYBR Green I類似，其優(yōu)勢在于：? 對PCR反應(yīng)的抑制程度小。高濃度SYBR Green I會強烈抑制PCR反應(yīng)，因此要控制其使用濃度，一定程度上降低了DNA檢測的靈敏度。? 與DNA結(jié)合密度高。單位長度的DNA雙鏈上Evagreen的密度更高，為飽和型染料，消除了SYBR Green I存在的“染料重分布”的缺陷，提高檢測靈敏度的同時也可用于高分辨率溶解曲線HRM。? 化學(xué)性質(zhì)更穩(wěn)定，適合長期保存。TaqMan 探針TaqMan 探針基本可以滿足60%以上的qPCR實驗，如常規(guī)的基因表達和拷貝數(shù)變異CNV實驗。TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團連接在探針的5'末端，而淬滅劑則在3'末端（圖2）。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收; PCR擴增時, Tag酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。常用的熒光基團是FAM，TET，VIC，HEX?！?圖2 Taqman探針MGB探針對于要分辨單堿基差異的SNP實驗，采用對堿基錯配容忍度更低的MGB探針，在淬滅基團后加入了DPI3基團（圖3），從而提高了與靶標(biāo)結(jié)合的親和力；而且可以對靶點堿基進行化學(xué)修飾，如PeptideNucleic Acid和Locked Nucleic Acid?！?圖3 MGB探針雙雜交探針Taqman探針對探針的長度有比較嚴格的要求，雙雜交探針則消除了這一“缺陷”。雙雜交探針是由兩條寡核苷酸單鏈組成，一條的3’端帶有供體熒光分子，另一條的5’端帶有受體熒光分子（圖4）。游離狀態(tài)下熒光供體會發(fā)出熒光，但當(dāng)兩條單鏈都匹配到模板鏈上時，就會發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移FRET，受體熒光分子就可以發(fā)出熒光，其熒光強度與生成的產(chǎn)物的量成正比。雙雜交探針的優(yōu)勢有兩點：擺脫了探針長度的限制，較長的探針可以提高與模板匹配的成功率；只有上下游兩條探針都正確匹配后才能檢測到受體熒光分子發(fā)出的熒光，特異性有所提高?！?圖4 雙雜交探針分子信標(biāo)探針游離狀態(tài)下，分子信標(biāo)探針是一種莖環(huán)結(jié)構(gòu)，其環(huán)狀部分的15-30個堿基可以與靶標(biāo)區(qū)域相結(jié)合匹配，下端的配對區(qū)域（左右一般各5-6個堿基）則由重復(fù)的GC組成，從而將5’的熒光分子和3’的淬滅基團緊緊聚在一起，熒光發(fā)生淬滅；當(dāng)退火時，分子信標(biāo)探針解開環(huán)并與模板靶標(biāo)雜交，這樣熒光分子和淬滅基團的物理距離就變大了，熒光淬滅的前提就打破了（圖5）。除了MGB探針，分子信標(biāo)探針也非常適合用于SNP檢測?！?圖5 分子信標(biāo)探針除了上述幾種類型的探針之外，還有嘗試將引物和探針功能相結(jié)合的技術(shù)，如Amplifluor、LUX等，在設(shè)計難度上有所提高，但使用時更簡便。各有其應(yīng)用的側(cè)重點和設(shè)計上的利弊，在此不多贅述。那么在熒光定量PCR實驗中，我們應(yīng)該如何進行選擇呢？在這里，給大家總結(jié)了一些兩種方法的區(qū)別，供大家參考。表1 染料法和探針法的區(qū)別

2022-12-30 11:24:37MICA實現(xiàn)Caspase 3/7多色檢測: Caspases與細胞凋亡過程相關(guān)，因此可以利用caspase檢測來確定細胞是否正在經(jīng)歷這種程序化的細胞死亡。這些檢測可以通過例如流式細胞儀、平板讀數(shù)儀實現(xiàn)，也可以在顯微鏡上完成，顯微鏡可為量化數(shù)據(jù)補充可見的結(jié)構(gòu)信息。在這篇文章中，我們描述了MICA是如何用于caspase 3/7測定。借助Navigator或像素分類器等工具，MICA讓設(shè)置、執(zhí)行和分析caspase 3/7檢測變得更加容易，即使沒有經(jīng)驗的用戶也可輕松操作。圖像：雙色caspase檢測并進行拼接掃描。U2OS細胞用核標(biāo)記物DRAQ5（品紅）和CellEvent?（黃色）標(biāo)記。加入4mM星形孢菌素以誘導(dǎo)細胞凋亡。20倍物鏡下使用雙通道熒光，持續(xù)16小時每30分鐘獲取一次2x2 FOV（視野范圍）的掃描拼接圖像。