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2025-02-10 11:42:42曲妥珠單抗
曲妥珠單抗是一種重組DNA衍生的人源化單克隆抗體，可特異性地作用于人表皮生長因子受體2（HER2）的細(xì)胞外部位。它常用于治療HER2過度表達(dá)的轉(zhuǎn)移性乳腺癌，以及早期乳腺癌的輔助治療。雖然這與科學(xué)儀器無直接關(guān)聯(lián)，但科學(xué)儀器的進(jìn)步也促進(jìn)了生物醫(yī)藥領(lǐng)域的研究與發(fā)展。如有科學(xué)儀器相關(guān)問題，歡迎隨時(shí)向我提問。

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2023-06-09 11:39:07經(jīng)典磁珠一文解讀：AMPure XP純化實(shí)用技巧
基于SPRI技術(shù)的AMPure XP，采用超順磁磁珠幫助純化核酸片段，被廣泛應(yīng)用到NGS行業(yè)，PCR體系、酶切、連接反應(yīng)體系的純化。作為行業(yè)的“金標(biāo)準(zhǔn)“試劑盒，AMPure XP有哪些高頻Q&A問題呢？AMPure XP怎么純化長片段？怎么提高我的樣本得率？產(chǎn)物純度有什么優(yōu)化的方向嗎？我可以選擇純化250 bp的那一條條帶嗎？小貝總結(jié)了10條AMPure XP Q&A問題實(shí)用技巧：1、乙醇比例乙醇溶液必須至少70%。當(dāng)將100%乙醇稀釋至70%時(shí)，請確保在配置溶液合并之前分別測量水和乙醇的體積。用水補(bǔ)齊乙醇的稀釋方式會導(dǎo)致濃度低于預(yù)期。請確保存儲的乙醇在不使用時(shí)保持瓶蓋擰緊。2、充分的混合在最 初磁珠與樣品結(jié)合和洗脫混合期間，徹底的混合至關(guān)重要?？捎寐缘陀诳偪左w積的吸頭進(jìn)行混合。洗脫時(shí)，需要注意最 小洗脫體積（96孔規(guī)格為40 μL，384孔規(guī)格為15 μL），以確保磁珠充分重懸。還應(yīng)保持足夠的孵育時(shí)間，以確保核酸有足夠的時(shí)間與磁珠結(jié)合或解離。由于樣品的粘度，結(jié)合過程中的渦旋可能效率不高。3、大反應(yīng)體系大體積反應(yīng)可以采用更長的樣品&磁珠結(jié)合和磁分離時(shí)間?？蓪inding結(jié)合時(shí)間增加到10分鐘，并確保在棄上清液之前所有的磁珠均被充分磁分離。4、避免實(shí)驗(yàn)中磁珠損失如果在棄清液的過程中磁珠被吸入槍頭，結(jié)合在這些磁珠上的核酸則會在這個(gè)步驟損失掉。首輪移除上清時(shí)，緩慢輕柔地操作，盡可能多地移除清液，同時(shí)確保不會干擾磁珠在磁環(huán)/磁力架上的吸附。如果意外吸出磁珠，請將所有磁珠重新打回孔中，讓磁珠重新磁吸。隨后，再度移除上清，嘗試緩慢吸液或使用更細(xì)的槍頭。小體積樣品更容易受到磁珠損耗的影響，因?yàn)榇胖榭赡苓_(dá)不到孔中磁鐵的水平位置。5、大片段樣品的磁珠干燥10 kb以上的片段與磁珠結(jié)合非常緊密，如果樣品變干則難以洗脫。盡可能完全地棄掉最 后一次乙醇清洗液，立即加入洗脫緩沖液并充分混合。保持蓋子打開狀態(tài)，乙醇在洗脫孵育期間將繼續(xù)從孔中蒸發(fā)。6、低洗脫體積洗脫體積小會導(dǎo)致回收率降低。這是因?yàn)闀猩倭肯疵摼彌_液始終包覆在磁珠上。該體積取決于孔的形狀和孔中的磁珠量，因此較小的洗脫體積將導(dǎo)致相對較高比例的洗脫液殘留。7、當(dāng)你用紫外吸收法檢測回收率不只是PCR雙鏈產(chǎn)物，體系中過量的引物和核苷酸同樣產(chǎn)生吸收。因此測量未純化的PCR反應(yīng)，可能獲得高于實(shí)際PCR產(chǎn)物濃度的吸光度值。對比純化前后的吸收值，則會導(dǎo)致回收率看起來比實(shí)際低。小貝建議：在瓊脂糖凝膠上運(yùn)行等量的未純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物與純化后的PCR反應(yīng)產(chǎn)物（例如1/4的未純化PCR產(chǎn)物和1/4的洗脫液）以便檢查回收情況，或使用基于特異性熒光染料的測定，例如PicoGreen。