引言凋亡細胞檢測或者活細胞/死細胞檢測一般通過將某種物質(zhì)應(yīng)用于活細胞并觀察細胞反應(yīng)，以此檢測其毒性或有效性。死亡率隨時間推移而上升或者劑量依賴性上升均證明物質(zhì)有效。判斷潛在藥物的抗癌效果便是一個典型示例。商用染料試劑盒可檢測處于凋亡狀態(tài)的細胞。這些試劑盒內(nèi)染料為熒光染料，能夠分別標(biāo)記活細胞和死亡細胞。Caspase活性檢測法是細胞凋亡檢測法的一種。Caspase（半胱天冬酶）是參與細胞凋亡過程的一類半胱氨酸蛋白水解酶。它們還用于區(qū)分caspase介導(dǎo)的細胞凋亡或細胞壞死。這里的染料試劑盒使用的是DNA結(jié)合試劑，該試劑的熒光能夠被四氨基酸肽(DEVD)阻斷。一旦caspase-3和caspase-7（caspase-3/7）被激活，即當(dāng)細胞處于凋亡狀態(tài)時，caspase-3和caspase-7便會切割DEVD肽，然后DNA結(jié)合試劑便會開始呈現(xiàn)熒光。挑戰(zhàn) 由于添加劑濃度不同、孵育時間不同、染色類型或者細胞系等參數(shù)的不同，實驗通常在多孔板上進行。這種方法有兩個優(yōu)點，一是能夠在一個反應(yīng)容器中設(shè)置多個不同的試驗條件，二是只需要極少量的試劑和極低數(shù)量的細胞。但是，在實施過程中，用戶仍然可能會被不同孔和不同實驗的數(shù)量混淆。設(shè)置多孔板實驗時，MICA自帶的Navigator工具能夠幫助預(yù)覽。包括可以在虛擬畫板上計劃并設(shè)置每一孔的掃描拼接實驗或者延時實驗（見圖1）。圖1：導(dǎo)航工具。Navigator能提供整個樣品載體的預(yù)覽（例如，玻片、培養(yǎng)皿、孔板），并幫助用戶設(shè)置實驗。用戶能夠在整個孔板上操作導(dǎo)航并進入單孔內(nèi)，比如界定感興趣區(qū)域或者設(shè)計掃描拼接。追蹤細胞活動需要使單一熒光通道的時空相關(guān)性成像。傳統(tǒng)的寬場顯微鏡一般一次記錄一個通道，因此每一個細胞結(jié)構(gòu)只能按順序、一個接一個地記錄下來。這意味著兩個不同的結(jié)構(gòu)記錄于兩個不同的時間點。這對于極速發(fā)生的細胞事件來說可能會產(chǎn)生影響，特別是在共定位研究中。同時成像通過在同一時間記錄全部熒光的方法規(guī)避了這一缺點。對于caspase活性檢測法而言，這意味著用戶能夠觀察到，例如在caspase-3/7被激活的瞬間線粒體的反應(yīng)。MICA能夠同時檢測四種熒光，使用戶可以同時觀察到除細胞核、caspase-3/7活性、線粒體等之外的另一個細胞結(jié)構(gòu)（見圖5）。最后，如果想要確定某一特定試劑在誘導(dǎo)caspase介導(dǎo)細胞凋亡時的效果，則需要對caspase檢測進行量化。這種量化需要通過專門的外部軟件來實現(xiàn)。MICA自帶分析解決方案，不需要另外的軟件。通過MICA自帶的像素分類器，用戶能夠標(biāo)記一些感興趣區(qū)域（ROI），人工智能算法可以訓(xùn)練和識別這些區(qū)域（見圖2）。對于caspase活性檢測法而言，細胞核信號可用于確定細胞總數(shù)。CellEvent?信號可用于識別caspase介導(dǎo)的凋亡細胞。圖2：利用像素分類工具訓(xùn)練MICA識別圖像中樣品特征。通過在圖像中標(biāo)記示例特征，像素分類器能夠訓(xùn)練和劃分所有目標(biāo)物。方法在這一案例研究中， U2OS細胞或者COS7細胞被鋪在96孔板，然后培養(yǎng)一整晚的時間。在實驗過程中，活細胞分別用DRAQ5、SPY-650-DNA以及TMRE孵育15分鐘。之后，更換培養(yǎng)基，在實驗結(jié)束前使用CellEvent?孵育細胞。每孔內(nèi)加入凋亡誘導(dǎo)劑星形孢菌素（3 μM–7 μM）。在四色caspase活性檢測法中，U2OS細胞被接種在96孔板上并在夜間生長，然后培養(yǎng)一整晚的時間。在實驗過程中，活細胞與DAPI和TMRE孵育45分鐘。之后，更換培養(yǎng)基，在實驗結(jié)束前使用CellEvent?和SiR-Tubulin孵育細胞。每孔內(nèi)加入凋亡誘導(dǎo)劑—星形孢菌素（3 μM–7 μM）。在37℃、5% CO2和~65%濕度的環(huán)境中，按照指示的時間間隔和持續(xù)時間用MICA進行活細胞成像。使用Navigator工具設(shè)定并執(zhí)行檢測。一些實驗中會運行掃描拼接（參見視頻2）。進行掃描拼接時，研究人員使用的主要策略是“focus Map”；此外，延時實驗通過“Keep focus”來保持細胞的聚焦。