8、引物的殘留AMPure XP試劑與PCR反應(yīng)混合后的試劑最 終濃度決定了PCR產(chǎn)物與磁珠結(jié)合的片段大小。AMPure XP主要結(jié)合> 100 bp的PCR產(chǎn)物，并丟棄小于50個(gè)堿基的引物。較大的引物和引物二聚體可以與磁珠結(jié)合。請確保您的PCR產(chǎn)物在循環(huán)過程中沒有蒸發(fā)導(dǎo)致體積變小，并添加正確體積的試劑（見下表）。確保用乙醇沖洗在混合和結(jié)合過程中樣品有接觸到孔內(nèi)壁的任何地方。如果在純化體系中存在過量的引物，減少該P(yáng)CR反應(yīng)的引物量也可以是一個(gè)優(yōu)化的方向。9、下游酶反應(yīng)效果不佳如果您的下游酶反應(yīng)對痕量乙醇極其敏感，請?zhí)砑觾煞昼姷谋Ｊ馗稍锊襟E。請注意，大片段會與磁珠緊密結(jié)合，在磁珠完全干燥后可能難以洗脫。10、如何選擇性保留200-500 bp核酸片段AMPure XP是用于PCR產(chǎn)物純化的試劑盒。對于片段篩選的應(yīng)用，請考慮使用 SPRIselect試劑盒。有關(guān) SPRIselect 片篩的更多信息，請?jiān)L問經(jīng)典磁珠一文解讀:NGS片段篩選比例計(jì)算
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2023-03-06 15:51:24HM&M珠磨機(jī)：與鹽野義制藥合作研發(fā)難溶性藥物所需的濕法珠磨機(jī)
全文共2144字，閱讀大約需要7分鐘鹽野義制藥的田中先生說“金屬污染物改革對產(chǎn)品化的品質(zhì)、安全性、規(guī)?；a(chǎn)產(chǎn)生了很大的影響”。近年來，許多藥物候選化合物顯示出難溶性的特質(zhì)，其有效的解決方法是通過珠磨機(jī)將藥物納米化。藥物納米化可以有效改善藥物生物利用度，藥物納米化已經(jīng)在基礎(chǔ)研究和商用生產(chǎn)中得到應(yīng)用。這里的問題是，傳統(tǒng)的珠磨機(jī)在結(jié)構(gòu)上不可避免地會產(chǎn)生鋯等金屬的磨損，從而污染到產(chǎn)品。能解決這個(gè)問題的研究報(bào)告很少。于是，鹽野義制藥開始著手與廣島金屬公司共同研究和開發(fā)用于解決難溶性藥物在研磨時(shí)引入污染物這一問題的新型珠磨機(jī)。闡明各種參數(shù)的影響，探索最 優(yōu)條件納米制劑制造的要求事項(xiàng)設(shè)置了以下5點(diǎn)：1、粉碎后粒子粒徑 :＜200 nm2、處理速度:幾十分鐘~幾個(gè)小時(shí)3、金屬污染的極小化（金屬污染物含量控制）：處理過程中料液：＜1 mg/L，原料藥：＜10 μg/g4、不引起變質(zhì)的處理溫度：＜ 30℃（優(yōu)選＜10℃）5、易于清洗：機(jī)器拆洗容易珠磨機(jī)通過攪拌使磨珠與目標(biāo)粒子在料液內(nèi)碰撞而粉碎、分散。我們的目的是抑 制在此過程中因磨珠碰撞而產(chǎn)生的污染。納米制劑制造注意事項(xiàng)的①、②、③與磨珠粒徑和圓周速度（轉(zhuǎn)速）有關(guān)，為了達(dá)到事項(xiàng)②對處理速度的要求，選擇“高速運(yùn)轉(zhuǎn)/小、中粒徑珠子”是合適的。為了達(dá)到事項(xiàng)③對污染物的控制，需要選擇“低速運(yùn)轉(zhuǎn)/小粒徑珠子”。我們探索能在不降低效率的情況下減傷磨珠污染的技術(shù)解決方案。為了達(dá)成要求事項(xiàng)的技術(shù)性討論磨珠粒徑：當(dāng)磨珠粒徑變小時(shí)，與粒子接觸的頻率會增加，處理速度能更快；磨珠粒徑變大，沖擊力會增強(qiáng)，引入污染物的概率會更大。因?yàn)檫@樣的關(guān)系，所以選取具有短時(shí)間處理能力、污染物引入少的最 佳磨珠粒徑。圓周速度（轉(zhuǎn)速）圓周速率（轉(zhuǎn)速）越高，磨珠間接觸的頻率和沖擊力會上升，一方面污染量隨著轉(zhuǎn)速的升高而急劇增加，以一定速度急劇增加，另一方面，處理速度與圓周速率呈正比例關(guān)系。我們需要在污染量較少的情況選擇最 快的處理速度。藥物濃度從粒徑變化、污染量確認(rèn)的觀點(diǎn)出發(fā)，在5～50w/w%的范圍內(nèi)進(jìn)行了變更實(shí)驗(yàn)。