使用MICA自帶的分析功能進行本次實驗中的數(shù)據(jù)分析。其中核心組件之一便是人工智能驅(qū)動的像素分類器，該功能位于“Learn”選項。通過像素分類器，用戶能夠標(biāo)記其感興趣區(qū)域（ROI），該區(qū)域?qū)⒆鳛樗幸獧z測的其他區(qū)域的示例。如圖5所示，細胞核被像素分類器標(biāo)記并檢測。像素分類器同樣能夠標(biāo)記并檢測線粒體活性標(biāo)識TMRE和caspase呈陽性的細胞。之后會在整個延時攝影過程中分析這批圖像。經(jīng)過計算之后，MICA會將計算結(jié)果以散點圖、共定位圖、直方圖、餅狀圖、框圖或者時間序列圖的形式展示在“結(jié)果”選項中。圖3：在分析過程中，MICA會標(biāo)記作為樣例的感興趣區(qū)域，為人工智能驅(qū)動的分析功能提供信息。在此檢測法中，細胞核（品紅）和caspase陽性細胞（綠色）會被用于訓(xùn)練像素分類器，通過這種方式，像素處理器便有能力分析caspase介導(dǎo)的凋亡細胞比例。結(jié) 果 SPY-650-DNA（標(biāo)記細胞核）和CellEvent?（標(biāo)記caspase 3/7活性）兩種細胞染料的量化研究揭示了在活細胞實驗中發(fā)生caspase介導(dǎo)的凋亡細胞。細胞核的數(shù)量說明了每張圖像中細胞的數(shù)量，可與處于凋亡過程中細胞的數(shù)量相對應(yīng)。另一個標(biāo)記，即TMRE成像過程，揭示了線粒體活性。量化數(shù)據(jù)(如長度、寬度、面積)顯示在采集圖像下方的表格中，這些數(shù)據(jù)可被導(dǎo)出為Excel表格。獲取的圖像可以在延時成像的每一個時間點上查看，并可以與識別的ROI重疊。三色caspase 3/7活性檢測圖（圖4）顯示，細胞核信號在開始的時候增強，之后逐漸減弱。信號增強是因為核染色劑必須與DNA結(jié)合，這一結(jié)合過程需要一定的時間。另一方面，SPY-650-DNA信號減弱是因為細胞核解體，解體現(xiàn)象見相關(guān)圖像。其他信號要么隨時間增加而增強（CellEvent?），要么隨時間增加而減弱（TMRE）：caspase介導(dǎo)的凋亡細胞數(shù)量增加的同時激活狀態(tài)的線粒體數(shù)量減少。圖4：三色caspase 3/7活性檢測法量化研究。通過像素分類器檢測細胞核、TMRE和caspase陽性細胞，以確定在不同濃度的星形孢菌素下，隨著時間的推移發(fā)生caspase介導(dǎo)的凋亡的細胞數(shù)量。TMRE信號能反映線粒體的健康狀態(tài)。結(jié)果可以多種形式展示，比如時間序列圖。用戶可以通過MICA一次性對四種熒光成像。在caspase 3/7活性檢測法中，這有助于調(diào)查凋亡過程中額外的細胞成分的命運—實現(xiàn)100%時空相關(guān)性。圖5中展示的案例顯示，除了細胞核（DAPI）、激活狀態(tài)的線粒體（TMRE）以及caspase陽性細胞（CellEvent?）以外，也對肌動蛋白細胞骨架（SiR-Actin）進行了染色。高倍率下（63x），用戶能夠看到，caspase被激活之后，肌動蛋白細胞骨架坍塌。與此同時細胞核以及線粒體停止工作。因為所有通道都是在一次拍攝中獲得的，各細胞活動成像之間存在精確聯(lián)系。圖5：四色caspase-3/7檢測，用SiR-Actin、TMRE（線粒體活性）、CellEvent?（caspase活性）以及DAPI（細胞核）標(biāo)記U2OS細胞。在時間點0加入星形孢菌素。在63x高倍、寬場模式以及THUNDER（ICC）成像模式下獲得的圖像。結(jié) 論Caspase活性檢測法為研究抗癌藥物提供了新的見解。為了實現(xiàn)這一目標(biāo)，研究人員必須在保證高時空精準(zhǔn)度的情況下將活細胞從凋亡細胞中區(qū)分出來。對于統(tǒng)計上可靠的結(jié)果，增加量很有必要。這就是為什么這類實驗必須在孔板上進行，也必須進行量化研究。MICA滿足以上全部要求。在FluoSync的幫助下，MICA可同時保證多達4種不同的熒光染料可以同時成像，不論是在單一培養(yǎng)皿上，還是在96孔板上。MICA完整的培養(yǎng)系統(tǒng)能夠培育活細胞數(shù)日，同時其自帶的基于人工智能的分析功能也有助于用戶獲得可靠的數(shù)據(jù)。參考：FluoSync - a Fast & Gentle Method for Unmixing Multicolour Images, Science Lab, Leica Microsystems (leica-microsystems.com)