裝置結(jié)構(gòu)考慮了在珠磨機(jī)中抑 制沖擊力的低速運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)的磨珠行為。研究的結(jié)果是，在臥式結(jié)構(gòu)中，磨珠無法貫穿整個(gè)研磨腔體，可能會排除未經(jīng)處理的漿料，從而降低處理效率。在立式結(jié)構(gòu)中，通過采用重力下降的方式，漿料可以可靠地通過磨珠聚集到磨機(jī)底部，不會出現(xiàn)漿料無法排出的情況。因此，珠磨機(jī)結(jié)構(gòu)上選擇了能使料液從上往下流轉(zhuǎn)的狹縫型立式珠磨機(jī)。機(jī)械密封所謂機(jī)械密封，是指在機(jī)體上一種防止料液泄露或從外部引入污染物的軸封裝置。通過密封液最 小化內(nèi)外壓，抑 制滑動部分微米級間隙的泄漏。但是，這種設(shè)計(jì)存在著密封件自身損壞、引入污染物、清潔靈活性差等問題。為此，開發(fā)了無需密封液的密封結(jié)構(gòu)，降低了從密封部分帶來污染的風(fēng)險(xiǎn)和提高清潔效率。其他通過各種比較，選擇了韌性高、污染性小的氧化鋯材質(zhì)磨珠。在攪拌轉(zhuǎn)子設(shè)計(jì)上，比較鞘式和盤式，最 后選擇了能夠在系統(tǒng)內(nèi)均勻攪拌，且能夠在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行粉碎、分散處理的鞘形。低速運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)處理效率是常規(guī)的1.8倍。在上述條件的基礎(chǔ)上，將難溶解性的苯妥英作為模型藥物，展示了最 優(yōu)化處理?xiàng)l件的案例。使用多種藥物濃度的料液進(jìn)行粉碎后，主藥濃度在40w /w%之前，金屬污染量基本沒有受到影響。當(dāng)濃度高于該濃度時(shí)，料液的粘度顯著增加，粉碎效率降低，污染量也增大。與傳統(tǒng)的5 w/w%處理相比，40 w/w%處理的污染量提高了1/8，生產(chǎn)效率提高了8倍。另外，研究了無密封液的影響，沒有發(fā)現(xiàn)對苯妥因粒子粒徑變化和粉碎效率的影響。密封材料鎢、鎳的污染量為零，避免了污染風(fēng)險(xiǎn)。圖1總結(jié)了通過3年的共同研究降低污染量的成果。通過逐一解析各種參數(shù)對比珠磨機(jī)產(chǎn)生污染的影響并進(jìn)行優(yōu)化，將料液污染量降低到0.73 mg/ L。此外，圖2總結(jié)了原料藥的處理時(shí)間和每克原料藥的接觸時(shí)間。處理速度按濃度換算提高了1.6倍，污染量也成功地大幅降低為1.6 μg/g目標(biāo)值，約為現(xiàn)有技術(shù)的1/30。抑 制污染量和高效化的重要參數(shù)有磨珠直徑和圓周速率（轉(zhuǎn)速）。粉碎效率和污染量兩者需要權(quán)衡。對填充率和藥物濃度也進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)影響很小。由此，得出結(jié)論，最 佳條件為珠徑：0.5 mm以下的小粒徑到中等粒徑，周速：6 m/s以下的低速到中速，濃度為40 w/w%。另外，處了把苯妥因作為模型藥物進(jìn)行了檢驗(yàn)，其他的難溶解性藥物在相同條件下也實(shí)施了粉碎的結(jié)果，粉碎可以達(dá)到200nm。特別是，對低熔點(diǎn)的藥物，也可以適用，如以前的技術(shù)難以粉碎的非諾貝特，顯示了本技術(shù)的進(jìn)一步適用性。一體式無密封珠磨機(jī)《APEX磨機(jī)F&M系列》通過本共同研究開發(fā)的是一體式無密封珠磨“APEX磨F&M系列”。通過無密封，實(shí)現(xiàn)了來自機(jī)械密封的金屬污染零為零、密封液的混入為零、省略了由于機(jī)械密封的損傷而定期整備、裝置的緊湊化，組裝和分解容易，可實(shí)現(xiàn)浸泡放置清洗。此外，電動機(jī)直接連接旋轉(zhuǎn)軸，取消了V帶，防止了V帶產(chǎn)生磨損粉末。以前，機(jī)械密封所承擔(dān)的防珠漏是通過使用下降流和在磨機(jī)上部安裝泵送環(huán)來解決的。從150 mL的實(shí)驗(yàn)機(jī)到2 L的生產(chǎn)機(jī)。無密封技術(shù)正在申請實(shí)用新型和專 利。廣島金屬與機(jī)械公司從1983年開始生產(chǎn)銷售濕珠磨機(jī)。技術(shù)研究開發(fā)越來越深入。平田先生以高品質(zhì)納米粒子醫(yī)藥品制造技術(shù)的領(lǐng)先企業(yè)為目標(biāo)，滿懷干勁地表示將進(jìn)一步開展技術(shù)拓新。
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2023-08-09 13:42:02低至3折 | Clean NGS高通量測序產(chǎn)物純化及片段篩選磁珠限時(shí)促銷
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2023-08-05 18:35:44通過 dLAMP-on-a-chip 的微流體分步乳化，無泵且高通量地生成單分散水凝膠珠。
FluoSurf 4%(w/w) in HFE7500表面活性劑連續(xù)油相4% (w/w) FluoSurf premixed in HFE 7500 was donated by Emulseo (France) and used for initial optimization experiments.通過 dLAMP-on-a-chip 的微流體分步乳化，無泵且高通量地生成單分散水凝膠珠。階梯乳化（Step emulsification - SE）通過限制的急劇變化產(chǎn)生液滴，已成為流動聚焦技術(shù)的潛在替代方案。 水/分散相通過淺入口通道連續(xù)泵入預(yù)先填充有油/連續(xù)相的深室中。 由于需要一個(gè)或多個(gè)泵來維持液滴生成的連續(xù)流動，以及隨之而來的高樣本量的使用，限制了該技術(shù)僅適用于研究實(shí)驗(yàn)室。 在這里，我們報(bào)告了一種無泵 SE 技術(shù)，可使用
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2022-07-04 17:35:41高通量冷凍研磨儀對樣品前處理時(shí)如何選擇研磨珠？
　　研磨珠對樣品研磨來說是不可或缺的一類耗材應(yīng)用，但對磨珠的選擇也切不可忽視。由于磨球的直徑、材質(zhì)等不同，對樣品的研磨效果也有不同，因此在樣品前處理實(shí)，對磨球的選擇還是很重要的?！　「咄坷鋬鲅心x在被應(yīng)用研磨時(shí)，其對研磨珠和樣品的準(zhǔn)備通常在5:1左右，磨球和試品的體積不能超過球磨罐體積的百分之80，通常在百分之40到百分之60之間較佳?！　　　≡谶x擇應(yīng)用磨球時(shí)，通常會根據(jù)磨球的直徑來進(jìn)行選擇；當(dāng)磨球的直徑3mm到40mm的范圍內(nèi)去選擇。通常，研磨珠通過直徑大小可分為大、中、小三個(gè)規(guī)格的磨球，大磨球可產(chǎn)生更大的動能，使樣品可迅速破碎，小磨球可提高樣品研磨的密度和一致性?！　　　≡跇悠非疤幚磉^程中，不僅要選擇球磨罐的應(yīng)用，還要選擇研磨珠的應(yīng)用，但不同材料的球磨罐匹配的磨球也不同。在使用聚氨酯材料的球磨罐時(shí)，是可以與瑪瑙磨球、氧化鋯、氧化鋁等磨球一起使用；在使用聚合物聚乙烯球磨罐時(shí)，是可與氧化鋁、氧化鋯和瑪瑙磨球一起應(yīng)用；在使用聚四氟乙烯球磨罐時(shí)，是可與氧化鋯、氧化鋁、瑪瑙磨球一起應(yīng)用；在使用聚丙烯球磨罐時(shí)，是可與氧化鋯、瑪瑙磨球、氧化鋁等一起應(yīng)用；在使用尼龍球磨罐時(shí)，是可與不銹鋼板、氧化鋯、氧化鋁、瑪瑙磨球等一起研磨應(yīng)用的?！　≡谑褂酶咄坷鋬鲅心x開展樣品的研磨實(shí)驗(yàn)時(shí)，不但要牢記掌握研磨機(jī)的使用技巧，還要能夠正確的選擇出所需應(yīng)用的耗材等，使用不同直徑大小的磨球或不同規(guī)格的磨球，對樣品的研磨處理效果都會不相一致，甚至有時(shí)還會影響到樣品的研磨效果，所以對磨球的正確選擇是很重要的一個(gè)選擇應(yīng)用哦！
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